質(zhì)量法與酶活法檢測(cè)血清脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2在心腦血管疾病中的比較

宋來(lái)春

(山東省聊城市第三人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科, 山東 聊城, 252000)

動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展是導(dǎo)致心腦血管疾病的常見(jiàn)病因。研究[1-2]表明，動(dòng)脈粥樣斑塊的穩(wěn)定性與心肌梗死、腦梗死的發(fā)生呈顯著相關(guān)性。目前，臨床上常采用血管超聲(IVUS)、血管造影和頸動(dòng)脈核磁共振(MRI)等方法評(píng)估斑塊成分和血管狹窄程度，采用低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)等指標(biāo)判斷中高危人群心肌梗死或腦梗死的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[3-4]。但這些項(xiàng)目同樣具有內(nèi)在的局限性，如影像學(xué)方法在診斷效力上高于血清學(xué)指標(biāo)，但往往具有侵入性、檢測(cè)費(fèi)用高的限制，不適合普遍檢測(cè)[5]。hs-CRP對(duì)感染性疾病具有較好的敏感性，在心血管疾病和炎癥領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用效果，但其特異性較差，故在臨床上多作為一種輔助性指標(biāo)，且多用于感染性疾病(細(xì)菌、病毒等)的鑒別診斷[6]。

脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp-PLA2)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種與動(dòng)脈粥樣硬化和缺血性心腦血管疾病相關(guān)的血管炎癥標(biāo)志物，主要有2種存在形式(胞漿內(nèi)和血液循環(huán)中Lp-PLA2)[7]。循環(huán)中的Lp-PLA2主要與低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)結(jié)合，少部分與高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和極低密度脂蛋白膽固醇(vLDL-C)結(jié)合[4]。此外，由于Lp-PLA2可以使血小板活化因子水解，因此也被稱(chēng)為血小板活化因子乙酰水解酶。Lp-PLA2可水解斑塊中的氧化磷脂質(zhì)產(chǎn)生溶血卵磷脂和氧化游離脂肪酸，使血管中的斑塊破裂，形成血栓阻塞血管[3, 8]。因此, Lp-PLA2不僅參與了動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展，并且與斑塊穩(wěn)定性喪失以及最終破裂相關(guān)。Lp-PLA2是動(dòng)脈血管炎癥的特異性標(biāo)志物，存在于巨噬細(xì)胞大量聚集和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)存在的區(qū)域，而這些區(qū)域大多有斑塊或血栓存在[9]。Kolodgie F等[10]通過(guò)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化患者血管內(nèi)的不同時(shí)期斑塊的病理切片進(jìn)行染色，并檢測(cè)患者血液中Lp-PLA2水平，探討了Lp-PLA2與斑塊嚴(yán)重程度的相關(guān)性，染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)Lp-PLA2水平會(huì)隨著斑塊的發(fā)展而增加。

目前, Lp-PLA2的檢驗(yàn)方法有質(zhì)量法和酶活法[11-12], 質(zhì)量法是利用免疫法檢測(cè)血液中Lp-PLA2的濃度或質(zhì)量，而酶活法則是檢測(cè)Lp-PLA2酶的活性。由于方法學(xué)原理不同，質(zhì)量法和酶活法在檢測(cè)結(jié)果上表現(xiàn)出較大差異，因此關(guān)于Lp-PLA2預(yù)測(cè)心肌梗死和腦梗死風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)研究一直頗有爭(zhēng)議[11, 13-15]。本研究探討了質(zhì)量法和酶活法檢測(cè)Lp-PLA2在急性心肌梗死和急性腦梗死中的診斷效能，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月—2019年1月在本院心內(nèi)科住院的行血管造影術(shù)(CAG)并確診的38例急性心肌梗死患者納入急性心肌梗死組，男24例(63.16%), 女14例(36.84%), 年齡39～63歲，平均(51.22±11.38)歲。將29例神經(jīng)內(nèi)科急性腦梗死患者納入急性腦梗死組，男17例(58.62%), 女12例(41.38%), 年齡50～70歲，平均(60.14±9.86)歲。將體檢中心76例健康者納入健康組，男45例(59.21%), 女31例(40.79%), 年齡17～58歲，平均(50.45±10.95)歲。所有受試對(duì)象接受心電圖、超聲心動(dòng)圖、MRI、血脂指標(biāo)等檢查。本研究已通過(guò)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 有心肌炎、心房纖顫、瓣膜性心臟病等; ② 出血性腦梗死、血管畸形、既往有血液系統(tǒng)疾病、其他來(lái)源的腦栓塞等; ③ 嚴(yán)重合并癥(如心、肺、腎功能不全，惡性腫瘤，凝血功能障礙等); ④ 正服用他汀類(lèi)藥物、阿司匹林等降脂溶栓類(lèi)藥物; ⑤ 有研究者認(rèn)為存在不適合參加本臨床研究的其他情況; ⑥ 3個(gè)月內(nèi)或正在參加其他臨床試驗(yàn)者。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集方法: 所有受試對(duì)象應(yīng)避免高脂飲食和飲酒，入院前未服用降脂藥等影響Lp-PLA2濃度的藥物。收集所有入組對(duì)象清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集的靜脈血, 3 000轉(zhuǎn)/min離心10 min。分離血清，并分裝保存于-40 ℃冰箱待用。

1.2.2 檢測(cè)方法: 主要試劑為L(zhǎng)p-PLA2檢測(cè)試劑盒(質(zhì)量法), Lp-PLA2檢測(cè)試劑盒(酶活法)。生產(chǎn)廠家均保密，在試劑有效期內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，操作步驟按照說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。急性心肌梗死/腦梗死的診斷性能以血管造影結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 基本信息及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果比較

3組受試對(duì)象的性別、年齡、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和收縮壓比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。急性心肌梗死組的質(zhì)量法檢測(cè)Lp-PLA2水平和酶活法檢測(cè)Lp-PLA2水平與健康組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 而急性腦梗死組僅質(zhì)量法檢測(cè)Lp-PLA2水平與健康組差異顯著(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 2種檢測(cè)方法在急性心肌梗死組與對(duì)照組中的檢測(cè)結(jié)果和診斷評(píng)價(jià)

急性心梗組38例中，質(zhì)量法檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性36例、陰性2例，陽(yáng)性率94.74%, 酶活法檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性35例、陰性3例，陽(yáng)性率92.11%。健康組76例受試對(duì)象的2種方法檢測(cè)結(jié)果均為陰性。2種Lp-PLA2檢測(cè)方法的陽(yáng)性率相當(dāng)，質(zhì)量法和酶活法診斷試驗(yàn)受試者工作特征曲線(xiàn)(ROC)曲線(xiàn)下面積分別為0.851(95%CI為0.810～0.910)、0.846(95%CI為0.786～0.893)。2種檢測(cè)方法的診斷效能比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 3組基本信息及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果比較

TC: 總膽固醇; TG: 甘油三酯。與健康組比較, *P<0.05。

2.3 2種檢測(cè)方法在急性腦梗死組與對(duì)照組中的檢測(cè)結(jié)果和診斷評(píng)價(jià)

急性腦梗死組29例中，質(zhì)量法檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性24例，陰性5例，陽(yáng)性率為82.76%; 而酶活法檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性2例，陰性27例，陽(yáng)性率為6.90%。健康組76例受試對(duì)象采用2種方法檢測(cè)Lp-PLA2水平，結(jié)果顯示均為陰性。質(zhì)量法和酶活法的ROC曲線(xiàn)下面積分別為0.784(95%CI為0.750～0.850)、0.101(95%CI為0.001～0.200)。2種檢測(cè)方法的診斷效能比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 質(zhì)量法檢測(cè)急性腦梗死的效力優(yōu)于酶活法。

3 討 論

本研究結(jié)果表明，質(zhì)量法和酶活法檢測(cè)Lp-PLA2對(duì)急性心肌梗死的檢測(cè)陽(yáng)性率均在90%以上，但酶活法檢測(cè)Lp-PLA2對(duì)急性腦梗死的診斷效力遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于質(zhì)量法檢測(cè)。因此，在心肌梗死疾病的臨床診治中, 2種方法學(xué)均可在一定程度上反映中高危人群發(fā)生心肌梗死的風(fēng)險(xiǎn)，而在腦梗死的診治過(guò)程中，建議采用質(zhì)量法檢測(cè)Lp-PLA2, 而酶活法檢測(cè)假陰性率過(guò)高，造成漏診的概率更大。關(guān)于酶活法診治急性腦?；颊哧幮月蔬^(guò)高的問(wèn)題，可能與亞洲人群中存在較多的Lp-PLA2活力突變相關(guān)。有研究[16]顯示，約25%亞洲人群的Lp-PLA2活力下降或完全喪失，而這些Lp-PLA2活力喪失或降低的人群患動(dòng)脈粥樣硬化性心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)與不攜帶突變的人群類(lèi)似，這就導(dǎo)致檢測(cè)Lp-PLA2酶的活力無(wú)法準(zhǔn)確預(yù)測(cè)部分人群的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

實(shí)際上，質(zhì)量法檢測(cè)Lp-PLA2同樣存在一些問(wèn)題[17-19]。比如，目前質(zhì)量法檢測(cè)Lp-PLA2的原理主要是利用抗原抗體結(jié)合形成沉淀進(jìn)行檢測(cè)，但在人體血液循環(huán)中, Lp-PLA2 以與脂蛋白顆粒結(jié)合形式存在，其中約2/3 的Lp-PLA2與LDL-C結(jié)合, 1/3與HDL-C和VLDL-C結(jié)合，也正是由于Lp-PLA2與不同脂蛋白(尤其是LDL-C)的結(jié)合，對(duì)LP-PLA2蛋白的檢出造成了干擾，使得檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差[4, 7]。因此，篩選出耐脂蛋白干擾能力的抗體對(duì)于提高質(zhì)量法檢測(cè)Lp-PLA2的準(zhǔn)確性具有重要意義[20-21]。

綜上所述, Lp-PLA2作為一種用于心腦血管疾病預(yù)警的新指標(biāo)，雖然在心肌梗死和腦梗死等疾病中得到推廣，但仍有許多工作需要進(jìn)一步完善。從相關(guān)研究來(lái)看, Lp-PLA2的研究成果眾多，均已證實(shí)Lp-PLA2在預(yù)測(cè)心肌梗死和腦梗死方面具有較高的應(yīng)用價(jià)值。目前，國(guó)內(nèi)外相關(guān)生產(chǎn)廠家較多，所用的方法學(xué)或檢測(cè)平臺(tái)更是多樣，對(duì)于Lp-PLA2的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)說(shuō)，使用各種檢測(cè)平臺(tái)所得出的結(jié)果是否具有可比性仍然值得商榷，而這也是各大醫(yī)院將Lp-PLA2引入臨床前應(yīng)考慮的首要因素。質(zhì)量法檢測(cè)血清Lp-PLA2在急性心肌梗死和急性腦梗死的診斷中具有較高的特異度與準(zhǔn)確率，可作為急性心肌梗死和急性腦梗死的診斷方法，彌補(bǔ)了心血管造影的局限性。