低劑量佐匹克隆延遲控釋片治療早醒性失眠的療效研究

周其達(dá)，范健，秦琳，華鍵，韓楊，查蕾蕾，周衛(wèi)，周玉潔

失眠是最常見的睡眠障礙類型，失眠者在成年人中占10%～15%，其中大部分為慢性失眠［1］，日本、加拿大的失眠患病率分別為21%、18%，在歐洲，失眠的患病率為6%～12%［2］，2006 年中國(guó)內(nèi)地成年人中有失眠癥狀者高達(dá)57%［3］。失眠是導(dǎo)致心血管疾病，尤其是高血壓、心肌梗死和慢性心力衰竭的重要危險(xiǎn)因素［4-7］；也是2 型糖尿病的危險(xiǎn)因素之一［8］，并且和癡呆呈正相關(guān)［9］；此外，失眠患者患抑郁癥的可能性增加，提高了自殺風(fēng)險(xiǎn)，還增加了惡性意外事故的發(fā)生率［10］，因此失眠是嚴(yán)重危害人類健康的一種疾病。

失眠的治療指南均推薦心理和行為治療為首選方法，最常用的認(rèn)知行為治療（CBT-I）是慢性失眠的一線治療，其療效優(yōu)于藥物療法；而對(duì)于無法使用CBT-I或者無效的慢性失眠患者，催眠藥物仍廣泛運(yùn)用于慢性失眠的治療［1，11-13］。《中國(guó)成人失眠診斷與治療指南（2017 版）》［10］推薦短中效苯二氮 類受體激動(dòng)劑（BZRAs）、褪黑素受體激動(dòng)劑、具有鎮(zhèn)靜作用的抗抑郁藥及食欲素受體拮抗劑等用于失眠的治療。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）批準(zhǔn)非苯二氮 類受體激動(dòng)劑（NBZDs）包括佐匹克隆、右佐匹克隆、唑吡坦和扎來普隆等速釋制劑用于失眠的治療［13］。失眠分為入睡困難、睡眠維持障礙和早醒等，分別占失眠的21%、32%和21%［14］，治療失眠的每一種藥物，對(duì)不同類型的失眠均采用睡前同一劑量服用，未能實(shí)施精準(zhǔn)治療。目前針對(duì)早醒性失眠，尚缺乏利用遲滯釋藥系統(tǒng)降低催眠藥物的劑量，延遲至夜間早醒發(fā)生前定時(shí)快速釋藥的方式來阻斷早醒的治療研究。因此，本課題組以臨床上常用的催眠藥物——佐匹克隆為模型藥，制備常規(guī)劑量1/2 的低劑量佐匹克隆延遲控釋片，觀察其和常規(guī)劑量佐匹克隆對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠睡眠行為的影響，為早醒性失眠的治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用清潔級(jí)雄性SD 大鼠，體質(zhì)量204～236 g，購(gòu)于揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物中心（生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK 蘇2017-0007），飼養(yǎng)條件為溫度（18±2）℃，相對(duì)濕度（55±5）%，禁食不禁水12 h 后開始實(shí)驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 研究時(shí)間與相關(guān)定義 本研究時(shí)間為2016 年10月—2018 年1 月。在我國(guó)臨床前藥理學(xué)研究中，規(guī)定用能否延長(zhǎng)或縮短苯巴比妥鈉翻正反射的丟失時(shí)間來反映睡眠效應(yīng)［15］。大鼠的戊巴比妥鈉閾劑量為40～50 mg/kg，經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，本研究采用50 mg/kg 的劑量行腹腔注射，將大鼠翻轉(zhuǎn)后1 min 不能恢復(fù)原狀，并重復(fù)3 次，判為翻正反射消失；大鼠翻正后1 min 內(nèi)能恢復(fù)原狀，并重復(fù)3 次，判為翻正反射恢復(fù)。大鼠經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉至翻正反射消失的時(shí)間為睡眠潛伏期，翻正反射消失至恢復(fù)的時(shí)間為睡眠時(shí)間［16］。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)1 研究佐匹克隆不同劑量及給藥時(shí)間對(duì)大鼠的催眠作用及有效時(shí)間，為佐匹克隆延遲控釋片的制備奠定基礎(chǔ)。成人佐匹克隆的推薦劑量為7.5 mg，大鼠常用劑量為人體的40 倍，本研究以人體40 倍劑量（5.0 mg/kg）開展實(shí)驗(yàn)。40 只雄性SD 大鼠隨機(jī)分為對(duì)照1 組、低劑量（2.5 mg/kg 佐匹克?。┙M、高劑量（5.0 mg/kg佐匹克?。?0 min 組、高劑量60 min 組，每組10 只大鼠。對(duì)照1 組以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射；低劑量組根據(jù)早醒性失眠的特點(diǎn)，以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射，待翻正反射消失后30 min，以2.5 mg/kg 佐匹克隆溶液灌胃，模擬睡眠中低劑量佐匹克隆給藥；高劑量30 min組、高劑量60 min 組以5.0 mg/kg 佐匹克隆溶液灌胃后30、60 min，分別以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射，模擬睡前30、60 min 服用佐匹克隆。觀察并記錄各組大鼠的體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。

1.2.3 佐匹克隆延遲控釋片的制備

1.2.3.1 片芯的制備 將佐匹克隆與羧甲基淀粉鈉、乳糖按等量遞加法混合均勻，加入5%聚維酮K30（PVPK30）制軟材，30 目篩制粒后60 ℃烘干，25 目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻后壓片（φ=2.0 mm）。

1.2.3.2 佐匹克隆延遲控釋片的制備 將山崳酸甘油酯、乳糖混合均勻后，5%PVPK30 制軟材，25 目篩制粒，55 ℃烘干，20 目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻后得到包衣顆粒。先將半量的包衣顆粒加入沖模底部，將片芯置于中央位置，再加入剩余半量的包衣顆粒，壓片即得佐匹克隆延遲控釋片（φ=4.8 mm），每片含佐匹克隆 0.5 mg，達(dá)到服藥4 h 后釋放佐匹克隆的技術(shù)要求，體外釋藥試驗(yàn)顯示4 h 后開始崩解釋藥，15 min 內(nèi)完成釋藥。佐匹克隆延遲控釋片體外釋放曲線見圖1。該延遲控釋片由于阻滯包衣的存在，藥物不立即釋放而是經(jīng)一定時(shí)間后水分到達(dá)片芯，含高效崩解劑的片芯吸水到一定程度后膨脹力顯著增大導(dǎo)致包衣破裂，片芯暴露快速釋藥，呈現(xiàn)的是經(jīng)一定時(shí)滯后的“爆破式”釋藥行為。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)2 60 只雄性SD 大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照2 組、佐匹克隆延遲控釋片組（2.5 mg/kg 佐匹克隆）和佐匹克隆溶液組（5.0 mg/kg 佐匹克?。?，每組20 只大鼠。對(duì)照2 組以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射；佐匹克隆延遲控釋片組依據(jù)制備的延遲控釋片的藥理特性，在采用自制開口器確認(rèn)佐匹克隆延遲控釋片喂藥成功后3.5 h，以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射，確保大鼠入睡后藥物釋放；佐匹克隆溶液組以5.0 mg/kg 佐匹克隆溶液灌胃60 min 后，以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射。觀察并記錄各組大鼠的體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)1 對(duì)照1 組及低、高劑量組大鼠體質(zhì)量、睡眠潛伏期比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；各組睡眠時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中低劑量組與高劑量30 min、60 min 組大鼠睡眠時(shí)間長(zhǎng)于對(duì)照1 組，高劑量30 min 組大鼠睡眠時(shí)間短于低劑量組，高劑量60 min 組大鼠睡眠時(shí)間長(zhǎng)于高劑量30 min 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

2.2 實(shí)驗(yàn)2 對(duì)照2 組、佐匹克隆延遲控釋片組及佐匹克隆溶液組大鼠睡眠潛伏期比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組體質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中佐匹克隆溶液組體質(zhì)量大于對(duì)照2 組、佐匹克隆延遲控釋片組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各組睡眠時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中佐匹克隆延遲控釋片組、佐匹克隆溶液組大鼠睡眠時(shí)間長(zhǎng)于對(duì)照2 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表2）。

圖1 佐匹克隆延遲控釋片體外釋放曲線圖Figure 1 The curve of in vitro release of zopiclone delayed controlled release tablets

表1 實(shí)驗(yàn)1 各組大鼠體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間比較n=10）Table 1 Comparison of baby mass，sleep latency and sleep duration of rats in each group derived from experiment 1

表1 實(shí)驗(yàn)1 各組大鼠體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間比較n=10）Table 1 Comparison of baby mass，sleep latency and sleep duration of rats in each group derived from experiment 1

注：與對(duì)照1 組比較，aP＜0.05；與低劑量組比較，bP＜0.05；與高劑量組30 min 比較，cP＜0.05

組別 體質(zhì)量（g）睡眠潛伏期（min）睡眠時(shí)間（min）對(duì)照1 組 218.2±7.1 5.6±1.7 126.3±18.6低劑量組 221.6±6.1 6.9±1.9 175.3±18.1a高劑量30 min 組 217.8±9.2 7.2±3.0 151.8±19.2ab高劑量60 min 組 214.0±7.3 6.0±1.6 181.5±15.6ac F 值 1.723 1.259 19.651 P 值 0.180 0.303 ＜0.010

3 討論

慢性失眠的治療中，藥物干預(yù)也是重要的一環(huán)，目前常用的鎮(zhèn)靜催眠類藥物主要是傳統(tǒng)的BZRAs 及新型NBZDs，但BZRAs 會(huì)增加老年患者跌倒、機(jī)動(dòng)車事故風(fēng)險(xiǎn)和認(rèn)知功能障礙，因而美國(guó)老年學(xué)會(huì)Beers 標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為應(yīng)避免采用此類藥物治療老年患者的失眠［14］。同時(shí)，這些藥物的長(zhǎng)期應(yīng)用，大多會(huì)產(chǎn)生依賴性或藥物不良反應(yīng)，這與用藥劑量、用藥頻率、時(shí)程、用藥者個(gè)體特征及使用劑量高、t1/2短的藥物相關(guān)［17-19］，為了規(guī)避此類風(fēng)險(xiǎn)，國(guó)外學(xué)者提出并嘗試了使用最低有效劑量藥物來輔助睡眠［12］。

表2 實(shí)驗(yàn)2 各組大鼠體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間比較（，n=20）Table 2 Comparison of sleep latency and sleep duration of rats in each group derived from experiment 2

表2 實(shí)驗(yàn)2 各組大鼠體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間比較（，n=20）Table 2 Comparison of sleep latency and sleep duration of rats in each group derived from experiment 2

注：與對(duì)照2 組比較，aP＜0.05；與佐匹克隆延遲控釋片組比較，bP＜0.05

組別 體質(zhì)量（g）睡眠潛伏期（min）睡眠時(shí)間（min）對(duì)照2 組 215.9±9.5 4.8±2.0 130.2±25.6佐匹克隆延遲控釋片組 211.8±2.3 3.2±1.5 188.3±25.0a佐匹克隆溶液組 222.2±4.4ab 3.3±1.7 194.0±28.1a F 值 36.060 5.284 30.400 P 值 ＜0.001 0.071 ＜0.001

目前臨床使用的催眠類藥物中，尚存在一定的局限性：對(duì)不同失眠類型的時(shí)間針對(duì)性不強(qiáng)，入睡困難、睡眠維持障礙和早醒對(duì)藥物的時(shí)間要求有所不同，而臨床實(shí)踐中，針對(duì)不同類型的失眠，均采用睡前服藥；劑量針對(duì)性不強(qiáng)，采用同一劑量治療不同類型失眠，導(dǎo)致體內(nèi)藥物有效濃度在一定時(shí)間內(nèi)未發(fā)揮其效能、藥物濃度峰值與治療的目標(biāo)時(shí)間未達(dá)成一致，降低了藥物效能；為了達(dá)到治療效果而使用與實(shí)際需要不匹配的藥物劑量，導(dǎo)致藥物不良反應(yīng)和依賴性產(chǎn)生的可能性增加，這些因素均與當(dāng)前精準(zhǔn)醫(yī)療的要求存在差距。

佐匹克隆屬新型短效NBZDs，常用劑量7.5 mg，睡前服用，具有不良反應(yīng)較少、易獲得、價(jià)格較低的優(yōu)點(diǎn)。臨床中早醒性失眠患者中90%的患者并不存在入睡困難，早期不需要藥物輔助，其早醒多發(fā)生在睡眠4.0 ～4.5 h 之后。本研究依據(jù)早醒性失眠的特征，設(shè)計(jì)用佐匹克隆常用劑量的一半劑量，在早醒發(fā)生前釋藥，起到阻斷早醒、維持睡眠的作用，與早醒性失眠患者的睡眠要求同步，達(dá)到精準(zhǔn)治療、減少藥物依賴和其他不良反應(yīng)的目的。

本研究采用戊巴比妥延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)1 中，探索了不同給藥時(shí)機(jī)、給藥劑量對(duì)大鼠睡眠時(shí)間的影響，揭示睡前高劑量60 min 組較高劑量30 min 組顯著延長(zhǎng)大鼠的睡眠時(shí)間；5.0 mg/kg 佐匹克隆睡前60 min 灌胃和2.5 mg/kg 佐匹克隆入睡30 min 后灌胃，兩組大鼠睡眠時(shí)間無顯著差異，驗(yàn)證了睡前服藥與睡眠中低劑量給藥療效一致的實(shí)驗(yàn)設(shè)想；在此基礎(chǔ)上，以2.5 mg/kg 劑量制成每片0.5 mg 佐匹克隆的延遲控釋片，使喂藥后4 h 釋藥。實(shí)驗(yàn)2 中，用基于實(shí)驗(yàn)1 結(jié)果制備的低劑量佐匹克隆延遲控釋片喂食實(shí)驗(yàn)大鼠，使之在大鼠入睡后釋放佐匹克隆，與5.0 mg/kg 佐匹克隆溶液睡前60 min 灌胃組和對(duì)照2 組比較，佐匹克隆延遲控釋片組、佐匹克隆溶液組均能顯著延長(zhǎng)大鼠的睡眠時(shí)間，而兩組間延長(zhǎng)睡眠時(shí)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，可以通過改進(jìn)制作工藝，制備低劑量佐匹克隆延遲控釋片使之在大鼠睡眠中延遲釋藥，起到阻斷早醒、維持睡眠的作用，以低劑量取得與高劑量睡前使用同等延長(zhǎng)大鼠睡眠時(shí)間的效果，顯現(xiàn)了通過低劑量佐匹克隆延遲控釋片有效針對(duì)成人早醒性失眠治療的前景。

作者貢獻(xiàn)：周其達(dá)進(jìn)行了文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)，對(duì)文章整體負(fù)責(zé)；周其達(dá)、范健、秦琳、周衛(wèi)、周玉潔負(fù)責(zé)研究的可行性分析及實(shí)施；韓楊負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)收集整理；華鍵進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；周其達(dá)、周衛(wèi)撰寫論文；周玉潔負(fù)責(zé)制劑部分論文的修訂，查蕾蕾進(jìn)行論文的修訂。

本文無利益沖突。