咽康片主要原料體外抑菌實驗研究

趙 潔 劉艷玲 韓 冰 田 浩 郭玲玲

遼寧省微生物科學(xué)研究院，遼寧朝陽 122000

咽康片是以金銀花為主要原料，再輔以其他成分按一定的配方比例組合而成的口含片劑，用于口腔感染、咽喉炎，具有抗菌、消炎、止咳的作用。本項試驗主要探討咽康片中金銀花等幾味主要原料的體外抗菌作用，為本產(chǎn)品進(jìn)一步應(yīng)用和相關(guān)原料的合理使用提供基礎(chǔ)資料，供同道參考，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

金銀花、薄荷腦購自朝陽市藥材公司；供試菌種金黃色葡萄球菌由筆者所在醫(yī)院菌種保藏中心提供；肺炎克雷伯菌購自中國藥品生物制品檢定所，編號：46114-8；培養(yǎng)基：肺炎克雷伯菌和金黃色葡萄球菌都使用營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基[1-2]，購自北京科海軍舟化學(xué)試劑公司。主要儀器、試劑：電熱恒溫培養(yǎng)箱DHG-9240A型（上海一恒科技有限公司），超凈工作臺SW-CJ-4（上海錦屏儀器儀表有限公司）、7230分光光度計（上海第三分析儀器廠）；手提式高壓滅菌鍋GB4027.1.83煤電兩用型（遼寧省丹東市日用五金廠）。試驗所用乙醇等化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌懸液的制備 將上述兩個菌種分別用營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基（蛋白胨10 g、氯化鈉5 g、牛肉浸出粉3 g、蒸餾水1 000 mL）和固體斜面培養(yǎng)基（蛋白胨10 g、氯化鈉5 g、牛肉浸出粉3 g、瓊脂14 g、蒸餾水1 000 mL）[3-4]進(jìn)行活化后，用無菌水1︰2 000稀釋，備用。

1.2.2 供試樣品的制備 （1）金銀花樣品制備：取金銀花適量用水提取兩次，過濾，除雜，合并提取液，濃縮至0.60 g/ m L。（2）薄荷腦樣品制備：稱取薄荷腦0.1 g加95%乙醇2 mL，再加蒸餾水至10 mL，備用。（3）咽康片混合物樣品制備：按配方比例分別加入金銀花、薄荷腦等提取物，混合后制成每片相當(dāng)于金銀花1.05 g、薄荷冰0.025 g的液體口含片（每片重2.0 g，另含其他提取物），備用。

1.2.3 供試樣品對供試菌種的抑菌作用 （1）金銀花提取物最低抑菌濃度測定：配制細(xì)菌液體培養(yǎng)基，分裝于試管內(nèi)，每管4 mL，分兩組，每組6支試管，121℃濕熱滅菌20 min后，準(zhǔn)確稱量金銀花提取物制成18%、27%、36%、45%、54%、63%（mL/mL）系列濃度，依次各取1 mL注入已滅菌的液體培養(yǎng)基中，每個系列接一個菌種，分別準(zhǔn)確注入菌懸液0.1 mL；再取兩支試管做空白對照，然后將試驗管和空白對照管同時放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，觀察生長現(xiàn)象，在空白系列內(nèi)分別接入與上述相同量的克雷伯菌和金黃色葡萄球菌菌懸液，立刻用7230分光光度計測量試驗管和對照管的吸光度值[5-6]。（2）供試樣品與菌懸液混合觀察抑菌效果：取無菌培養(yǎng)皿加入一定量的供試樣品（咽康片混合物按0.8片和0.5片量、原料按相當(dāng)于半片量和一片量加入）、0.1 mL菌懸液和15 mL營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，立刻混合均勻，置35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~20 h，觀察抑菌情況。

2 結(jié)果與討論

2.1 金銀花提取物最低抑菌濃度測定

在550 nm波長下用7230型分光光度計測定培養(yǎng)液的吸收值 ，培養(yǎng)液吸收值與培養(yǎng)液內(nèi)細(xì)菌繁殖速度成正相關(guān)，吸收值升高越快，表示培養(yǎng)液內(nèi)細(xì)菌濃度升高越快。培養(yǎng)液中分別加入了具有抑菌作用的供試液體，起到抑菌作用，故可抑制培養(yǎng)液吸收值上升。將培養(yǎng)后的兩組培養(yǎng)物和空白對照在7230分光光度計上進(jìn)行比色測定，若某一濃度培養(yǎng)物的吸收值與空白對照這一濃度的吸收值相同（或比較接近）者，則表明此培養(yǎng)基中加入的細(xì)菌沒有繁殖和生長，即可視為此濃度為最低抑菌濃度。測定結(jié)果為：金銀花對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度7.2%（mL/mL），對克雷伯菌的最低抑菌濃度5.4 %（mL/mL）。

根據(jù)金銀花樣品的濃度將其轉(zhuǎn)換為質(zhì)量濃度，即對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度為4.32%（g/m L），對肺炎克雷伯菌的最低抑菌濃度為3.24%（g/mL）。

由上述試驗可知，由于細(xì)菌的種類不同，金銀花的抑菌效果有所不同，對肺炎克雷伯菌的抑菌效果強(qiáng)于對金黃色葡萄球菌的抑菌效果。

2.2 供試樣品與菌懸液混合培養(yǎng)后抑菌效果

供試樣品與菌懸液混合抑菌試驗顯示：薄荷腦、金銀花和咽康片混合物均有一定的抑菌效果，而薄荷腦抑菌作用最強(qiáng)。見表1。實驗圖譜見圖1~7。

表1 供試樣品對金黃色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的抑菌效果

圖1 肺炎克雷伯菌陽性對照

圖2 混合樣品1.6 g+肺炎克雷伯菌

圖3 薄荷腦0.025 g+肺炎克雷伯菌

圖4 金黃色葡萄球菌陽性對照

圖6 混合樣品1.6 g+金黃色葡萄球菌

圖7 薄荷0.025 g+金黃色葡萄球菌

綜上試驗結(jié)果可知：按照此配方比例研究制劑咽康片對克雷伯菌和金黃色葡萄菌具有良好抑菌作用，但組合后的樣品抑菌效果增強(qiáng)系數(shù)未作具體實驗和計算，有待于進(jìn)一步研究。

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