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    多重PCR快速檢測化妝品中三種致病菌的研究

    2019-11-27 00:27:38楊英
    健康大視野 2019年22期
    關鍵詞:快速檢測致病菌化妝品

    楊英

    【摘 要】目的:探討多重PCR快速檢測在化妝品中三種致病菌中的應用效果。方法:參考已有的大腸桿菌phoA基因、銅綠假單胞菌外膜蛋白基因oprL與金黃色葡萄球菌特異性序列Smal中引物,對化妝品中常見的常見的三種致病菌采用PCR進行檢測、分析。結果:多重PCR擴增結果顯示:根據(jù)篩選的3對特異性引物對3個標準菌株、3個混合標準菌株及6個污染菌株進行擴增,實驗中出現(xiàn)3對引物均能對應的菌株發(fā)生特異性結合,出現(xiàn)一條預期擴增長度一致的清晰的條帶,6株其他菌株均未出現(xiàn)增出條帶。結論:利用多重PCR快速檢測用于化妝品三種致病菌檢測中效果理想,值得推廣應用。

    【關鍵詞】多重PCR;快速檢測;化妝品;致病菌;應用效果

    【中圖分類號】R256.21【文獻標識碼】A【文章編號】1005-0019(2019)22--01

    臨床研究表明:微生物指標是化妝品衛(wèi)生質量合格與否的重要影響因素[1]。我國《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中明確規(guī)定每克或每毫克化妝品中不得檢出糞便大腸菌群、銅綠假單胞菌及金黃色葡萄球菌[2]。本文以病例隨機對照展開,探討多重PCR快速檢測在化妝品中三種致病菌中的應用效果,報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 儀器與設備 小型高速離心機(Eppendorf)、紫外分光光度計(METASH UV5200PC)、Mastercycler nexus GSX1梯度PCR儀(Eppendorf)、凝膠成像分析系統(tǒng)(Bio-Rad)、細菌DNA提取試劑盒、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(廣州環(huán)凱微生物科技有限公司)。

    1.2 引物的合成與設計 本研究中所需的引物均由北京六合華大基因科技有限公司合成,引物見表1。

    1.3 方法 (1)RNA提取。取待測化妝品,加入500uL trizol充分混合均勻后加入氯仿0.2mL,15s劇烈震蕩,常溫下靜置2-3min,15min離心,離心力1825g,獲得三層液體(上層為水相、中間層與下層為有機相)。取RNA沉淀,轉移到新的EP管中,加入0.5mL異丙醇,混合均勻后放置在-20℃冰箱中,10min離心,離心力1194g獲得RNA沉淀。充分洗滌RNA,加入250uL DEPC與750uL乙醇,利用乙醇完成沉淀的沖洗,5min離心,離心力2315g,取沉淀放入工作臺上進行20min干燥。利用紫外分光度儀檢測RNA濃度并完成RNA提純(以Rnase作為空白對照),在A260下測定吸光度值。(2)PCR測定。多重PCR快速測定化妝品中三種致病菌。設定PCR反應條件:30℃,10min;42℃,30 min;99℃,5 min;5℃,5 min,連續(xù)進行35個循環(huán),最后72℃下完成10min延長,β-actin為內對照[3]。

    1.4 統(tǒng)計分析 采用SPSS18.0軟件處理,計數(shù)資料行檢驗,采用n(%)表示,計量資料行t檢驗,采用()表示,P<0.05差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    多重PCR擴增結果顯示:根據(jù)篩選的3對特異性引物對3個標準菌株、3個混合標準菌株及6個污染菌株進行擴增,實驗中出現(xiàn)3對引物均能對應的菌株發(fā)生特異性結合,出現(xiàn)一條預期擴增長度一致的清晰的條帶,6株其他菌株均未出現(xiàn)增出條帶,見圖1。

    3 討論

    近年來,多重PCR快速檢測在化妝品三種病菌檢測中得到應用,且效果理想。本研究中,實驗中出現(xiàn)3對引物均能對應的菌株發(fā)生特異性結合,出現(xiàn)一條預期擴增長度一致的清晰的條帶,6株其他菌株均未出現(xiàn)增出條帶,說明多重PCR能實現(xiàn)化妝品中三種病菌的檢測。化妝品微生物污染不僅會給企業(yè)帶來經(jīng)濟損傷,亦會嚴重危害人類的健康,通過多重PCR檢測方法能同時、快速、準確的實現(xiàn)化妝品中大腸桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌測定,有助于提高化妝品的使用及安全。

    綜上所述,利用多重PCR快速檢測用于化妝品三種致病菌檢測中效果理想,具有快速、特異性等優(yōu)點,值得推廣應用。

    參考文獻

    馮可,胡文忠,姜愛麗,等.多重PCR法檢測鮮切哈密瓜中3種食源性致病菌[J].食品科學,2017,38(6):295-302.

    瞿洋,索玉娟,徐斐,等.SSEL結合多重PCR同時快速檢測生菜中4種食源性致病菌[J].上海農業(yè)學報,2017,33(4):121-126.

    刁巧虹,卞國志,王娟,等.奶牛乳房炎常見致病菌多重PCR檢測方法的建立[J].動物醫(yī)學進展,2017,38(12):59-63.

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