新生兒葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥的發(fā)生情況及基因突變類型

嚴(yán)芝光 姚海東 黃恩普

(廣西防城港市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，防城港市 538021，電子郵箱：290386593@qq.com)

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G-6-PD)缺乏癥為臨床常見的一種X連鎖不完全顯性遺傳性疾病，其發(fā)病率呈“南高北低”分布，廣東、廣西、海南等南方地區(qū)是G-6-PD缺乏癥高發(fā)地區(qū)，發(fā)生率為4%～15%[1]。臨床上，G-6-PD缺乏癥患者由于酶活性缺乏，出現(xiàn)誘因時(shí)可引起多種溶血性疾病，包括急性溶血性貧血、新生兒黃疸、感染性溶血、藥物性溶血性貧血、蠶豆病等，嚴(yán)重時(shí)可影響新生兒健康成長[2]。本研究探討新生兒G-6-PD缺乏癥的發(fā)生情況及G-6-PD基因突變類型，進(jìn)一步了解本地區(qū)G-6-PD基因多態(tài)性分布情況，提高臨床對G-6-PD缺乏癥不同突變引起的疾病的診療水平。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入觀察對象者為2017年1月至2018年12在本院分娩的2 058例新生兒。納入標(biāo)準(zhǔn):胎齡≥37周,無新生兒黃疸及嚴(yán)重臟器疾病。排除臨床資料信息不完整者。其中男性1 265例，女性793例。

1.2 檢測方法 收集研究對象的臍帶血進(jìn)行G-6-PD活性分析，對疑似酶活性缺乏者進(jìn)一步進(jìn)行基因突變類型分析。(1) G-6-PD活性檢測采用改良G-6-PD定量比值法檢測G-6-PD/6-磷酸葡糖酸脫氫酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,6-PGD)比值，試劑由中山生物工程有限公司提供(批號(hào)：201610025/201705013)，按照試劑盒說明書嚴(yán)格操作，以G-6-PD/6-PGD<1.0判定為G-6-PD缺乏。(2)對于酶活性缺乏者，應(yīng)用熒光PCR熔解曲線法，使用廈門致善有限公司的G-6-PD基因突變檢測試劑盒(批號(hào)：16102201/17051001)檢測我國人群中常見的12種G-6-PD基因突變類型：c.95A>G、c.383T>C、c.392G>T、c.487G>A、c.517T>C、c.592C>T、c.871G>A、c.1004C>A、c.1024C>T、c.1360C>T、c.1376G>T、c.1388G>A。均按照試劑盒說明書嚴(yán)格操作。

2 結(jié) 果

2.1 G-6-PD活性檢測結(jié)果 2 058例新生兒中，檢出G-6-PD缺乏共170例(8.26%)。在男性、女性患兒中，G-6-PD缺乏分別有137例、33例。

2.2 G-6-PD缺乏癥患者基因突變情況 對170例G-6-PD活性缺乏患兒進(jìn)行基因突變分析，最常見的突變類型為c.1388G>A、c.95A>G、c.1376G>T，分別占38.23%、27.06%、22.94%。見表1及圖1。

表1 G-6-PD基因突變位點(diǎn)分布情況

圖1 常見3種G-6-PD突變位點(diǎn)熔解曲線圖

3 討 論

G-6-PD基因定位于人體X染色體長臂2區(qū)8帶(Xq28)，包括13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子，全長20 114 bp，編碼515個(gè)氨基酸[3]。全球已報(bào)告有200多種G-6-PD基因突變，我國人群中已發(fā)現(xiàn)25種，其中c.95A>G、c.1376G>T、c.1388G>A為最常見的3種突變類型[4]。致病基因的突變導(dǎo)致基因表達(dá)下降或酶結(jié)構(gòu)改變，直接表現(xiàn)為G-6-PD活性降低，導(dǎo)致還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的生成障礙，影響了磷酸戊糖代謝，當(dāng)出現(xiàn)一定誘因，如攝取蠶豆、發(fā)生某些感染或暴露于某些藥物情況下，紅細(xì)胞不能抵抗氧化性的損傷而受到破壞，從而引起溶血性疾病。男性半合子和女性純合子均表現(xiàn)為G-6-PD活性顯著缺乏，臨床癥狀比較明顯；女性雜合子發(fā)病與否及程度，與其G-6-PD缺乏的細(xì)胞數(shù)量在細(xì)胞群中所占比例相關(guān)，在臨床上有不同表現(xiàn)。本研究結(jié)果顯示，170例G-6-PD活性缺乏患兒中，男性占80.59%(137/170)，女性僅占19.41%(33/170)，這與G-6-PD缺乏癥的X連鎖不完全顯性遺傳的特性有很大關(guān)系，其中女性雜合子的酶活性并不全部缺乏,酶活性變化范圍很大，表型可正常[5]。因此G-6-PD缺乏癥基因突變位點(diǎn)的確診，可為G-6-PD缺乏癥引起的各類溶血性疾病提供更準(zhǔn)確的診療依據(jù)。

G-6-PD缺乏癥發(fā)病率與地域性和民族性有關(guān)，兩廣地區(qū)發(fā)生率較高，廣東省東莞市的發(fā)病率為4.59%[6]，珠海市斗門區(qū)發(fā)病率5.86%[7]，江門區(qū)發(fā)病率為5.07%[8]，而廣西柳州市的發(fā)病率達(dá)7.66%[9]，欽州市發(fā)病率更高，達(dá)10.18%[10]。其中致病基因突變位點(diǎn)頻率既有相同之處又存在差別，說明不同地域不同民族的G-6-PD基因突變既有同源性又有差異性。防城港市是中國西南地區(qū)唯一一個(gè)沿邊沿海的城市，是一個(gè)多民族聚居地區(qū)，少數(shù)民族約占全市總?cè)丝诘囊话?。本研究結(jié)果顯示， 在我院2 058例新生兒中，G-6-PD缺乏癥發(fā)病率為8.26%，高于廣西大部分城市，與同為沿海城市的欽州市相似，均較高[10]。同時(shí)，本研究中最常見的3種突變位點(diǎn)依次為c.1388G>A(38.23%)、c.95A>G(27.06%)、c.1376G>T(22.94%)，與部分地區(qū)存在一定差異，如溫州市常見的突變位點(diǎn)為1024C>T[11]，而云南省則為1311T>C[12]，這可能與本研究樣本量不足有一定關(guān)系，也可能與防城港市京族人口相對較多有關(guān)，需要進(jìn)一步研究加以驗(yàn)證。本研究中，多例女性雜合子的G-6-PD活性并不明顯缺乏，說明酶活性正常的女性存在漏檢情況，這導(dǎo)致此類患兒在今后飲食及用藥中存在一定的風(fēng)險(xiǎn)，僅通過酶活性檢測不可避免地出現(xiàn)女性檢出率低的情況，因此建議女性患者在酶活性檢測的同時(shí)應(yīng)結(jié)合G-6-PD基因檢測，以避免漏診和誤診[11]。

綜上所述，本地區(qū)新生兒G-6-PD缺乏癥發(fā)生率較高，因此應(yīng)加強(qiáng)G-6-PD缺乏癥知識(shí)的宣傳，重視G-6-PD缺乏癥的早期檢測(如酶活性的檢測)，必要時(shí)進(jìn)行基因檢測。對不同突變類型的G-6-PD缺乏癥患兒，應(yīng)針對溶血疾病的具體臨床表現(xiàn)實(shí)施不同的診療方案，早期干預(yù)可以有效減輕溶血程度和避免發(fā)生核黃疸。