影響獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的因素分析

吳丹 李偉 劉冬冬 張夏平

(吉林省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心, 長(zhǎng)春 130062)

養(yǎng)殖業(yè)是我國(guó)現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè),在農(nóng)民增收以及脫貧致富方面扮演重要角色。 但在各方面因素持續(xù)作用下,動(dòng)物疫病發(fā)生以及防控日漸復(fù)雜,如何快速、準(zhǔn)確診斷各類動(dòng)物疫病已成為目前急需解決的問題。 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室是開展動(dòng)物疫病診斷重要支撐平臺(tái),實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性對(duì)指導(dǎo)疫病防控意義重大,因此,全面、深入的分析影響檢測(cè)結(jié)果的各種因素,優(yōu)化檢測(cè)各環(huán)節(jié),對(duì)提高檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性至關(guān)重要。

1 環(huán)境與儀器設(shè)備

1.1 環(huán)境

環(huán)境是影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的因素之一,體現(xiàn)在獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的濕度、溫度等方面。 某些檢測(cè)項(xiàng)目、檢測(cè)方法手段對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境有著比較嚴(yán)格的要求,檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和環(huán)境濕度、溫度等密切相關(guān)。比如,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部溫度有著較高的要求,如果溫度過低,檢測(cè)試劑、樣品難以充分發(fā)揮作用,檢測(cè)中反應(yīng)速度不在規(guī)定范圍內(nèi),導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。 此外,實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染對(duì)檢測(cè)結(jié)果會(huì)造成較大的影響,如PCR 檢測(cè)時(shí),陽性樣品氣溶膠污染,會(huì)造成假陽性,嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 因此,必須加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境管控。

1.2 儀器設(shè)備

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)儀器設(shè)備多樣化,其型號(hào)、規(guī)格、技術(shù)參數(shù)、性能等有著較大的差異。 一旦儀器設(shè)備使用管理不合理,加上日常校準(zhǔn)檢查、維護(hù)等不到位,將會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果較大的偏差。 比如,離心機(jī)有低速、高速以及常溫、冷凍之分,檢測(cè)性能、誤差系數(shù)各不相同,需要檢測(cè)內(nèi)容和技術(shù)方法的要求,科學(xué)選擇使用離心機(jī)。 又比如,某些進(jìn)口檢測(cè)設(shè)備,PCR儀器、全自動(dòng)高壓滅菌鍋等其整體性能高于國(guó)產(chǎn)設(shè)備,它對(duì)環(huán)境要求也高于國(guó)產(chǎn)設(shè)備。 針對(duì)這種情況,實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行中必須加強(qiáng)對(duì)環(huán)境的管理,做好日常校準(zhǔn)及維護(hù)工作,更換老化嚴(yán)重、故障頻繁發(fā)生的儀器設(shè)備,在更新、升級(jí)基礎(chǔ)上提高各類儀器設(shè)備安全性以及整體性能,避免實(shí)際應(yīng)用中頻繁出現(xiàn)故障問題,影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2 檢測(cè)人員與樣本

檢測(cè)人員操作是否規(guī)范、樣本制作與保存是否達(dá)到要求都會(huì)在一定程度上影響實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 就人為影響因素來說,不同崗位檢測(cè)人員的職業(yè)道德素養(yǎng)、學(xué)歷層次以及對(duì)儀器設(shè)備操作的熟練程度、操作是否規(guī)范等都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,使得檢測(cè)結(jié)果存在一定的偏差。 比如,在酶聯(lián)免疫吸附及血凝抑制實(shí)驗(yàn)中,檢測(cè)人員不規(guī)范使用移液器,會(huì)影響實(shí)驗(yàn)樣本與酶標(biāo)板之間的反應(yīng),隨意改變、調(diào)整實(shí)驗(yàn)操作步驟等,也都會(huì)讓檢測(cè)結(jié)果存在偏差。 加強(qiáng)檢驗(yàn)人員培訓(xùn),規(guī)范常規(guī)試驗(yàn)操作很必要。 就樣本影響因素而言,試驗(yàn)樣品的種類較多,有分泌物、全血、血清、發(fā)生病變的臟器組織樣品等,采集樣品是否符合要求對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性很重要。如血清是否溶血及溶血的程度,采集組織樣品是否是根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行采樣。 進(jìn)行病原的分離鑒定,要采病原感染后含量較高的組織器官。 如,檢測(cè)偽狂犬可用腦組織,檢測(cè)豬瘟用扁桃體,檢測(cè)布病用流產(chǎn)胎兒、精液等,分離細(xì)菌去病變組織與正常組織交界地方等等。

3 試劑與檢測(cè)方法

3.1 診斷試劑

診斷試劑、檢測(cè)方法都會(huì)對(duì)檢測(cè)的結(jié)果造成不同程度的影響。 診斷試劑生產(chǎn)廠家不同、批次、敏感性、特異性等并不完全相同,即使是同一生產(chǎn)廠家不同批次其特異性和敏感性均不一樣,即使同一病原不同批次的試劑盒質(zhì)量也存在較大的差異,這些都會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性造成影響。 因此在采購試劑盒之前要仔細(xì)檢查和篩選,必要時(shí)還應(yīng)進(jìn)行試劑盒的比對(duì)試驗(yàn)后再確定要采購的試劑盒。

3.2 檢測(cè)方法

檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性與所選用的檢測(cè)方法密切相關(guān)。 如,在進(jìn)行病毒的分離鑒定時(shí)可用病毒中和試驗(yàn)、血凝試驗(yàn)(無血凝特性不適用)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。 要根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的不同選擇合適的檢測(cè)方法,并控制操作的影響因素,在降低檢測(cè)成本的同時(shí)努力提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 同時(shí),要嚴(yán)格按照試驗(yàn)操作步驟進(jìn)行檢測(cè)。 以“偽狂犬病”抗體檢測(cè)為例,可用的方法很多,包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法、乳膠凝集試驗(yàn)方法,前者包括gE 野毒抗體檢測(cè)、gB免疫抗體檢測(cè),我們要根據(jù)檢測(cè)目的不同選擇試驗(yàn)法與檢測(cè)試劑盒。