紫外分光光度法測定復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑中總酚的含量

唐勇琛 李擁軍 張亞洲

【摘?要】目的：建立復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑中總酚的含量測定方法。方法：采用紫外分光光度法，以沒食子酸為對(duì)照品，在波長760 nm處對(duì)復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑中總酚進(jìn)行含量測定。結(jié)果：回歸方程為C=270.872 A-8.286（r =0.9996），總酚的檢測濃度在25.1～200.8 μg范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系，平均回收率101.59%，RSD為0.82%（n=9）。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑中總酚的含量測定。

【關(guān)鍵詞】復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑;總酚;紫外分光光度法;含量測定

【中圖分類號(hào)】R284.1?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A?【文章編號(hào)】1007-8517（2019）19-0034-03

Abstract： Objictive To establish the method for determination of total Polyphenol in Fufang tongfeng Granules by UV-Spectrophotometry. Methods The total Polyphenol in Fufang tongfeng Granules was tested at the wavelength of 760 nm with UV-Spectrophotometry by using Gallic acid as standard substance. Results The linear range of Gallic acid was 25.1～200.8 μg（r=0.9996），The average recovery was 101.59%， RSD was 0.82%（n=9）.Conclusion The method is simple 、accurate、reproducible and can be suitable for content determination of Fufang tongfeng Granules.

Key?words：Fufang tongfeng Granules; total Polyphenol ; UV-Spectrophotometry; content determination

復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑是廣西柳州市中醫(yī)院通過臨床實(shí)踐研制出的純中藥制劑，由白術(shù)、紫蘇梗、薏苡仁、車前子、枇杷葉等5味中藥組成。臨床觀察證明了能促進(jìn)尿酸排泄，廣泛用于痛風(fēng)的輔助治療。方中白術(shù)健脾燥濕，健運(yùn)中焦，散精于肺為君;紫蘇梗寬胸利膈，解魚蟹毒，增強(qiáng)中焦運(yùn)化為臣;薏苡仁、車前子利濕化濁，助尿酸從膀胱排除為佐;枇杷葉肅降肺氣，讓精氣得于正常運(yùn)行為使;諸藥合用共奏健脾肅肺、利濕化濁之功。方中藥材紫蘇梗、枇杷葉含有大量酚酸類化合物，且具有抗氧化、抗血小板活性、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗菌抗炎、保肝和促進(jìn)尿酸排泄作用等[1-2]。為了更好的控制其質(zhì)量，本文采用紫外分光光度法[3-7]對(duì)復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑中的總酚進(jìn)行含量測定，為更深入研究復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑提供依據(jù)。

1?儀器與試藥

1.1?儀器?TU-1901紫外可見分光光度儀（北京普析通用儀器有限公司）;BSA124S分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）;KQ-300DB型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）;KDM可調(diào)控溫電熱套（山東鄄城科源儀器設(shè)備廠）;HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）;DH64型電熱恒溫干燥箱（上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠）;LK-1000A型搖擺式高速中藥粉碎機(jī)（浙江溫嶺市創(chuàng)力藥材器械廠）。

1.2?試藥?沒食子酸對(duì)照品（批號(hào)：110831-201605，中國食品藥品檢定研究院）;復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑（批號(hào)：20161013、20161014、20161015，柳州市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部自制）;無水碳酸鈉（分析純，批號(hào)：20161024，秦皇島市化學(xué)試劑廠）， 鎢酸鈉（分析純，批號(hào)：20130710，天津市大茂化學(xué)試劑廠）， 鉬酸鈉（分析純，批號(hào)：20150117，天津市化學(xué)試劑四廠），硫酸鋰（分析純，批號(hào)：20130825，重慶東方試劑廠）;乙腈（色譜純，批號(hào)：20180912，成都科龍?jiān)噭┯邢薰荆?甲醇（色譜純，批號(hào)：20180820，成都科龍?jiān)噭┯邢薰荆?磷酸（分析純，批號(hào)：20160913，北京化工廠）;水為娃哈哈純凈水。

2?方法和結(jié)果

2.1?磷鉬鎢酸試液的制備?取鎢酸鈉100 g，鉬酸鈉25 g，加水700 mL使溶解，加鹽酸100 mL、磷酸50 mL，加熱回流10 h，放冷后現(xiàn)加硫酸鋰150 g，水50 mL和溴0.2 mL，煮沸除去殘留的溴（約15 min），冷卻，加水稀釋至1000 mL，濾過，即得。

2.2?對(duì)照品溶液的制備?精密稱取沒食子酸對(duì)照品25.2 mg，置25 mL的棕色量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取5 mL，置100 mL的棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。（每mL中含沒食子酸0.0504 mg）

2.3?供試品溶液的制備?精密稱取樣品復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑約1 g，置100 mL棕色量瓶中，加水適量，放置30 min，振搖，超聲處理30 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4?檢測波長的確定?吸取一定量的沒食子酸對(duì)照品溶液在280～800 nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，沒食子酸對(duì)照品和供試品的最大吸收峰位一致，均在760 nm波長處有最大吸收，故本試驗(yàn)選用760 nm作為檢測波長。

2.5?線性關(guān)系考察?精密量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置25 mL的棕色量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1 mL，再分別加水11.5、11、10、9.0、8、7 mL，用29% 的碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30min（以相應(yīng)的試劑為空白），照紫外—可見分光光度法在760 nm的波長處測定吸光度（A），以溶液濃度（C）（μg）對(duì)吸光度（A）進(jìn)行線形回歸，得線形回歸方程：C =270.872 A-8.286（r =0.9996），線形范圍：25.1～200.8 μg 時(shí)線性關(guān)系良好。

2.6?精密度試驗(yàn)?精密吸取同一對(duì)照品溶液（濃度50.2 μg/mL）2 mL，置25 mL棕色量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1 mL”起，加水9 mL，重復(fù)測定吸光度6次（以相應(yīng)的試劑操作為空白）。結(jié)果RSD=0.20%（n=6），表明精密度良好。

2.7?重復(fù)性試驗(yàn)?精密稱取樣品復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑粉末（批號(hào)：20161013）約1 g，平行6份，加水適量，放置30 min，振搖，超聲處理30 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。按“2.5”項(xiàng)下方法測定吸光度A，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量（mg）。結(jié)果平均含量為1.15%，RSD=0.65% （n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.8?穩(wěn)定性試驗(yàn)?精密吸取同一重復(fù)性試驗(yàn)的供試品（批號(hào)20161013）溶液，分別在不同時(shí)間（0、1、2、4 h）測定，考察供試品溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果平均吸光度為0.442，RSD=0.29%，表明樣品總酚測定在4 h內(nèi)基本保持穩(wěn)定。

2.9?回收率試驗(yàn)?分別精密稱取上面重復(fù)性試驗(yàn)復(fù)方痛風(fēng)顆粒樣品（樣品中總多酚含量1.15%）9份各500 mg，精密加入其樣品總多酚含量的75%、100%、125%的沒食子酸對(duì)照品溶液（精密稱取沒食子酸對(duì)照品50.1 mg至50 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度1.002 mg/mL），加水適量，放置30 min，振搖，超聲處理30 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。測定吸光度（A），從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量（mg），計(jì)算加樣回收率。由表1可知，平均回收率為101.59%，RSD為0.82%（n=9），回收率良好。

2.10?樣品的含量測定?精密吸取3批復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑約1 g，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.5”項(xiàng)下方法進(jìn)行測定，用外標(biāo)法計(jì)算復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑總多酚含量（以沒食子酸計(jì)）。結(jié)果見表2。

3?討論

復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑是由白術(shù)、紫蘇梗、薏苡仁、車前子、枇杷葉5味中藥組成，通過多酚檢測發(fā)現(xiàn)總多酚含量較高，可作為復(fù)方檢測指標(biāo)，且方中紫蘇梗、枇杷葉中均含有一定量的多酚類化合物，具有抗氧化、抗血小板活性、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗菌抗炎、保肝和促進(jìn)尿酸排泄作用等[1～2]。目前對(duì)復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑中總酚酸的提取和含量測定無相關(guān)報(bào)道，本研究建立了測定復(fù)方痛風(fēng)顆粒劑中總酚酸含量的紫外分光光度法，為提高其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

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（收稿日期：2019-07-10?編輯：劉斌）