MicroRNA-124對喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞自噬、侵襲和遷移的影響

魯保才，李 靖，郜慶祖，余文發(fā)，盧振民，連 榮，蘇 蔚

(1.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院耳鼻喉科，河南 衛(wèi)輝 453100；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科，河南 衛(wèi)輝 453100)

喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)是一種高侵襲性頭頸部惡性腫瘤，約占全身惡性腫瘤的1%～5%，已成為呼吸道第2位高發(fā)惡性腫瘤[1-2]。隨著診療技術(shù)的進(jìn)步，LSCC的治療效果得到了明顯改善，但患者的預(yù)后仍不佳，5 a生存率較低。相關(guān)研究表明，人體細(xì)胞自噬是維持機(jī)體正常生理平衡和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的重要機(jī)制，與生長發(fā)育及腫瘤發(fā)生等過程密切相關(guān)[3]；自噬調(diào)節(jié)紊亂是人LSCC發(fā)生、發(fā)展的重要影響因素[4]。微RNA(microRNA,miRNA)是一類參與多種細(xì)胞生理過程的內(nèi)源性非編碼RNA，能夠調(diào)節(jié)數(shù)百個靶基因的表達(dá)，在細(xì)胞生長、增殖、分化和凋亡中發(fā)揮不可缺少的作用，但miRNA在人惡性腫瘤中的表達(dá)存在顯著差異。miR-124是miRNA家族的一員，廣泛參與前列腺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[5-8]；然而，miR-124在人LSCC中的表達(dá)特點(diǎn)和作用尚不明確。本研究旨在探討miR-124在人LSCC組織中的表達(dá)及其對LSCC細(xì)胞自噬、侵襲和遷移的影響，以期為LSCC的治療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2016 年1 月至2018 年9 月新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科收治的LSCC患者手術(shù)切除的癌組織及其匹配的癌旁組織(距腫瘤邊緣1～2 cm)標(biāo)本為觀察對象，所有標(biāo)本手術(shù)切除后立即放入液氮保存。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者術(shù)前未接受放射治療、化學(xué)治療，均經(jīng)病理學(xué)檢查確診為LSCC。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)妊娠期婦女；(2)有嚴(yán)重心腦血管疾病者；(3)有重要臟器功能障礙和感染者。本研究共納入LSCC患者12例，男6例，女6 例，年齡33 ～ 57(44.3±8.2)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)，研究對象均簽署知情同意書。

1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞人喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株Hep-2購自南京科佰生物科技有限公司，液氮冷凍保存。

1.3 主要試劑與儀器RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)購自加拿大Gibco公司，無血清Opti培養(yǎng)基購自美國Hyclone 公司，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline,PBS)購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，TRIzol裂解液購自日本TaKaRa公司，miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)試劑盒購自廣州天駿生物科技有限公司，基質(zhì)膠、細(xì)胞培養(yǎng)板購自美國Corning 公司，Transwell小室試劑盒購自美國 Novus Biologicals 公司，吉姆薩染色劑購自上海歌凡生物科技有限公司，細(xì)胞裂解液購自北京百泰克生物技術(shù)有限公司，顯色液、二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)試劑盒購自江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司，微管相關(guān)蛋白輕鏈3B(microtubule-associated protein light chain 3B,LC3B)抗體、3-磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)抗體購自美國Abcam公司，轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體 2000(lipofectamine 2000)購自上海英濰捷基貿(mào)易有限公司，西羅莫司購自上海麥克林生化科技有限公司，3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine autophagy inhibitor,3-MA)購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，miR-124 類似物(miR-124 mimics)、miR-124抑制劑(miR-124 inhibitor)、類似物陰性對照(mimics negative control,mimics NC)和抑制劑陰性對照(inhibitor negative control,inhibitor NC)序列均由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)與合成；核酸蛋白分析儀、高速冷凍離心機(jī)、酶標(biāo)儀均購自美國 Thermo 公司，凝膠成像儀購自英國Cleaver公司，PCR儀購自深圳市瑞安康科技有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測LSCC組織和癌旁組織中miR-124表達(dá)取LSCC組織和癌旁組織各100 mg放入瓷研缽中，加入液氮研磨，迅速使用液氮預(yù)冷的金屬勺將組織樣本轉(zhuǎn)移至液氮預(yù)冷的EP管中，加入1 mL TRIzol試劑，提取RNA，使用核酸蛋白分析儀檢測RNA濃度；對RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反轉(zhuǎn)錄條件為37 ℃ 60 min，85 ℃ 5 min。將反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA用于qRT-PCR檢測，以人U6為內(nèi)參，miR-124正向引物序列為5′-GCTAAGGCACGCGGTG-3′，反向引物序列為5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′；U6正向引物為5′-CTCGCTTCGGCAGCACATATACT-3′，反向引物為5′-ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC-3′。PCR反應(yīng)體系：2×All-in-OneTMqPCR Mix 10 μL，All-in-OneTMmiRNA qPCR Primer 2 μL，Universal Adaptor PCR Primer 2 μL，cDNA溶液 2 μL，ROX Reference Dye 0.2 μL，RNase Free dH2O 3.8 μL。實(shí)驗(yàn)操作根據(jù)miRNA PCR試劑盒說明書進(jìn)行，PCR反應(yīng)條件： 95 ℃變性10 s，58 ℃退火20 s，72 ℃延伸10 s，共40個循環(huán)。應(yīng)用2-△△Ct法計(jì)算miR-124的相對表達(dá)量。每個樣本重復(fù)3次，取均值。

1.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)、分組及處理將人Hep-2細(xì)胞置于2 mL含有體積分?jǐn)?shù)10% FBS的達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium,DMEM)中，于37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)5% CO2的細(xì)胞孵箱中培養(yǎng)，細(xì)胞融合度達(dá)80%以上時，胰蛋白酶消化，傳代培養(yǎng)，待細(xì)胞融合度達(dá)50%～60%時，根據(jù)處理?xiàng)l件分為miR-124 mimics組、miR-124 inhibitor組、mimics NC組、inhibitor NC組、mimics+西羅莫司組和inhibitor+3-MA組。miR-124 mimics組、miR-124 inhibitor組、mimics NC組及inhibitor NC組細(xì)胞的DMEM培養(yǎng)基更換為1.5 mL Opti培養(yǎng)基；mimics+西羅莫司組和inhibitor+3-MA組細(xì)胞的DMEM培養(yǎng)基更換為1.5 mL Opti培養(yǎng)基，mimics+西羅莫司組細(xì)胞加入200 mmol·L-1的西羅莫司2 μL，inhibitor+3-MA組細(xì)胞加入10 g·L-1的3-MA 2 μL；然后，吸取5 μL miR-124 mimics、miR-124 inhibitor、mimics NC、inhibitor NC加入裝有 250 μL Opti培養(yǎng)基的無菌EP管中，吸取5 μL 轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體2000加入到另外裝有250 μL Opti培養(yǎng)基的無菌EP管中，吹打混勻，室溫靜置5 min后將以上2管液體混勻，室溫靜置20 min。然后將混合液加入到已加有1.5 mL Opti培養(yǎng)基的各組細(xì)胞中，輕柔混勻。置于37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)5% CO2的細(xì)胞孵箱中培養(yǎng)4～6 h，將孔中的液體換成2 mL含體積分?jǐn)?shù)10% FBS的DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，2 d后收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4.3 qRT-PCR法檢測過表達(dá)及干擾表達(dá)miR-124的細(xì)胞中miR-124的表達(dá)將轉(zhuǎn)染2 d后的miR-124 mimics組、mimics NC組、miR-124 inhibitor組、inhibitor NC組細(xì)胞用PBS洗3次，吸干PBS后加入1 mL TRIzol，常溫裂解5 min，提取RNA。按照“1.4.1項(xiàng)”方法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和miRNA qRT-PCR檢測。

1.4.4 Western blot 法檢測LSCC組織、癌旁組織和Hep-2細(xì)胞和癌旁組織中自噬相關(guān)蛋白LC3B-Ⅱ的表達(dá)取LSCC組織和癌旁組織標(biāo)本各100 mg，剪碎后置于EP管中，加入0.5 mL 裂解液；取“1.4.2項(xiàng)”培養(yǎng)的miR-124 mimics組、mimics NC組、miR-124 inhibitor組、inhibitor NC組細(xì)胞，PBS洗3次，使用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下并轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，4 ℃ 1 000 r·min-1離心3 min，棄上清液，加入0.2 mL裂解液；在冰上對組織和細(xì)胞進(jìn)行超聲裂解后，4 ℃ 12 000 r·min-1離心，吸取上清液并檢測濃度。取30 μg蛋白樣品進(jìn)行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，切膠后進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，以脫脂奶粉室溫封閉1 h，分別加入LC3B、GAPDH抗體一抗(11 000)孵育，4 ℃過夜后進(jìn)行洗膜，加入二抗(15 000)，室溫孵育1 h后進(jìn)行洗膜和曝光。

1.4.5 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞侵襲能力使用無血清DMEM稀釋4 ℃過夜融化的基質(zhì)膠(51)，吸取55 μL稀釋液均勻鋪于Transwell小室上室底部，將Transwell小室置于37 ℃恒溫箱中孵育2 h，然后置于紫外燈下照射30 min。取“1.4.2項(xiàng)”培養(yǎng)好的miR-124 mimics組、miR-124 inhibitor組、mimics NC組、inhibitor NC組、mimics+西羅莫司組和inhibitor+3-MA組的細(xì)胞，用不含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液配制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為1×106L-1，吸取200 μL接種于Transwell小室上室底部，下室添加500 μL含體積分?jǐn)?shù)20% FBS的培養(yǎng)基，注意避免產(chǎn)生氣泡。將Tranwell小室置于37 ℃恒溫孵育箱中，36 h后使用棉簽將Transwell小室內(nèi)壁膜上的細(xì)胞輕輕擦去，將小室置于體積分?jǐn)?shù)95%乙醇中固定30 min，用水輕輕漂洗，使用吉姆薩染色劑進(jìn)行染色，顯微鏡下觀察，視野中出現(xiàn)的有核細(xì)胞即為侵襲細(xì)胞，隨機(jī)選取5個視野計(jì)數(shù)侵襲細(xì)胞數(shù)目，取均值。

1.4.6 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞遷移能力取“1.4.2項(xiàng)”培養(yǎng)好的各組細(xì)胞。按照每孔6×105個細(xì)胞接種于6孔板，待細(xì)胞融合度達(dá)90%時，在每個孔的底部距離直徑0.5 cm處使用200 μL無菌槍頭平行劃2道直線，分別于0、72、96 h時將培養(yǎng)基換為PBS，然后在顯微鏡下拍照，測量劃痕寬度，計(jì)算愈合率，劃痕愈合率=[(0 h寬度-測量時寬度)/0 h寬度]×100%。

2 結(jié)果

2.1 LSCC組織和癌旁組織中miR-124表達(dá)比較LSCC組織和癌旁組織中miR-124相對表達(dá)量分別為0.160±0.038、1.237±0.072，LSCC組織中miR-124相對表達(dá)量顯著低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 LSCC組織和癌旁組織中自噬蛋白LC3B-Ⅱ表達(dá)比較結(jié)果見圖1。LSCC組織和癌旁組織中LC3B-Ⅱ的相對表達(dá)量分別為1.92±0.06、0.91±0.04，LSCC組織中LC3B-Ⅱ蛋白相對表達(dá)量顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 LSCC組織和癌旁組織中自噬蛋白LC3B-Ⅱ的表達(dá)

Fig.1 Expression of autophagy-related protein LC3B-Ⅱ in LSCC tissues and paracancerous tissues

2.3 過表達(dá)和干擾表達(dá)miR-124的細(xì)胞中miR-124相對表達(dá)量比較miR-124 mimics組、mimics NC組、miR-124 inhibitor組、inhibitor NC組細(xì)胞中miR-124相對表達(dá)量分別為50.11±4.41、2.37±0.18、0.51±0.07、2.53±0.10。miR-124 mimics組細(xì)胞中miR-124相對表達(dá)量顯著高于mimics NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；miR-124 inhibitor組細(xì)胞中miR-124相對表達(dá)量顯著低于inhibitor NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4 過表達(dá)和干擾表達(dá)miR-124的細(xì)胞中自噬蛋白LC3B-Ⅱ表達(dá)量比較結(jié)果見圖2。 mimics NC組、miR-124 mimics組、inhibitor NC組、miR-124 inhibitor組細(xì)胞中LC3B-Ⅱ蛋白相對表達(dá)量分別為0.32±0.02、0.12±0.03、0.21±0.05、2.31±0.09。miR-124 mimics組細(xì)胞中LC3B-Ⅱ蛋白相對表達(dá)量顯著低于mimics NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；miR-124 inhibitor組細(xì)胞中LC3B-Ⅱ蛋白相對表達(dá)量顯著高于inhibitor NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

1：mimics NC組；2：miR-124 mimics組；3：inhibitor NC組；4：miR-124 inhibitor組。

圖2 過表達(dá)和干擾表達(dá)miR-124的細(xì)胞中自噬蛋白LC3B-Ⅱ的表達(dá)

Fig.2 Expression of autophagy-related protein LC3B-Ⅱ in miR-124-upregulated and miR-124-downregulated cells

2.5 各組細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)比較結(jié)果見圖3。miR-124 mimics組、mimics NC組、mimics+西羅莫司組、miR-124 inhibitor組、inhibitor NC組和inhibitor+3-MA組侵襲細(xì)胞數(shù)分別為22.2±2.1、56.7±5.4、50.3±4.8、111.5±7.3、42.4±2.5和56.3±3.4個。miR-124 mimics組侵襲細(xì)胞數(shù)顯著少于mimics NC組和mimics+西羅莫司組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；miR-124 inhibitor組侵襲細(xì)胞數(shù)顯著多于inhibitor NC組和inhibitor+3-MA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

A:mimics NC組；B：miR-124 mimics組；C：mimics+西羅莫司組；D：inhibitor NC組；E：miR-124 inhibitor組；F：inhibitor+3-MA組。

圖3 各組細(xì)胞侵襲能力

Fig.3 Cell invasion abilities in each group

2.6 各組細(xì)胞遷移能力比較培養(yǎng)72 h后，miR-124 inhibitor組、inhibitor NC組和inhibitor+3-MA組細(xì)胞的劃痕愈合率分別為(91.3±1.6)%、(78.2±2.8)%、(75.4±3.9)%；inhibitor NC組和inhibitor+3-MA組細(xì)胞的劃痕愈合率低于miR-124 inhibitor組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。培養(yǎng)96 h后，miR-124 mimics組、mimics NC組和mimics+西羅莫司組細(xì)胞的劃痕愈合率分別為(82.2±2.1)%、(96.2±1.9)%、(94.6±5.7)%；mimics NC組和mimics+西羅莫司組細(xì)胞的劃痕愈合率高于miR-124 mimics組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

LSCC的侵襲轉(zhuǎn)移是受多因素調(diào)控的過程，是影響患者預(yù)后的關(guān)鍵因素。研究顯示，miRNA和自噬對LSCC侵襲轉(zhuǎn)移起重要的調(diào)控作用[9]，因此，干預(yù)LSCC的 miRNA表達(dá)和自噬活動為治療LSCC提供了新思路。

miRNA是一類參與多種細(xì)胞過程的內(nèi)源性非編碼RNA，含有18～22個核苷酸，可通過綁定mRNA的3′-UTR端從而下調(diào)靶基因的表達(dá)[10]。miRNA的表達(dá)水平與腫瘤活動密切相關(guān)，其調(diào)控腫瘤細(xì)胞生理、病理過程，發(fā)揮致癌或抑癌作用。研究表明，LSCC與miRNA表達(dá)密切相關(guān)，LSCC組織中異常表達(dá)的miRNA可以作為一種生物標(biāo)志物為判定腫瘤的進(jìn)展提供重要參考[4,11]。miR-124作為miRNA家族的一員，廣泛參與前列腺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[5-8]，但其在LSCC中的表達(dá)特點(diǎn)和作用尚不明確。本研究旨在探究LSCC組織中miR-124表達(dá)及其對LSCC侵襲和轉(zhuǎn)移的影響，首先觀察了miR-124在LSCC患者癌組織及癌旁組織標(biāo)本中的表達(dá)，結(jié)果顯示，LSCC組織中miR-124的相對表達(dá)量顯著低于癌旁組織，提示miR-124在LSCC中發(fā)揮抑癌功能。但本研究的樣本量較小，尚不足以證明miR-124能夠作為預(yù)測LSCC預(yù)后的標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，miR-124 mimics組細(xì)胞中miR-124相對表達(dá)量顯著高于mimics NC組，miR-124 inhibitor組細(xì)胞中miR-124相對表達(dá)量顯著低于inhibitor NC組，說明相對于mimics NC組，轉(zhuǎn)染miR-124 mimics顯著提高人Hep-2細(xì)胞中miR-124表達(dá)量；而相對于inhibitor NC組，轉(zhuǎn)染miR-124 inhibitor顯著降低人Hep-2細(xì)胞中miR-124表達(dá)量；提示過表達(dá)和干擾表達(dá)miR-124的細(xì)胞模型的轉(zhuǎn)染效率顯著，能夠用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

自噬是廣泛存在于真核細(xì)胞中的細(xì)胞器更新過程，當(dāng)細(xì)胞處于饑餓或受損狀態(tài)時，細(xì)胞內(nèi)自噬增強(qiáng)并產(chǎn)生自體吞噬，為細(xì)胞合成代謝提供必需原料。目前研究發(fā)現(xiàn)，自噬與腫瘤的侵襲和遷移關(guān)系密切，當(dāng)腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲遷移時，其細(xì)胞內(nèi)自噬常常發(fā)生變化，提示自噬在該過程發(fā)揮重要作用[12]。已有研究報道，LC3B-Ⅱ與自噬關(guān)系密切，在自噬過程中吞噬物被雙層膜包裹，成為自噬小體，運(yùn)往溶酶體進(jìn)行降解，自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ是雙層膜的重要組成部件[13]，因此，LC3B-Ⅱ蛋白表達(dá)水平與自噬水平有關(guān)，LC3B-Ⅱ表達(dá)量高說明自噬活躍。在本研究中，與癌旁組織相比，LSCC組織中LC3B-Ⅱ蛋白表達(dá)量明顯上調(diào)，表明LSCC組織中自噬增強(qiáng)，提示自噬可能參與了LSCC的發(fā)生、發(fā)展過程，起促癌作用。另外，本研究結(jié)果顯示，miR-124 mimics組細(xì)胞中LC3B-Ⅱ蛋白表達(dá)下調(diào)，明顯低于mimics NC組；miR-124 inhibitor組細(xì)胞中LC3B-Ⅱ蛋白表達(dá)上調(diào)，明顯高于inhibitor NC組；提示過表達(dá)miR-124以后，Hep-2細(xì)胞的自噬水平下調(diào)；干擾miR-124以后，Hep-2細(xì)胞的自噬水平上調(diào)；提示miR-124在Hep-2細(xì)胞中發(fā)揮抑制自噬的作用。

西羅莫司為自噬激動劑，可通過抑制mTOR通路而誘導(dǎo)和促進(jìn)細(xì)胞自噬的發(fā)生；3-MA為自噬抑制劑，能夠通過抑制Ⅲ型PI3K來阻斷自噬體形成，從而抑制自噬[14]。本研究細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，miR-124 mimics組侵襲細(xì)胞數(shù)顯著少于mimics NC組和mimics+西羅莫司組，miR-124 inhibitor組侵襲細(xì)胞數(shù)顯著多于inhibitor NC組和inhibitor+3-MA組；過表達(dá)miR-124明顯抑制了LSCC細(xì)胞的侵襲能力，但加入自噬激動劑后明顯恢復(fù)LSCC細(xì)胞的侵襲能力；抑制miR-124表達(dá)明顯促進(jìn)LSCC細(xì)胞的侵襲，當(dāng)加入自噬抑制劑后明顯削弱了細(xì)胞癌細(xì)胞的侵襲能力。而細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，培養(yǎng)72 h后，inhibitor NC組和inhibitor+3-MA組細(xì)胞的劃痕愈合率顯著低于miR-124 inhibitor組；培養(yǎng)96 h后，mimics NC組和mimics+西羅莫司組細(xì)胞的劃痕愈合率高于miR-124 mimics組。上述結(jié)果提示，過表達(dá)miR-124明顯抑制了LSCC細(xì)胞的遷移能力，但加入自噬激動劑后明顯恢復(fù)LSCC細(xì)胞的遷移能力；抑制miR-124表達(dá)明顯促進(jìn)LSCC細(xì)胞的遷移能力，當(dāng)加入自噬抑制劑后明顯削弱了細(xì)胞癌細(xì)胞的遷移能力。因此，miR-124可能通過抑制自噬發(fā)揮抑癌作用。但仍然需要進(jìn)一步明確miR-124作用于自噬通路的靶基因，以完整闡述miR-124調(diào)控LSCC細(xì)胞侵襲和遷移的機(jī)制。

綜上所述，人LSCC組織中miR-124表達(dá)顯著下調(diào)，人LSCC組織中以及miR-124過表達(dá)細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白LC3B-Ⅱ顯著上調(diào)，miR-124可能通過抑制自噬而抑制LSCC細(xì)胞的侵襲和遷移。該研究為探討LSCC的發(fā)病機(jī)制及臨床治療提供了新的方法和思路。