兩頭尖藥材的紫外光譜鑒別研究

趙麗茹，李金花，路曉玉，曲 帥，趙利利，蔡廣知

（1.吉林省生物研究所，吉林 長(zhǎng)春 130012；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130017）

兩頭尖藥材為毛茛科植物多被銀蓮花Anemone raddeana Regel的干燥根莖，性辛，熱；有毒。歸脾經(jīng)。具有祛風(fēng)濕，消癰腫的功效[1]。其主要化學(xué)成分有皂苷類、內(nèi)酯類、揮發(fā)油和油脂類等[2]。研究表明其具有顯著的抗腫瘤、抑菌、抗炎鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗鎮(zhèn)靜等作用[3]。臨床上被廣泛應(yīng)用，如被患者熟知的中成藥活絡(luò)丹、再造丸，它們的主要成分就是兩頭尖藥材[3]。筆者研究團(tuán)隊(duì)在兩頭尖藥材的質(zhì)量研究方面做了許多工作，包括兩頭尖的HPLC指紋圖譜研究[4]，用HPLC-ELSD法測(cè)定了中藥兩頭尖中竹節(jié)香附素A[5]。其他文獻(xiàn)中關(guān)于兩頭尖藥材質(zhì)量研究方面的報(bào)道很少。尤其在光譜鑒別方面，尚未見報(bào)道。本文首次采用紫外光譜法對(duì)兩頭尖藥材進(jìn)行鑒別。

紫外指紋圖譜技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快速等特點(diǎn)，近年來(lái)被廣泛應(yīng)用于中藥材的質(zhì)量鑒別方面。紫外吸收光譜曲線的峰形、峰高、峰面積有一定的差異，可以將不同產(chǎn)地藥材的紫外光譜的指紋特性進(jìn)行比較，從而對(duì)不同產(chǎn)地藥材進(jìn)行分析鑒別。如陳先良等[6]對(duì)不同產(chǎn)地的杜仲進(jìn)行了紫外光譜鑒別研究。此外通過(guò)比較紫外圖譜的差異，還能快速簡(jiǎn)便的鑒別藥材的種類，鑒別不同藥材的炮制品等。如楊天偉等[7]對(duì)不同產(chǎn)地、種類牛肝菌進(jìn)行了紫外光譜鑒別分析。紫外指紋圖譜在中藥鑒別等方面有了廣泛的應(yīng)用，但在兩頭尖藥材鑒別方面的應(yīng)用卻未見報(bào)道。本文利用紫外光譜技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地的兩頭尖藥材進(jìn)行測(cè)定，圖譜比對(duì)，首次建立了兩頭尖藥材的紫外光譜指紋圖譜的共有模式，為更好的、更快速的評(píng)價(jià)兩頭尖藥材的質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 試藥與試劑

甲醇（分析純）、正丁醇（分析純）、乙醇（分析純）。

1.2 儀器

TU-1810型紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）

AB-135-S 型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）

1.3 中藥兩頭尖藥材

兩頭尖藥材經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)肖寄平教授鑒定均為毛莨科植物多被銀蓮花Anemones raddeanae Regel的干燥根莖，其產(chǎn)地詳情見表1。

表1 兩頭尖藥材產(chǎn)地

1.4 混淆品

包括3個(gè)混淆品：天葵子、九節(jié)菖蒲、香附。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 樣品的處理

取兩頭尖藥材粉末（過(guò)80目篩）約2.5 g，置于帶蓋錐形瓶中，加入70%乙醇10倍量，超聲40 min后，過(guò)濾，即得。

2.2 光譜條件

掃描波長(zhǎng)范圍：500 nm～190 nm

比色皿：石英比色皿

空白：甲醇溶液

2.3 提取條件優(yōu)選

2.3.1 提取溶劑的選擇

2.3.1.1 提取溶劑類型的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)分別取甲醇、乙醇、正丁醇三種溶劑，按照2.1項(xiàng)下方法處理，結(jié)果乙醇提取的溶液在190～500 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)有明顯的紫外吸收峰，而且吸收峰數(shù)量多于其它溶劑提取液，因此，用乙醇作為最佳提取溶劑。

2.3.1.2 提取溶劑濃度的優(yōu)化

分別取100%、70%、50%三個(gè)濃度的乙醇溶液，按照2.1項(xiàng)下方法處理，結(jié)果50%乙醇提液，難以濾過(guò)，100%和70%乙醇提取液，紫外吸收峰的個(gè)數(shù)和吸收強(qiáng)度沒有明顯差別。結(jié)合節(jié)能等綜合因素考慮，選擇70%乙醇作為最終的提取溶劑。

2.3.1.3 提取溶劑劑量的優(yōu)化

分別取10倍量、20倍量、30倍量70%乙醇，按照2.1項(xiàng)下方法處理，結(jié)果紫外圖譜差異不顯著。故選擇10倍量的提取劑量作為最佳選擇。

2.3.2 提取方法的選擇

選擇簡(jiǎn)單回流、索氏提取、超聲提取，三種提取方式進(jìn)行比較。結(jié)果三種提取方法的差別不太大，考慮操作的簡(jiǎn)便性和時(shí)間成本，最終選擇超聲提取法。

2.3.3 提取時(shí)間的選擇

選擇20 min，40 min，60 min三個(gè)時(shí)間點(diǎn)來(lái)對(duì)超聲提取法的提取時(shí)間進(jìn)行考察，結(jié)果顯示，提取20 min時(shí)藥材提取不夠充分，提取液的紫外吸收峰不明顯；超聲40 min和超聲60 min樣品提取效果相近，所以選擇超聲提取40min作為最佳提取時(shí)間。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證[8]

取同—兩頭尖供試品溶液，按照選定的光譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄紫外光譜譜圖中共有吸收峰的吸光度值，計(jì)算平均RSD值為1.034%（n=5）。由精密度試驗(yàn)結(jié)果表明，本儀器的精密度良好。

2.4.2 穩(wěn)定性考察

取兩頭尖供試品溶液，按選定的光譜條件分別在0，2，4，8，12，24h進(jìn)行測(cè)定，記錄光譜圖，計(jì)算紫外光譜圖中共有吸收峰的RSD值為0.921%（n=6）。結(jié)果表明，樣品在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.3 重復(fù)性考察

取同—產(chǎn)地的的兩頭尖藥材五份，參照供試品溶液的制備方法，按照選定的光譜條件，連續(xù)測(cè)定5次，記錄光譜譜圖，計(jì)算紫外光譜圖中共有吸收峰的 RSD值為1.24%（n=5）。結(jié)果表明，本方法的重復(fù)性較好。

2.5 紫外光譜指紋圖譜的建立

2.5.1 兩頭尖藥材紫外的測(cè)定

取18批不同產(chǎn)地的兩頭尖樣品和3個(gè)混淆品，按照樣品溶液的制備方法進(jìn)行處理，用紫外光譜儀測(cè)定，結(jié)果見圖1。

圖1 樣品的紫外光譜合圖

3 結(jié)果與討論

本文將18批不同產(chǎn)地的兩頭尖樣品和3個(gè)混淆品經(jīng)過(guò)提取后，樣品溶液在500～190 nm的波長(zhǎng)進(jìn)行紫外光譜掃描測(cè)定。得出不同產(chǎn)地兩頭尖藥材和偽品的紫外光譜圖。正品藥材的紫外圖譜顯示，其主成分分別在238 nm、336 nm、344 nm左右有三個(gè)最大吸收峰。不同產(chǎn)地的正品兩頭尖藥材雖然產(chǎn)地不同，但是主要組成成分相似。只是不同圖譜的主要吸收峰的吸光度值略有差異。說(shuō)明不同產(chǎn)地正品兩頭尖藥材的主成分大致相同，但是含量存在差異。而混淆品的紫外光譜圖表明，其圖譜形狀與正品圖譜明顯不同，由于其吸收波長(zhǎng)跟正品的吸收波長(zhǎng)差異明顯，說(shuō)明通過(guò)紫外掃描圖的數(shù)據(jù)可以快速對(duì)樣品和混淆品進(jìn)行鑒別。

本文采用紫外光譜法對(duì)兩頭尖藥材進(jìn)行了鑒別研究。建立了正品兩頭尖藥材的紫外光譜指紋圖譜。通過(guò)方法學(xué)考察，本方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性都較好?？梢宰鳛殍b別兩頭尖藥材的可靠方法。