基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討小青龍湯治療慢性阻塞性肺疾病的作用機(jī)制

張平安 高娜 陳明哲 張瑩雪 李奕璇 吳建軍

摘要 目的：利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析小青龍湯治療慢性阻塞性肺疾?。–OPD）的作用機(jī)制。方法：在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）檢索小青龍湯藥物活性成分和靶點(diǎn)，繪制中藥-化合物-靶基因網(wǎng)絡(luò)，篩選關(guān)鍵化合物;利用GeneCards和人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(kù)（OMIM）搜索COPD疾病基因;繪制韋恩圖并獲取藥物-疾病共同基因;利用小青龍湯-慢阻肺藥物疾病共同基因繪制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)，根據(jù)網(wǎng)絡(luò)關(guān)系選擇核心基因;對(duì)核心基因分別進(jìn)行基因本體（GO）功能注釋和富集分析和京都基因和基因組百科全書（KEGG）通路富集分析。結(jié)果：挖掘得到小青龍湯中藥活性成分137個(gè)，潛在作用靶點(diǎn)188個(gè)，慢性阻塞性肺疾病相關(guān)靶點(diǎn)6 949個(gè)，小青龍湯-COPD共同靶點(diǎn)160個(gè)，主要富集于92個(gè)生物過程和49條信號(hào)通路上。結(jié)論：小青龍湯中多個(gè)藥物含有山柰酚、槲皮素、（+）-兒茶素、豆甾醇、β-谷固醇等成分，可作用于AKT1、IL6、MAPK1、PTGS2、TP53等核心基因，調(diào)控氧化應(yīng)激反應(yīng)、血小板α-顆粒等生物過程，參與HIF-1、PI3K-AKT信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，干預(yù)氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)等過程，產(chǎn)生抑制炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激的作用，進(jìn)而通過上述過程參與COPD的炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激過程。

關(guān)鍵詞 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);小青龍湯;慢性阻塞性肺疾病;靶基因;GO功能注釋;KEGG通路富集分析;炎癥反應(yīng);氧化應(yīng)激

Abstract Objective：to analyze the mechanism of Xiaoqinglong Decoction in the treatment of chronic obstructive pulmonary disease（COPD） by network pharmacology.Methods：the active ingredients and targets of Xiaoqinglong Decoction were searched in TCMSP database platform，and the traditional Chinese medicine compound target gene network was drawn to screen the key compounds; the COPD disease genes were searched by genecards and OMIM database; the Wayne map was drawn to obtain the drug disease common gene; the PPI protein interaction network was drawn by Xiaoqinglong Decoction COPD drug disease common gene Go functional annotation and KEGG pathway enrichment analysis were performed on the core genes.Results：137 active components of Xiaoqinglong decoction，188 potential targets，6949 targets related to COPD and 160 common targets of Xiaoqinglong Decoction COPD were obtained，which were mainly enriched in 92 biological processes and 49 signal pathways.Conclusion：Many drugs in Xiaoqinglong Decoction contain kaempferol，quercetin，（+）-catechin，stigmasterol，β-sitosterol and other components，which can act on AKT1，IL6，mapk1，PTGS2，TP53 and other core genes，regulate oxidative stress response，platelet α-granule and other biological processes，participate in the regulation of HIF-1，PI3K Akt signaling pathway，intervene in oxidative stress response and inflammatory response，and produce high yield Through the above process，it participates in the inflammatory reaction and oxidative stress process of COPD.

Keywords Network pharmacology; Xiaoqinglong Decoction; Chronic obstructive pulmonary disease; Target gene; Go function annotation; KEGG pathway enrichment analysis; Inflammatory response; Oxidative stress

中圖分類號(hào)：R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.24.003

慢性阻塞性肺疾?。–hronic Obstructive Pulmoriary Disease，COPD）又稱慢阻肺，是一種持續(xù)存在的慢性氣道炎癥疾病，以反復(fù)出現(xiàn)的呼吸道癥狀和不可逆轉(zhuǎn)的氣流受限為特征，發(fā)作期外周氣道和肺實(shí)質(zhì)的中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞以及包括Tc1和ILC3淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的數(shù)量明顯增加，其釋放的諸多炎癥介質(zhì)也與疾病密切相關(guān)[1]。有研究證明持續(xù)的氣道與全身炎癥反應(yīng)與COPD明顯相關(guān)，可以通過趨化因子、免疫細(xì)胞的表達(dá)水平來預(yù)測(cè)COPD的急性加重及預(yù)后[2]。COPD以其逐年升高的發(fā)病率，正逐漸成為影響人們健康的慢性疾病。2017全球疾病負(fù)擔(dān)指出，累計(jì)至2017年全球COPD患者已達(dá)3億人，其中從2007到2017增長(zhǎng)了24.9%[3]。

COPD在中醫(yī)屬于“肺脹”“喘證”?！鹅`樞·經(jīng)脈第十》指出“肺手太陰之脈……是主肺所生病者，咳，上氣喘喝”，認(rèn)為喘證為肺氣不能宣肅而引起。《類證治裁·喘證》提出“喘由外感者治肺，由內(nèi)傷者治腎”，認(rèn)為外感者郁閉肺氣，內(nèi)傷者腎氣不衡，故當(dāng)溫腎以納氣，宣肺以復(fù)升降?！督饏T要略》明確提出：“肺脹，咳而上氣，……心下有水，小青龍加石膏湯主之?！闭J(rèn)為肺脹的病機(jī)為外邪束肺，寒飲內(nèi)停郁而化熱，與肺失宣肅，腎陽(yáng)不足相關(guān)。而小青龍湯出自漢代張仲景的《傷寒論》“傷寒表不解，心下有水氣，干嘔發(fā)熱而咳，……少腹?jié)M或喘者，小青龍湯主之”[4]。小青龍湯針對(duì)外寒內(nèi)飲的病機(jī)而設(shè)，患者多為素體陽(yáng)氣不足寒飲內(nèi)停，又遇寒邪外束，肺氣郁閉而成外寒內(nèi)飲證。有研究證明小青龍湯可廣泛用于表現(xiàn)為外寒內(nèi)飲、痰濕（飲）伏肺者的COPD，癥見咳嗽、咳痰、咳吐痰涎或泡沫樣痰，甚或喘息、氣短、胸悶、憋氣，或見發(fā)熱、惡寒、小便不利者，舌苔白滑、脈弦滑或浮緊[5]。

臨床上對(duì)于COPD的治療常給予支氣管擴(kuò)張劑、β受體激動(dòng)劑聯(lián)合糖皮質(zhì)激素以抑制氣道重塑，改善預(yù)后，但長(zhǎng)期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素存在引起感染等諸多不良反應(yīng)。近年來網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)借助大量的網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)資源，在臨床和實(shí)驗(yàn)的研究中不斷得到應(yīng)用。通過利用系統(tǒng)生物學(xué)的優(yōu)勢(shì)，構(gòu)建藥物-靶點(diǎn)-疾病的整體網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，針對(duì)中藥的微觀藥理來調(diào)控基因的表達(dá)以闡釋藥物多途徑、多靶點(diǎn)治療疾病的調(diào)節(jié)機(jī)制，符合中醫(yī)的整體觀念的理論[6]。故本研究擬從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的角度，研究小青龍湯治療COPD的作用機(jī)制，為進(jìn)一步研究小青龍湯提供思路。

1 資料與方法

1.1 篩選小青龍湯的活性成分和靶基因 在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，http：//ibts.hkbu.edu.hk/LSP/tcmsp.php）中篩選出小青龍湯中藥中的活性成分，活性成分的篩選條件為口服生物利用度（OB）≥30%，類藥性（DL）≥0.18;然后查閱文獻(xiàn)，去除無(wú)對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的成分，得到對(duì)應(yīng)靶基因，然后利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)將靶基因進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。

1.2 制作小青龍湯中藥-化合物-靶基因網(wǎng)絡(luò) 利用篩選出的活性成分和靶基因在Cytoscape 3.7.2軟件上繪制小青龍湯藥物-成分-靶基因網(wǎng)絡(luò)，獲得Network Analyzer數(shù)據(jù)，篩選Degree值選擇關(guān)鍵成分。

1.3 獲取COPD相關(guān)基因，得到小青龍湯-COPD疾病共同基因 以“Chronic Obstructive Pulmonary”為關(guān)鍵詞，在基因數(shù)據(jù)庫(kù)GeneCards（https：//www.genecards.org）、人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(kù)（OMIM）（https：//www.omim.org）中檢索與COPD疾病有關(guān)的基因，取并集然后與小青龍湯藥物基因在Venny2.1網(wǎng)站上（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）繪制韋恩圖，得到藥物-疾病共同基因。

1.4 制作蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，得到藥物疾病核心基?利用藥物-疾病共同基因在STRING（https：//string-db.org/）平臺(tái)上構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（Protein-protein Interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)，選擇蛋白屬種“Homo Sapiens”，最低相互作用閾值“Medium Confidence”為0.4，進(jìn)而設(shè)置其他默認(rèn)參數(shù)。為選擇核心基因利用CytoNCA進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，篩選分析結(jié)果中度中心性DC、介度中心性BC、接近中心性CC、特征向量中心性EC、局部邊連通性LAC等數(shù)值，選Degree值2倍中位值，其他選中位值進(jìn)行篩選，獲取藥物-疾病核心基因。

1.5 進(jìn)行基因本體（GO）富集分析和京都基因和基因組百科全書（KEGG）通路富集分析 通過R 4.0.2軟件將小青龍湯-COPD核心基因進(jìn)行GO基因功能注釋BP、CC、MF（生物過程、細(xì)胞組分、分子功能）和KEGG通路富集分析。根據(jù)GO富集結(jié)果，選取q-value值<0.05，富集基因個(gè)數(shù)BP≥4個(gè)，CC≥2個(gè)，MF≥2個(gè)，共184個(gè)生物過程，KEGG富集結(jié)果根據(jù)q-value值<0.05，富集基因數(shù)≥4個(gè)，共49條通路。其中針對(duì)GO 3個(gè)過程選取前10個(gè)，KEGG選取前30個(gè)繪制柱狀圖。

2 結(jié)果

2.1 小青龍湯活性成分篩選結(jié)果 得到小青龍湯活性成分共137個(gè)，對(duì)應(yīng)靶蛋白基因188個(gè)?；钚猿煞种邪咨?個(gè)，桂枝2個(gè)，五味子7個(gè)，細(xì)辛6個(gè)，麻黃16個(gè)，半夏11個(gè)，干姜5個(gè)，甘草87個(gè)。

2.2 中藥-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò) 通過Cytoscape 3.7.2繪制中藥-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。見圖1。根據(jù)Degree值選取小青龍湯關(guān)鍵成分，如山柰酚、β-谷固醇、槲皮素、豆甾醇、（+）-兒茶素、柚皮苷等主要成分，其中山柰酚為甘草、白芍、細(xì)辛、麻黃的共有成分;β-谷固醇為白芍、桂枝、麻黃、半夏、干姜的共有成分;槲皮素、柚皮苷是麻黃、甘草的共有成分;豆甾醇是半夏、麻黃的共有成分;（+）-兒茶素是麻黃、白芍、桂枝的共有成分。見表1。

2.3 COPD疾病基因靶點(diǎn)、藥物-疾病共同基因 經(jīng)過GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)和OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)搜索得到COPD疾病相關(guān)基因并刪除重復(fù)基因得到6 949個(gè)疾病基因，疾病基因與藥物基因利用Venny2.1平臺(tái)繪制韋恩圖，得到小青龍湯藥物與COPD疾病共同基因160個(gè)。見圖2。

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)和藥物-疾病核心基因 通過STRING平臺(tái)得到PPI蛋白網(wǎng)絡(luò)。利用CytoNCA進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，根?jù)篩選條件，得到AKT1（AKT絲氨酸/蘇氨酸激酶1）、JUN（AP-1轉(zhuǎn)錄因子亞單位）、EGF、IL6（白細(xì)胞介素6受體）、VEGFA（血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A）、MAPK1（絲裂原活化蛋白激酶1）、PTGS2（前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2）、TP53（腫瘤蛋白P53）等核心基因，可知小青龍湯通過這些核心基因發(fā)揮作用。見圖3～4。

2.5 GO功能注釋結(jié)果 小青龍湯-COPD核心基因在R 4.0.2上GO功能注釋結(jié)果得到生物過程57個(gè)，細(xì)胞組分35個(gè)，分子功能92個(gè)，共184個(gè)生物過程。涉及氧化應(yīng)激反應(yīng)（Response To Oxidative Stress）、細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)（Cellular Response To Oxidative Stress）、分泌顆粒腔（Secretory Granule Lumen）、血小板α顆粒（Platelet Alpha Granule）、絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸激酶活性（Protein Serine/Threonine/Tyrosine Kinase Activity）等生物過程。見表2。

2.6 KEGG通路富集分析結(jié)果 小青龍湯-COPD核心基因在R 4.0.2上KEGG通路富集分析結(jié)果得出核心基因主要富集在HIF-1信號(hào)通路（HIF-1 Signaling Pathway）、PI3K-AKT信號(hào)通路（PI3K-AKT Signaling Pathway）、腫瘤壞死因子信號(hào)通路（TNF Signaling Pathway）、MAPK信號(hào)通路（MAPK Signaling Pathway）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路（VEGF Signaling Pathway）等通路。見圖5～6，表2。

3 討論

3.1 COPD發(fā)病機(jī)制 炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)機(jī)制仍被認(rèn)為是COPD的重要發(fā)病機(jī)制，而蛋白酶-抗蛋白酶失衡則與氣道重塑相關(guān)。炎癥機(jī)制主要引起氣道、肺實(shí)質(zhì)和肺血管的慢性炎癥改變;氧化應(yīng)激不但可以導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，還可以引起蛋白酶-抗蛋白酶失活，促進(jìn)炎癥反應(yīng)。相關(guān)研究顯示，COPD的發(fā)病機(jī)制以氣道炎癥為核心，以線粒體功能障礙、上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、氧化應(yīng)激、鐵離子代謝和基因多態(tài)性有關(guān)，參與COPD的肺泡破壞，肺功能的下降以及COPD的加重[7]。因此有關(guān)氣道炎癥與氧化應(yīng)激的研究對(duì)研發(fā)治療COPD的藥物有重要意義。

3.2 小青龍湯關(guān)鍵藥物成分作用機(jī)制分析 通過小青龍湯中藥-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的分析得到小青龍湯的關(guān)鍵化學(xué)成分為山柰酚、β-谷固醇、槲皮素、豆甾醇、（+）-兒茶素、柚皮苷。有研究證明山柰酚通過調(diào)節(jié)促炎酶的活性和炎癥相關(guān)基因表達(dá)，抑制轉(zhuǎn)錄因子、黏附分子以及基質(zhì)金屬蛋白酶發(fā)揮抗炎作用[7]。其抗炎作用的發(fā)揮與MAPK、PI3K和Janus激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活通路有關(guān)，通過降低巨噬細(xì)胞衍生趨化因子、干擾素誘導(dǎo)蛋白-10、白細(xì)胞介素-8等炎癥介質(zhì)的釋放，發(fā)揮抗炎作用[9]。山柰酚還可以顯著抑制還原型輔酶Ⅱ或Fe2+誘導(dǎo)的脂質(zhì)微粒系統(tǒng)中的脂質(zhì)過氧化，發(fā)揮抗氧化應(yīng)激的作用[10]。有研究證明槲皮素顯著抑制缺氧誘導(dǎo)的人肝癌Hep G2細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，其機(jī)制可能通過槲皮素抑制缺氧誘導(dǎo)的人肝癌細(xì)胞中HIF-1α蛋白的累積發(fā)揮抗氧化、抗腫瘤作用[11]。（+）-兒茶素具有抑制脂質(zhì)過氧化及DNA氧化損傷，調(diào)控細(xì)胞活性氧與胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)及細(xì)胞因子水平，發(fā)揮抗氧化、抗腫瘤作用[12]。有研究證明豆甾醇通過增加過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽的活性發(fā)揮抗氧化作用;抑制環(huán)氧化酶-2、誘生型一氧化氮合酶的表達(dá)發(fā)揮抗炎作用[13]。可知小青龍湯可能通過以上藥物成分發(fā)揮抗氧化、抗炎癥的作用。

3.3 預(yù)測(cè)小青龍湯治療COPD的靶點(diǎn) 由網(wǎng)絡(luò)分析得出小青龍湯作用于COPD的核心基因可能為AKT絲氨酸/蘇氨酸激酶1、白細(xì)胞介素6受體、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A、絲裂原活化蛋白激酶1、前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2、腫瘤蛋白P53。IL-6是IL-1和少量TNF-α介導(dǎo)的單核細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞炎癥反應(yīng)的多效性細(xì)胞因子[14]。有研究證明IL-6可以促進(jìn)B細(xì)胞增殖分化和分泌抗體;誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，引起機(jī)體發(fā)熱、白細(xì)胞增多、血管通透性增高而參與炎癥反應(yīng)[15]。前列腺素內(nèi)過氧化物酶又稱環(huán)氧合酶（COX），COX-2是目前發(fā)現(xiàn)的哺乳動(dòng)物中含有的一種環(huán)氧合酶同工酶，而多種來源于細(xì)胞內(nèi)外的刺激因子如白細(xì)胞介素-1（IL-1）、脂多糖（LPS）、腫瘤壞死因子（TNF）、以及活性氧中間產(chǎn)物可以在成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)COX-2的表達(dá)，增強(qiáng)活性氧的損傷[16]。有研究證明花生四烯酸的代謝產(chǎn)物前列環(huán)素能夠通過環(huán)氧合酶途徑而引起缺氧條件下的缺氧性肺血管收縮，加重缺氧的狀態(tài)[17]。有研究已證實(shí)p38 MAPK信號(hào)通路在肺部疾病中發(fā)揮的重要作用是通過炎癥反應(yīng)、腫瘤侵襲等途徑來實(shí)現(xiàn)的[18]。絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）可以被多種刺激如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、各種應(yīng)激作用于MAPK中的蘇氨酸和酪氨酸殘基磷酸化而活化，研究發(fā)現(xiàn)p38 MAPK在COPD和哮喘的發(fā)病過程中與氣道重塑相關(guān)，氣道平滑肌細(xì)胞p38 MAPK的明顯活化與香煙提取物的刺激密切相關(guān)，抑制p38 MAPK的活化可以緩解平滑肌細(xì)胞的增生而改善氣道重塑[19]。由此可知小青龍湯可能通過白細(xì)胞介素6受體、絲裂原活化蛋白激酶1以及前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2等靶點(diǎn)，發(fā)揮抗炎、抗氧化應(yīng)激的作用。

3.4 小青龍湯治療COPD生物過程預(yù)測(cè)分析 通過GO功能注釋結(jié)果分析得到核心基因主要富集于氧化應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)、分泌顆粒腔、血小板α顆粒、絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸激酶活性等生物過程。機(jī)體在受到內(nèi)外源性傷害因子刺激的情況下會(huì)發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，自由基大量產(chǎn)生，并釋放大量活性氧（ROS），在此過程中自身抗氧化能力下降而致使氧化與抗氧化能力的失衡[20]。有研究證明氧自由基及活性氧可以直接減弱黏膜功能和內(nèi)皮細(xì)胞的黏附性，增強(qiáng)內(nèi)皮滲透性，最終對(duì)氣道上皮細(xì)胞造成直接損傷及炎癥反應(yīng)[21]。血小板除參與止血和血栓形成外，還具有調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥反應(yīng)、創(chuàng)傷修復(fù)、免疫應(yīng)答、血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移等作用[22]。血小板α-顆粒含有的大量AngⅠ可以激活PI3K/AKT信號(hào)通路，抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，維持血管壁完整性;抑制核因子κB的合成，抑制炎癥反應(yīng);血小板激活后，α-顆粒脫顆粒，進(jìn)而釋放大量P-選擇素，而抑制P-選擇素可明顯減少血栓形成及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)[23]。由此可知小青龍湯可能通過以上生物過程發(fā)揮抗炎，抗氧化應(yīng)激的作用。

3.5 小青龍湯治療COPD疾病通路結(jié)果預(yù)測(cè)分析 ?KEGG通路富集分析結(jié)果顯示，小青龍湯-COPD藥物疾病核心基因主要富集在HIF-1、PI3K-AKT、腫瘤壞死因子、MAPK信號(hào)通路中。COPD患者因?yàn)橥夤δ苷系K，彌散功能受損常常存在缺氧狀態(tài)。Semenza等[24]在1992年研究促紅細(xì)胞生成素基因表達(dá)的影響因素時(shí)，發(fā)現(xiàn)了缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1）存在于缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞核提取物中，并且與缺氧應(yīng)激相關(guān)。在機(jī)體處于缺氧的情況下，HIF-1α可以大量聚集于胞質(zhì)內(nèi)而不被降解消耗。在機(jī)體處于缺氧的狀態(tài)時(shí)，大量聚集的HIF-1α能夠進(jìn)入細(xì)胞核并且和HIF-1β逐步相結(jié)合，結(jié)果形成了活化并且可以抗蛋白酶水解的穩(wěn)定型異源二聚體HIF-1[25]。此外活化的HIF-1會(huì)結(jié)合并激活缺氧反應(yīng)元件（Hypoxia Response Element，HRE）這一特定的缺氧易感基因的HRE使其開始轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而繼續(xù)調(diào)控下游靶基因的表達(dá)，以發(fā)揮介導(dǎo)細(xì)胞缺氧適應(yīng)性反應(yīng)的作用[26]。HIF-1還可以通過調(diào)控缺氧代償性反應(yīng)、新生血管的生成調(diào)節(jié)、免疫反應(yīng)以及細(xì)胞外基質(zhì)纖維化與能量代謝、物質(zhì)運(yùn)輸?shù)冗^程，使組織的缺氧耐受力不斷增強(qiáng)，可以使機(jī)體更好地適應(yīng)低氧環(huán)境的影響[27]。HIF-1抗細(xì)胞凋亡的作用還與PI-3K/AKT通路、MAPK信號(hào)通路有關(guān)。Jiang等[28]在研究COPD的發(fā)病機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，HIF-1可以激活核因子κB信號(hào)通路以加速COPD的進(jìn)展。另有研究證明PI3K-AKT信號(hào)通路可以通過激活磷酸化的蛋白激酶B（Protein Kinase B，AKT）發(fā)揮調(diào)控炎癥細(xì)胞活化、炎癥介質(zhì)合成和釋放、抗氧化反應(yīng)等作用，最終誘導(dǎo)氣道平滑肌增殖而引起氣道重塑[29]。有研究證明抑制MAPK信號(hào)可以抑制細(xì)胞凋亡，抑制炎癥反應(yīng)，保護(hù)組織缺血/再灌注損傷[30]。由此可知小青龍湯正是通過上述通路發(fā)揮抗炎、抗氧化應(yīng)激的作用。

綜上所述，本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)小青龍湯治療COPD的分子機(jī)制可能為：小青龍湯中多個(gè)藥物含有山柰酚、槲皮素、（+）-兒茶素、豆甾醇、β-谷固醇等成分，可作用于AKT1、IL6、MAPK1、PTGS2、TP53等核心基因，調(diào)控氧化應(yīng)激反應(yīng)、血小板α-顆粒等生物過程，參與HIF-1、PI3K-AKT信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，干預(yù)氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)等過程，產(chǎn)生抑制炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激的作用，進(jìn)而通過上述過程參與COPD的炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激過程。其結(jié)果為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證提供了思路。

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（2020-12-16收稿 責(zé)任編輯：魏慶雙）