山茱萸多糖對(duì)匹魯卡品致癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及機(jī)制

宋小娜 陳博 宋彥 李永格

【摘?要】目的：研究山茱萸多糖對(duì)癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及其可能機(jī)制。方法：將雄性SD大鼠30只隨機(jī)分為對(duì)照組、癲癇模型組、山茱萸多糖干預(yù)組，各組10只。對(duì)照組采取常規(guī)飼養(yǎng)，不建立癲癇模型;模型組建立癲癇模型，常規(guī)飼養(yǎng);山茱萸多糖干預(yù)組在建立癲癇模型后，采用0.28 g/kg山茱萸多糖灌胃，持續(xù)灌胃14 d。14 d后分別對(duì)3組大鼠行morris水迷宮測試。測試完成后，取海馬組織，測定海馬組織內(nèi)SOD、MDA和GSH-PX含量。結(jié)果：與對(duì)照組比較，模型組大鼠逃避潛伏期時(shí)間明顯延長（P<0.05）;與模型組比較，山茱萸多糖干預(yù)組大鼠逃避潛伏期時(shí)間明顯縮短（P<0.05）。與對(duì)照組比較，模型組大鼠平臺(tái)象限路徑百分比與平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯縮短（P<0.05）;與模型組比較，山茱萸多糖干預(yù)組大鼠平臺(tái)象限路徑百分比與平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯延長（P<0.05）。與對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬組織SOD、GSH-PX含量明顯降低（P<0.05），MDA含量明顯升高（P<0.05）;與模型組比較，山茱萸多糖干預(yù)組大鼠SOD、GSH-PX含量明顯升高（P<0.05），MDA含量明顯降低（P<0.05）。結(jié)論：山茱萸多糖具有提高癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用，其機(jī)制可能是通過抗氧化作用來實(shí)現(xiàn)的。

【關(guān)鍵詞】?山茱萸多糖;癲癇;學(xué)習(xí)記憶;氧化應(yīng)激

【中圖分類號(hào)】R543?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A?【文章編號(hào)】1007-8517（2019）17-0013-03

癲癇是腦部神經(jīng)元異常放電所導(dǎo)致的大腦功能失調(diào)，流行病學(xué)調(diào)查資料顯示，其患病率為4‰～10‰，約有病人5千萬，其中難治性癲癇約占20%[1]。難治性癲癇患者中以顳葉癲癇最為常見，表現(xiàn)為自發(fā)性反復(fù)癇性發(fā)作，導(dǎo)致不同程度的學(xué)習(xí)和記憶功能障礙[2]。因此，積極尋找改善癲癇患者學(xué)習(xí)記憶能力的方法顯得尤為重要。癲癇的具體發(fā)病機(jī)制不清，氧化應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞死亡在癲癇的產(chǎn)生中起重要作用[3]。山茱萸為山茱萸科植物山茱萸（Cornus officinalis Sieb.et Zucc）的干燥成熟果肉，于秋末冬初成熟，別名山萸肉、蜀棗、石棗、萸肉、棗皮、藥棗等，味酸澀，性味酸澀，有固虛脫、澀精氣、補(bǔ)肝腎的功效，為我國傳統(tǒng)珍貴的滋補(bǔ)良藥，臨床上主要用于肝腎功能不全導(dǎo)致的腰酸背痛、乏力以及元?dú)馓撁撘鸬男募隆⒈I汗等[4]。山茱萸多糖為中藥山茱萸中提取的有效成份之一，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗休克、降血糖、抗氧化、抗衰老等多方面的作用[5]，研究發(fā)現(xiàn)其具有提高多種疾病學(xué)習(xí)記憶能力的作用[6-7]，但是否能夠提高難治性癲癇患者的學(xué)習(xí)記憶水平，還未見相關(guān)報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)擬通過建立鋰-匹魯卡品誘導(dǎo)大鼠癲癇模型，應(yīng)用morris水迷宮檢測山茱萸多糖對(duì)癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，從氧化應(yīng)激角度分析其作用的可能機(jī)制。

1?材料和方法

1.1?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物?健康清潔級(jí)S-D大鼠30只，雄性，體重200～300 g左右，購于河南省醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心，編號(hào)：201861035。分組飼養(yǎng)，室溫控制在20～25 ℃，空氣濕度控制在50%～55%，飲食與飲水均標(biāo)準(zhǔn)化供給，所有實(shí)驗(yàn)大鼠均適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后開始建模。

1.2?藥品和試劑?山茱萸多糖（南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)，臨用前用蒸餾水配制成0.05 g/mL）;匹魯卡品（批號(hào)：17023654，Sigma公司）;超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）皆購自于南京建成生物公司，試劑批號(hào)皆為20180713。

1.3?儀器?WMT-100型Morris水迷宮（四川成都儀器廠）;UV-2501分光光度計(jì)（日本島津）。

1.4?方法

1.4.1?顳葉癲癇模型建立?采用經(jīng)典氯化鋰-匹魯卡品癲癇模型制備，參考文獻(xiàn)[8]，具體方法如下：首先腹腔注射127 mg/kg的氯化鋰，12 h后腹腔注射10 mg/kg阿托品，30 min后腹腔注射100 mg/kg匹魯卡品。如果大鼠癲癇持續(xù)發(fā)作超過1 h，或者出現(xiàn)嚴(yán)重抽搐則需要腹腔注射苯巴比妥至癲癇發(fā)作停止。根據(jù)經(jīng)典發(fā)作標(biāo)準(zhǔn)，癲癇發(fā)作在Ⅳ級(jí)以上，且發(fā)作停止后狀態(tài)良好，癲癇模型大鼠制備成功。

1.4.2?分組?30只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、癲癇模型組、山茱萸多糖干預(yù)組，各組10只。對(duì)照組采取常規(guī)飼養(yǎng)，不建立癲癇模型;模型組建立癲癇模型，常規(guī)飼養(yǎng);山茱萸多糖干預(yù)組在建立癲癇模型后，采用0.28 g/kg 山茱萸多糖灌胃，持續(xù)灌胃14 d。

1.4.3?Morris水迷宮檢測?灌胃14 d后，Morris水迷宮檢測所有大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，具體方法參考文獻(xiàn)[6]。

1.4.4?氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)測定?水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即處死大鼠，快速在冰面分離大鼠海馬組織，用生理鹽水將取出的海馬組織制成10%勻漿，-80 ℃保存。嚴(yán)格按照試劑盒使用說明，采用化學(xué)比色法檢測海馬組織中SOD、MDA和GSH-PX含量。

1.5?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?采用SPSS 18.0分析處理數(shù)據(jù)。各組數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，計(jì)量資料采用（x±s）表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)

2.1.1?水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果?與對(duì)照組比較，模型組大鼠逃避潛伏期時(shí)間明顯延長（P<0.05）;與模型組比較，山茱萸多糖干預(yù)組大鼠逃避潛伏期時(shí)間明顯縮短（P<0.05）。見表1、圖1。

2.1.2?水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)?與對(duì)照組比較，模型組大鼠平臺(tái)象限路徑百分比與平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯縮短（P<0.05）;與模型組比較，山茱萸多糖干預(yù)組大鼠平臺(tái)象限路徑百分比與平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯延長（P<0.05）。見表2。

2.2?海馬組織SOD、MDA、GSH-PX含量測定?與對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬組織SOD、GSH-PX含量明顯降低（P<0.05），MDA含量明顯升高（P<0.05）;與模型組比較，山茱萸多糖干預(yù)組大鼠SOD、GSH-PX含量明顯升高（P<0.05），MDA含量明顯降低（P<0.05）。

3?討論

顳葉癲癇為難治性癲癇中最常見的一種類型，氯化鋰-匹魯卡品致癇大鼠模型是公認(rèn)的最接近人類顳葉癲癇的動(dòng)物模型[9]。70%顳葉癲癇患者都會(huì)伴隨不同程度的學(xué)習(xí)記憶功能障礙[2]。Morris水迷宮是目前世界公認(rèn)的較為客觀的學(xué)習(xí)記憶功能評(píng)價(jià)方法，主要包括：定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)。通過本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較模型組大鼠逃避潛伏期時(shí)間明顯延長、平臺(tái)象限路徑百分比與平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯縮短（P<0.01），提示癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力水平明顯下降;而與模型組比較，山茱萸多糖干預(yù)組逃避潛伏期時(shí)間明顯縮短（P<0.01）、平臺(tái)象限路徑百分比與平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯延長（P<0.05或P<0.01），提示山茱萸多糖明顯提高癲癇大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力水平。

氧化應(yīng)激是癲癇發(fā)病機(jī)制中的重要過程。文獻(xiàn)報(bào)道匹魯卡品誘導(dǎo)的癲癇發(fā)作引起海馬、紋狀體等部位脂質(zhì)過氧化物和NO含量升高，且在癲癇發(fā)生的早期出現(xiàn)SOD活力的下降[10]，從而導(dǎo)致海馬神經(jīng)元損傷。SOD與GSH-PX為腦組織內(nèi)天然的抗氧化酶，具有清除自由基的作用，SOD與GSH-PX含量越低，自由基含量越高，腦內(nèi)細(xì)胞氧化損傷越嚴(yán)重。MDA為自由基過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，具有細(xì)胞毒性，加劇細(xì)胞膜的損傷[11]，MDA含量越高細(xì)胞膜氧化應(yīng)激損傷越嚴(yán)重。研究結(jié)果表明癲癇大鼠SOD與GSH-PX含量降低（P<0.01）、MDA含量明顯升高（P<0.01），提示癲癇大鼠海馬組織內(nèi)產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)。山茱萸為臨床上廣為使用的名貴中藥，其有效成分多糖具有強(qiáng)抗氧化作用。通過本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)通過山茱萸多糖干預(yù)作用后，癲癇大鼠SOD、GSH-PX含量明顯升高（P<0.05），MDA含量明顯降低（P<0.05），提示山茱萸多糖對(duì)癲癇大鼠具有抗氧化作用。

因此，山茱萸多糖具有提高癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用，其機(jī)制可能是通過抗氧化作用來實(shí)現(xiàn)的。

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（收稿日期：2019-06-26?編輯：程鵬飛）