miR-155在不同病理特征胃癌患者癌組織中的表達(dá)情況及其對預(yù)后的影響

趙芳宗 王 培 李丹丹 朱小娟

胃癌是常見消化系統(tǒng)惡性腫瘤，早期無明顯癥狀，胃鏡常規(guī)篩查普及率低，多數(shù)患者確診已到晚期，失去最佳治療時(shí)機(jī)。MiRNA作為生物學(xué)研究熱點(diǎn)已有時(shí)日，人類miRNA具有充當(dāng)腫瘤基因或抑制瘤基因作用，對其它靶基因表達(dá)和信號通路有調(diào)控作用，在腫瘤發(fā)生、進(jìn)展及轉(zhuǎn)歸中有重要作用[1-2]。miR-155目前被發(fā)現(xiàn)與乳腺癌、直腸癌等多種惡性腫瘤發(fā)生有關(guān)，在多種血液系統(tǒng)腫瘤和實(shí)體瘤中有高表達(dá)[3]。目前關(guān)于miR-155與胃癌關(guān)系的研究甚少，本研究分析胃癌癌組織miR-155表達(dá)與預(yù)后和鉑類化療后效果的關(guān)系，為今后胃癌病情觀察和療效評估提供參考，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

納入標(biāo)準(zhǔn)[4-5]：穿刺細(xì)胞學(xué)或胃鏡組織病理學(xué)診斷的胃癌；未曾接受過放化療；影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)可測量腫瘤靶病灶；ECOG≤2分；預(yù)計(jì)生存時(shí)間≥1個(gè)月；肌酐<1.5倍ULN，膽紅素<1.5倍ULN，堿性磷酸酶≤2.5倍ULN，谷丙及谷草轉(zhuǎn)氨酶≤2.5倍ULN，血小板計(jì)數(shù)≥100×109/L，血紅蛋白≥80 g/L，中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)≥2.0×109/L，白細(xì)胞計(jì)數(shù)≥4.0×109/L。排除標(biāo)準(zhǔn)[6-7]：其它惡性腫瘤；為控制的高血壓、糖尿病、感染；哺乳期及妊娠期女性。從病理科獲取研究對象經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋組織標(biāo)本和距癌組織至少2 cm的癌旁非癌組織標(biāo)本。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)于2013年1月至2018年1月納入胃癌患者87例，患者年齡、性別分布及分化情況等見表1。

1.2 方法

使用過美國LC Science公司提供的RNA提取式試劑盒，按說明書操作，用瓊脂糖凝膠電泳法檢測RNA完整性，miR-155莖環(huán)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)引物為5'-CGC TGC TAC CTG AGA GTA GAC CAG ATG CAG CGA CCC CT-3'。傷害博仕生物技術(shù)公司提供的反轉(zhuǎn)錄試劑盒配置10 μl反轉(zhuǎn)錄體系，37 ℃下反應(yīng)15 min，85 ℃下反應(yīng)5 s，之后放在-20 ℃中保存。用Real-time PCR檢測miR-155，涉及引物，用SYBR Green實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒配置25 μl PCR反應(yīng)體系，94 ℃下反應(yīng)3 min，預(yù)變性后在94 ℃下反應(yīng)30 s，45 ℃下反應(yīng)30 s，72 ℃下反應(yīng)30 s，35個(gè)循環(huán)，所有反應(yīng)均有2個(gè)復(fù)孔，記錄每管中熒光信號達(dá)到的閾值時(shí)經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，取2次平均值，經(jīng)內(nèi)參基因歸一化，計(jì)算癌組織和配對癌旁組織miR-155水平。

1.3 觀察指標(biāo)

①對比癌組織與癌旁組織中miR-155水平；②觀察癌組織中miR-155水平與臨床病理特征的關(guān)系；③將肺癌組織中miR-155表達(dá)高于本研究中平均水平的患者歸為高表達(dá)組，低于平均水平的歸為低水平組，對比兩組進(jìn)展生存時(shí)間；④癌組織miR-155水平不同療效組中的表達(dá)。其中療效參考RECIST1.1版本相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[8]：目標(biāo)病灶：目標(biāo)病灶完全消失，病理淋巴結(jié)短徑減少至10 mm以下，且所有非目標(biāo)病灶消失，腫瘤標(biāo)記物水平正常，無新發(fā)灶，為完全緩解；所有目標(biāo)灶消失，病理淋巴短徑均將至10 mm以下，有1個(gè)或多個(gè)非目標(biāo)灶持續(xù)存在或(和)腫瘤標(biāo)記物水平持續(xù)高于正常值為部分緩解，或目標(biāo)病灶最大徑之和較基線縮小至少30%，無新發(fā)病灶或(和)非目標(biāo)病灶進(jìn)展也可判斷為部分緩解；目標(biāo)病灶最大徑之和較基線縮小至少30%，同時(shí)無新病灶出現(xiàn)或(和)非目標(biāo)病灶進(jìn)展，為穩(wěn)定；此外均視為進(jìn)展。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁肺癌組織中miR-155水平對比

癌組織miR-155平均值為(0.449±0.031)，癌旁非癌組織為(1.124±0.110)，t=55.090(P=0.0000)。

2.2 癌組織中miR-155水平與臨床病理特征的關(guān)系

侵犯層次為T3/T4者miR-155表達(dá)較T1/T2低；TNM分期為Ⅲ/Ⅳ者較Ⅰ/Ⅱ者miR-155低；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者miR-155水平較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低。以上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 胃癌癌組織中miR-155水平與其臨床病理特征的關(guān)系

2.3 隨訪6個(gè)月癌組織miR-155高表達(dá)組與低表達(dá)組預(yù)后對比

低表達(dá)組共49例，隨訪6個(gè)月總生存率為79.59%(39/49),高表達(dá)組隨訪6個(gè)月總生存率為93.88%(46/49)，χ2=8.099(P=0.0044)。低表達(dá)組6個(gè)月無進(jìn)展生存率為71.43%(35/49)，高表達(dá)組為85.71%(42/49)，χ2=6.632(P=0.0100)。miR-155與PTEN表達(dá)呈正相關(guān)(γ=0.813，P<0.01)。

2.4 癌組織miR-155水平不同療效組中的表達(dá)

miR-155水平在癌組織中表達(dá)水平由高至低依次為完全緩解組、部分緩解組、病變穩(wěn)定組、病變進(jìn)展組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。相關(guān)性分析(Spearman)發(fā)現(xiàn)療效與癌組織miR-155表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(γ=-0.561，P<0.01)。

表2 胃癌癌組織中miR-155在不同療效患者中的表達(dá)

3 討論

MinRNA是非編碼小分子RNA，轉(zhuǎn)錄后水平對目標(biāo)基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)負(fù)調(diào)控，引起靶mRNA分子降解，或出現(xiàn)翻譯抑制。本研究中miR-155廣泛分布在人類細(xì)胞及組織中，是發(fā)現(xiàn)較早的miRNAs之一，在多種惡性腫瘤中有異常表達(dá)，例如上皮型卵巢癌、膀胱癌、結(jié)直腸癌、黑色素瘤等[9]。目前許多研究發(fā)現(xiàn)其在組織中表達(dá)具有特異性，關(guān)于其在癌組中的表達(dá)意義研究逐漸增多。本研究中對比胃癌患者癌旁非癌組織和癌組中miR-155表達(dá)水平，癌組織miR-155平均值為(0.449±0.031)，癌旁非癌組織表達(dá)為(1.124±0.110)(P<0.05)。這與梁雪藝等[10]研究者報(bào)道的胃癌晚期患者癌組織中miR-155、miR-192水平較癌旁組織表達(dá)低，miR-30a較癌旁組織高的結(jié)果基本一致。

目前關(guān)于miR-155與癌癥的大部分研究發(fā)現(xiàn)miR-155高表達(dá)患者預(yù)后相對較好；但也有個(gè)別研究發(fā)現(xiàn)miR-155在惡性腫瘤發(fā)生進(jìn)展中具有促癌基因作用，其表達(dá)與預(yù)后為負(fù)相關(guān)[11-12]。miR-155表達(dá)在不同腫瘤患者中表示不同的預(yù)后，這可能與腫瘤組織特異性有關(guān)，或是miR-155樣本提取不同所致，例如一些研究者是觀察血漿miR-155水平或是細(xì)胞miR-155水平，一些研究者是觀察血清miR-155水平，而本研究觀察組織miR-155水平[13-14]。在本研究中癌組織miR-155水平高表達(dá)預(yù)示較好的預(yù)后。侵犯層次為T3/T4者miR-155表達(dá)較T1/T2低；TNM分期為Ⅲ/Ⅳ者較Ⅰ/Ⅱ者miR-155低；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移這miR-155水平較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低。而早期胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者病情更嚴(yán)重，其預(yù)后受諸多因素制約，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高分期、侵犯層次深是胃癌預(yù)后不良因子。本研究通過對比高表達(dá)組和低表達(dá)組無進(jìn)展生存時(shí)間，發(fā)現(xiàn)低表達(dá)組6個(gè)月總生存率為79.59%，無進(jìn)展生存率為71.43%，均較高表達(dá)組(93.88%、85.71%)低(P<0.01)。以上研究結(jié)果均提示胃癌患者癌組織中miR-155水平高低與預(yù)后密切相關(guān)。

鉑類藥物是晚期胃癌一線用藥，但是腫瘤細(xì)胞有鉑類耐藥現(xiàn)象，導(dǎo)致臨床治療面臨巨大困難。miRNA異常表達(dá)與腫瘤對鉑類化療藥物的敏感程度相關(guān)；一些研究者指出晚期胃癌患者miR-21及miR-181b表達(dá)與含奧沙利鉑化療后預(yù)后有關(guān)，其中低表達(dá)組預(yù)后較高表達(dá)組好[15]?，F(xiàn)有研究均認(rèn)為其表達(dá)與化療效果有一定關(guān)系。本研究通過對比發(fā)現(xiàn)miR-155水平在癌組織中表達(dá)水平由高至低依次為完全緩解組、部分緩解組、病變穩(wěn)定組、病變進(jìn)展組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步相關(guān)性分析證明癌組織miR-155表達(dá)與鉑類化療效果呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.01)，提示miR-155有抑制胃癌基因作用。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-155能抑制鋅指 E-盒結(jié)合同源異型盒 1基因表達(dá)，從而抑制胃癌腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，胃癌組織miR-155表達(dá)水平與胃癌患者預(yù)后及鉑類化療方案療效相關(guān)，是觀察胃癌進(jìn)展和預(yù)后的重要指標(biāo)。