三種梅毒螺旋體抗體檢測(cè)方法的應(yīng)用分析

劉長秀 李靜 趙辰娜

人類是梅毒螺旋體（TP）的唯一宿主，梅毒螺旋體可通過性傳播、母嬰傳播、血液傳播。人體感染梅毒螺旋體可造成多系統(tǒng)多臟器損害，對(duì)健康造成巨大危害。臨床上選擇敏感性高、特異性強(qiáng)的檢測(cè)方法對(duì)及時(shí)診斷和治療梅毒具有很重要的意義［1］。當(dāng)前，有多種實(shí)驗(yàn)室的方法可用于梅毒的診斷，血清學(xué)方法依然是梅毒螺旋體診斷的主要方法，常見的血清學(xué)檢測(cè)方法包括非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（TRUST、RPR）和梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（CMIA、TPPA、ELISA和RT）［2］。如果非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)同時(shí)為陽性時(shí)，可以診斷為現(xiàn)癥梅毒或見于部分晚期梅毒治愈后的病人；如果非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)陰性、梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)陽性，可出現(xiàn)以下三種情況：①極早期梅毒；②既往感染；③早期梅毒治愈后；如果非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)陽性、梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)陰性，考慮梅毒血清學(xué)假陽性。在妊娠過程中發(fā)現(xiàn)的梅毒稱妊娠梅毒，此時(shí)TP可通過胎盤或臍靜脈傳給胎兒，讓所生嬰兒患先天梅毒。梅毒孕婦極易出現(xiàn)流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎。妊娠合并梅毒患者必須要進(jìn)行規(guī)范化治療，在孕期盡早開始治療一療程，孕晚期再次治療一療程，對(duì)于既住感染的孕婦應(yīng)立即給予一個(gè)療程的治療。鑒于我國近年來妊娠合并梅毒報(bào)告病例數(shù)越來越多［3］，因此采用高敏感性和高特異性的檢驗(yàn)方法對(duì)于該病的確診和治療具有重要意義。本研究運(yùn)用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法（CMIA）、明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）、甲苯胺紅血清不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）三種血清學(xué)檢測(cè)方法，對(duì)梅毒患者的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，旨在為梅毒臨床診斷檢測(cè)方法的選擇提供參考，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

材料與方法

一、材料

2018年1月1日至2018年10月31日9 480例梅毒螺旋體抗體檢測(cè)樣本，其中女性8 080例，男性1 400例；孕婦5 526例，非孕婦3 954例。

二、儀器與試劑

CMIA檢測(cè)采用AutoLumoA2000 Plus全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀及配套的梅毒螺旋體試劑盒和質(zhì)控品，TPPA法采用珠海麗珠試劑盒，TRUST法采用上海榮盛試劑盒，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

三、檢測(cè)方法

1.CMIA法：采用雙抗原夾心法進(jìn)行檢測(cè)，用TP抗原包被磁微粒，辣根過氧化物酶標(biāo)記TP抗原制備酶結(jié)合物，通過免疫反應(yīng)形成抗原-抗體-酶復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強(qiáng)度與TP抗體的含量成正比。

2.TPPA法：將梅毒螺旋體（Nichols株）的精制菌體成分包被在人工載體明膠粒子上。這種致敏粒子和樣品中的梅毒螺旋體抗體進(jìn)行反應(yīng)發(fā)生凝集，產(chǎn)生粒子凝集反應(yīng)，由此可以檢測(cè)出血清和血漿中的梅毒螺旋體抗體，并且可用來測(cè)定抗體效價(jià)。

3.TRUST法：采用VDRL抗原重懸于含有特制的甲苯胺紅溶液中制成，供在白色卡片上進(jìn)行試驗(yàn)，以檢測(cè)血清或血漿中反應(yīng)素用，可作為梅毒病人的診斷和療效之參考。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

9 480例梅毒螺旋體抗體磁微?；瘜W(xué)發(fā)光（CMIA）檢測(cè)結(jié)果顯示，TP抗體陽性214例，其中194例TPPA確認(rèn)為陽性，CMIA和TPPA進(jìn)行比較，假陽性率0.21%，陽性預(yù)測(cè)值90.6%，CMIA的S／CO值越大，TP確認(rèn)率越高，S／CO值＜5的陽性標(biāo)本確認(rèn)率僅為50.0%，S／CO值＞9的標(biāo)本，陽性確認(rèn)率為98.3%（表1）。比較各S／CO組TPPA獲得陽性率，S／CO值＝7～9和＞9的兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。對(duì)于CMIA篩查陽性的，TPPA陰性的20例人員進(jìn)行隨訪，13例生產(chǎn)三月后CMIA和TPPA均檢測(cè)為陰性，2例新生兒和1例兒童一月后CMIA和TPPA均檢測(cè)為陰性，2例人流術(shù)后三月CMIA和TPPA均檢測(cè)為陰性，1例老年婦女半年后仍然為CMIA陽性，TPPA陰性，還有一例失去聯(lián)系，未繼續(xù)隨訪。9 480例梅毒螺旋體抗體檢查結(jié)果顯示，孕期的假陽性率為0.27%，非孕期的假陽性率為0.13% （P＝0.114）（表2），這些結(jié)果表明孕期的假陽性率比起非孕期更高，但這些差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。9 480例樣本中，TPPA陽性194例，TRUST陽性46例（均未曾治療）。經(jīng)過規(guī)范治療后，TPPA轉(zhuǎn)陰0例，TRUST轉(zhuǎn)陰44例，其中有2例雖未轉(zhuǎn)陰，但TRUST滴度分別從1∶64和1∶32降至1∶1，這些數(shù)據(jù)表明，TRUST的滴度檢測(cè)對(duì)于梅毒的診斷和療效評(píng)價(jià)有重要的臨床意義。

表1 194例TPPA陽性樣本在CMIA法不同S／CO值組的分布

表2 孕期與非孕期假陽性率的差異

討 論

CMIA為梅毒螺旋體特異性抗體定性檢測(cè)試驗(yàn)，臨界值為1，檢測(cè)結(jié)果S／CO＜1為梅毒螺旋體特異性抗體陰性，檢測(cè)結(jié)果S／CO≥1為梅毒螺旋體特異性抗體陽性，陽性樣本需加做非梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)（TRUST），如果非梅毒螺旋體特異性抗體（TRUST）為陽性，再進(jìn)一步檢測(cè)非梅毒螺旋體特異性抗體（TRUST）滴度，對(duì)于梅毒的診斷和療效的觀察有重要的臨床意義。梅毒螺旋體特異性抗體（CMIA）出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，要用TPPA復(fù)檢，報(bào)告結(jié)果要綜合考慮患者的年齡、病史以及臨床表現(xiàn)，如果兩者均為陽性才可給出陽性報(bào)告，這樣可大大減少假陽性的發(fā)生［4］。CMIA陽性結(jié)果的S／CO值＜5的陽性標(biāo)本確認(rèn)率僅為50%，而S／CO值＞9的標(biāo)本，TPPA 確認(rèn)率為98.3%。CMIA 陽性結(jié)果的S／CO值越大，TPPA的確認(rèn)陽性符合率也相應(yīng)增加，該結(jié)果符合先前的研究報(bào)道［5］。某些疾病（如惡性腫瘤、心血管疾病、肝炎、自身免疫性疾病等）患者體內(nèi)含有異嗜性抗體、自身抗體、類風(fēng)濕因子、甲胎蛋白等，這些物質(zhì)會(huì)與試劑中的抗原成分非特異結(jié)合，產(chǎn)生假陽性［6］；還有一些特殊人群（如孕婦、嬰幼兒、老年人）因?yàn)樯砗兔庖叩囊蛩?，產(chǎn)生的抗體和蛋白質(zhì)也易導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽性［7］，因此要考慮患者的年齡、病史、臨床信息等進(jìn)行綜合分析。