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    蘇州西部地區(qū)女性人乳頭瘤病毒感染情況調(diào)查分析*

    2019-11-14 07:50:40溫江濤王芙蓉朱紅楠嚴(yán)茹紅
    國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志 2019年21期
    關(guān)鍵詞:檢測

    溫江濤,王芙蓉,朱紅楠,嚴(yán)茹紅

    (南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州科技城醫(yī)院檢驗科,江蘇蘇州 215153)

    宮頸癌是一種常見女性惡性腫瘤。2018年世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)數(shù)據(jù)顯示,全球?qū)m頸癌每年新發(fā)病例約57.0萬,死亡病例31.1萬,其中90%病例發(fā)生在發(fā)展中國家[1]。人乳頭瘤病毒(HPV)是乳頭病毒科病毒,包括200多個亞型,其主要侵犯皮膚及黏膜上皮。根據(jù)致癌性的高低,HPV分為高危型、中危型和低危型[2-3]。高危型HPV感染易誘發(fā)多種惡性腫瘤,如宮頸癌、膀胱癌肉瘤、喉癌等[4]。低危型HPV感染常常引起濕疣等病變[5]。本研究主要分析江蘇省蘇州西部地區(qū)女性HPV感染與基因型分布情況,從而為該地區(qū)HPV感染的防治提供理論依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 收集2 195例于2017年11月至2018年5月在本院婦科門診自愿做HPV篩查的女性患者宮頸脫落細(xì)胞樣本。所有患者均符合:(1)長期居住于蘇州西部地區(qū)(>5年);(2)至少有1年性生活史;(3)非妊娠期、無盆腔放療和化療史;(4)檢查前48 h內(nèi)無性生活史及用藥史等。

    1.2儀器與試劑 全自動核酸提取儀與熒光定量PCR儀分別購自中國江蘇碩世生物技術(shù)有限公司和中國上海宏石有限公司;HPV病毒核酸提取及分型檢測試劑盒購自中國江蘇碩世生物技術(shù)有限公司。

    1.3標(biāo)本采集與保存 用宮頸刷置于宮頸口處沿順時針旋轉(zhuǎn)3~5圈采集宮頸口及宮頸管足夠的移行區(qū)上皮細(xì)胞,并迅速將宮頸刷頭部放入細(xì)胞保存液中,旋緊管蓋,若不能立即檢驗的樣品置于4 ℃冰箱保存,嚴(yán)格按照操作說明進行,應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    1.4檢測方法 樣本DNA提取和加樣:按照全自動核酸提取儀提取HPV-DNA。剩余DNA樣品置于-20 ℃冰箱保存。將反應(yīng)液和A-H引物溶液依次加入PCR八聯(lián)管,再將2 μL待測樣本核酸溶液、陰性和陽性對照分別加入對應(yīng)的PCR八聯(lián)管。PCR擴增與變性:將PCR八聯(lián)管放入熒光PCR擴增儀內(nèi)進行擴增檢測。檢測結(jié)果:根據(jù)HPV亞型探針熒光標(biāo)識表進行結(jié)果判斷,HPV亞型擴增曲線結(jié)果顯示典型S型曲線且CT值<參考值,表明HPV亞型為陽性;HPV亞型擴增曲線結(jié)果不顯示S型擴增曲線或CT值>參考值,表明HPV亞型為陰性。通過檢測宮頸脫落細(xì)胞內(nèi)單拷貝基因,測算樣本中的細(xì)胞數(shù)量,獲得HPV定量的基準(zhǔn),再報告同等細(xì)胞數(shù)量(10 000個細(xì)胞)內(nèi)的HPV病毒拷貝數(shù),實現(xiàn)同步對21種HPV基因亞型進行基因分型及標(biāo)準(zhǔn)化定量。

    本檢測將21種HPV亞型分為13種高危型(HPV16、52、58、18、31、33、35、39、45、51、56、59和68亞型),5種中危型(26、53、66、73和82亞型)及3種低危型(HPV6、11和81亞型),有≥2種HPV亞型合并感染者為多重感染,對多重感染者,各HPV亞型陽性率重復(fù)計算。

    1.5統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,計數(shù)資料用n(%)表示,不同年齡組間檢出率差異采用用χ2檢驗,SPSS分析不同年齡段陽性檢出率差異有無統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1HPV感染狀況和基因型分布 2 195名女性中有420名感染HPV,總感染率為19.13%(420/2 195)。高危型HPV感染率14.90%(327/2 195),其中高危型單一感染率為11.07%(243/2 195),84例發(fā)生高危型多重感染,占高危型感染的25.69%(84/327)。低危型HPV感染率僅為3.51%(77/2 195),其中低危型合并高危型感染率為1.46%(32/2 195)。感染率最高的HPV亞型為HPV52(3.83%),排名第2的是HPV16(2.28%)和HPV58(2.28%),第3是HPV39(1.64%)。

    2.2各年齡段HPV感染陽性率比較 2 195名研究對象分成3個年齡段:<30歲556例(占25.33%)、30~54歲1 549例(占70.57%)、>54歲90例(占4.10%)。2 195例受試患者中,>54歲組HPV高危型的感染率為23.33%,30~54歲組為15.11%,<30歲組為12.95%。各年齡組間高危型感染陽性檢出率及HPV總陽性檢出率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而高危型單一感染率和高危型多重感染率差異卻無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    表1 江蘇省蘇州西部地區(qū)婦女不同年齡段HPV感染檢出情況[n(%)]

    2.3HPV亞型感染的病毒載量分布 420例HPV感染患者中,將HPV多重感染者在各HPV亞型感染中分別計數(shù),故所得總例數(shù)是540例。HPV52,HPV16、HPV58和HPV39型感染者以中、低病毒載量為主,而HPV51型感染者以低病毒載量為主。見表2。

    表2 HPV亞型感染的病毒載量分布(n)

    續(xù)表2 HPV亞型感染的病毒載量分布(n)

    注:a表示計量單位為拷貝數(shù)/104個細(xì)胞;低危型沒有列出;-表示此項無數(shù)據(jù)

    3 討 論

    本研究采用多重?zé)晒釶CR技術(shù),高通量、自動化分管及閉管檢測21種HPV基因亞型,該項目是全球首個、也是目前唯一可以同步HPV分型及標(biāo)準(zhǔn)化定量的檢測技術(shù)。檢測HPV DNA靶標(biāo),分管區(qū)分18種高中危及3種低危型總計21種HPV基因型別,并同步報告各基因亞型的病毒拷貝數(shù);另外,通過檢測宮頸脫落細(xì)胞內(nèi)獨特的單拷貝基因,還可以報告樣本中的采集的細(xì)胞數(shù)量,最終報告“單位數(shù)量細(xì)胞中不同HPV型別及其攜帶病毒載量”,從而實現(xiàn)同步HPV分型及標(biāo)準(zhǔn)化定量。中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院研究數(shù)據(jù)表明碩世HPV與測序法陽性一致性為100.0%,而傳統(tǒng)分型方法僅為59.1%[6]。

    女性宮頸HPV感染與當(dāng)?shù)亟?jīng)濟、衛(wèi)生水平有關(guān),不同地區(qū)HPV感染率差異較大。本研究結(jié)果顯示,2 195名蘇州西部地區(qū)婦女的HPV感染率為19.13%,其中高危型HPV感染率為14.90%,與甘肅地區(qū)一致[7],低于重慶地區(qū)[8]和石家莊地區(qū)[9]。HPV總感染率高于北京地區(qū)15.57%[10]和天津地區(qū)15.93%[11]。不同地區(qū)HPV感染的型別也存在較大差異,本研究發(fā)現(xiàn)蘇州西部地區(qū)婦女易感HPV型別為HPV52、HPV16、HPV58和HPV39。甘肅地區(qū)常見HPV感染基因亞型為HPV16,HPV58,HPV52,HPV18和HPV53型[7]。石家莊地區(qū)常見HPV感染基因亞型為HPV16,HPV58,HPV52,HPV6和HPV18型[9]。而天津地區(qū)HPV感染率比較高的亞型分別為HPV52,HPV16,HPV58,HPV56和HPV81型[11]。這些差異可能與風(fēng)俗習(xí)慣、文化程度及生活方式等有關(guān)。

    從各HPV亞型感染患者中不同級別病毒負(fù)荷量的分布來看,在HPV52,HPV16、HPV58和HPV39型感染者以中、低病毒載量為主,而HPV51型感染者以低病毒載量為主。高病毒載量與宮頸病變相關(guān),因此蘇州西部地區(qū)女性HPV感染可以定期檢測和治療來預(yù)防早期宮頸病變。

    女性的年齡是影響HPV感染的重要因素之一。本研究結(jié)果顯示,>54歲婦女高危型HPV的感染率為23.33%,30~54歲組為15.11%,<30歲組為12.95%。而石家莊地區(qū)與此相反,HPV感染的年齡主要集中在40歲以下,甚至25歲以下HPV感染率為最高[9]。而天津地區(qū)HPV感染的年齡主要集中在35~45歲[11]。

    本研究主要圍繞蘇州西部地區(qū)女性感染HPV特點及其基因型分布展開,有望為研發(fā)適應(yīng)于本地區(qū)的HPV多價疫苗提供了重要的理論基礎(chǔ)。

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