雌激素缺乏對貓血液中脂質(zhì)代謝、脂肪細(xì)胞因子及炎癥因子表達(dá)的影響

陸江 武俊海 朱道仙

摘要：為研究雌激素缺乏對貓脂肪代謝的影響，將21只體質(zhì)量相近的成年中華田園貓隨機(jī)等分為對照組（C組）、去卵巢組（OVX組）和去卵巢雌激素代替組（OVX+E2組），其中OVX+E2組動物按200 μg/只經(jīng)肌肉注射苯甲酸雌激素，注射頻率為2次/周，試驗(yàn)周期10周。結(jié)果顯示，OVX組的增質(zhì)量較快，明顯高于C組和OVX+E2組。與C組比較，OVX組的甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、載脂蛋B 100（apoB 100）及游離脂肪酸（FFA）含量升高幅度極大（P0.05），血清瘦素水平提高27.1%（P<0.05），脂聯(lián)素水平降低17.8%（P<0.05），抵抗素水平變化不大;促炎因子TNF-α、IL-6及IL-8的水平顯著提高（P<0.05），抗炎因子IL-2、IL-10水平顯著降低（P<0.01），與抵抗素水平無相關(guān);與促炎因子TNF-α、IL-6、IL-8水平呈明顯負(fù)相關(guān)，與抗炎因子IL-2、IL-10水平呈明顯正相關(guān)，說明缺乏雌激素可導(dǎo)致貓高脂血癥、高瘦素血癥及低脂聯(lián)素血癥的發(fā)生，并誘發(fā)低炎癥反應(yīng)。

關(guān)鍵詞：雌激素;中華田園貓;去卵巢;血脂指標(biāo);脂肪細(xì)胞因子;炎癥因子

中圖分類號：S829.3 ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A ?文章編號：1002-1302（2019）17-0183-03

近年來，由于寵物貓的飼養(yǎng)量增加、飼養(yǎng)條件改善及生長環(huán)境的改變（運(yùn)動減少、絕育等）等因素，導(dǎo)致貓脂肪代謝紊亂性疾病時有發(fā)生，包括肥胖、脂肪肝和2型糖尿病等[1]。臨床調(diào)查發(fā)現(xiàn)，絕育后的雌性貓的發(fā)病率更高，而絕育會導(dǎo)致雌激素急劇降低，兩者之間是否存在關(guān)聯(lián)，卻鮮有報(bào)道。人類中絕經(jīng)期和更年期的婦女，體質(zhì)量往往高于絕經(jīng)前的婦女，易出現(xiàn)脂代謝紊亂，而采用雌激素藥物治療后，其脂肪代謝逐漸趨于正常，表明雌激素在人類脂肪代謝與脂肪沉積過程中起到重要的作用[2]。為了解雌激素對雌性貓脂代謝的影響，本研究主要采用絕育法觀察貓血液中脂質(zhì)代謝、脂肪細(xì)胞因子及炎癥因子表達(dá)的變化情況，為貓脂肪代謝紊亂性疾病，特別是脂肪肝的預(yù)防和治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

21只健康成年雌性寵物貓，由江蘇寵物繁育中心提供，體質(zhì)量約2.5 kg。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將試驗(yàn)動物隨機(jī)等分成3組：對照組（C組）、去卵巢組（OVX組）和去卵巢雌激素代替組（OVX+E2組），其中OVX組與OVX+E2組的動物麻醉后摘除卵巢，康復(fù)15 d后，用于動物試驗(yàn)。試驗(yàn)期間，3組動物均飼喂相同的商業(yè)化貓糧（上海比瑞吉寵物用品股份公司產(chǎn)生），自由飲食，C組與OVX組不作任何處理，OVX+E2組動物按200 μg/只經(jīng)肌肉注射給予苯甲酸雌激素，注射頻率為2次/周，試驗(yàn)周期10周。

1.3 體質(zhì)量變化

每周測量受試動物的體質(zhì)量，觀察其變化。

1.4 血液指標(biāo)觀察

1.4.1 血液采集與保存 試驗(yàn)結(jié)束后，經(jīng)前臂頭靜脈采血 3 mL 裝入試管中，在37 ℃水浴鍋中靜置，待分層后吸取上清液于離心管中，1 500 r/min離心5 min，取上清液置于4 ℃冰箱中保存待測。

1.4.2 血脂指標(biāo)測定 采用日立-7600全自動分析儀測定總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、載脂蛋白B 100（apoB 100）和載脂蛋白A I （apoA I）的含量，使用分光光度法檢測游離脂肪酸（FFA）的含量。

1.4.3 血中脂肪細(xì)胞因子檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒（ELISA），按照試劑盒說明書操作步驟分別檢測血清瘦素、脂聯(lián)素及抵抗素水平。

1.4.4 血中炎癥因子檢測 采用Luminex液相芯片技術(shù)檢測血中白細(xì)胞介素2（IL-2）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、白細(xì)胞介素8（IL-8）、白細(xì)胞介素10（IL-10）及腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平。

1.4.5 血液中雌激素檢測 用放射免疫方法按試劑盒測定血清中雌激素E2水平。

1.5 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 20.0軟件單因素分析方法進(jìn)行組間差異統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示顯著差異，并運(yùn)用Person分析法分析血中E2水平與其他指標(biāo)的相關(guān)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 受試動物的一般表現(xiàn)及體質(zhì)量變化

整個試驗(yàn)過程中，各組貓的精神狀態(tài)良好，食欲正常，未出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)，體質(zhì)量變化結(jié)果見圖1，OVX組體質(zhì)量隨時間的推移逐步升高，第7周后變化較為明顯，試驗(yàn)結(jié)束時體質(zhì)量比第1周時增高了47.4%，高于C組與OVX+E2組，C組體質(zhì)量試驗(yàn)前后變化不明顯，OVX+E2組略有升高。

2.2 血脂指標(biāo)檢測結(jié)果

由表1可知，與C組比較，OVX組的TG、LDL-C、apoB 100及FFA含量極顯著升高（P0.05）;與OVX+E2組比較，OVX組的TG與FFA含量極顯著升高（P<0.05，P0.05）;OVX+E2組的TG、TC、apoA I、FFA、apoB 100含量與C組無差異（P>0.05），LDL-C顯著高于C組（P<0.05），HDL-C極顯著低于C組（P<0.01）。

2.3 血中脂肪細(xì)胞因子檢測結(jié)果

由圖2可知，去卵巢后血清瘦素水平比C組顯著高27-2%（P<0.05），脂聯(lián)素水平比C組顯著低17.8%（P<0-05）;與OVX組比較，去卵巢后補(bǔ)充雌激素可以顯著降低機(jī)體血清中瘦素水平（P<0.05），并可以顯著提升脂聯(lián)素水平（P0.05）。

2.4 血中炎癥因子檢測結(jié)果

由表2可知，去卵巢后血液中促炎因子TNF-α、IL-6及IL-8的水平顯著高于C組（P<0.05），抗炎因子IL-2、IL-10顯著低于C組（P<0.05），去卵巢后補(bǔ)充E2可以降低TNF-α、IL-6及IL-8的水平，同時提高IL-2、IL-10水平，且OVX+E2組與OVX組比較差異顯著（P0.05）。

2.5 血中E2檢測結(jié)果

由圖3可知，去卵巢后血液中E2水平下降明顯，極顯著低于C組和OVX+E2組（P0.05）。

2.6 血液中E2水平與各指標(biāo)水平之間的相關(guān)性分析

通過SPSS 20.0運(yùn)用Pearson分析法進(jìn)行E2水平與各指標(biāo)水平的相關(guān)性分析，由表3可知，E2水平與血脂指標(biāo)TG、FFA含量呈強(qiáng)的負(fù)相關(guān)，與LDL-C、apoB 100含量呈負(fù)相關(guān)，與HDL-C、apoA I含量呈正相關(guān)，而與TC含量無相關(guān)關(guān)系;與脂肪細(xì)胞因子瘦素水平呈強(qiáng)的負(fù)相關(guān)，與脂聯(lián)素水平呈強(qiáng)的正相關(guān)，與抵抗素水平無相關(guān);與促炎因子 TNF-α、IL-6、IL-8水平呈明顯負(fù)相關(guān)，抗炎因子IL-2、IL-10水平呈明顯正相關(guān)。

3 討論

3.1 雌激素對貓血脂代謝的影響

近年寵物臨床研究發(fā)現(xiàn)，絕育（去卵巢）后的貓容易發(fā)生肥胖癥和脂肪肝，說明雌激素在貓的脂肪代謝中發(fā)揮重要作用。在人醫(yī)和動物試驗(yàn)中研究發(fā)現(xiàn)，雌激素分泌減少后，血脂水平發(fā)生了明顯的變化。杜貴永以絕經(jīng)后婦女56例為觀察組研究對象，另選擇50例正常行經(jīng)婦女和45例圍絕經(jīng)期婦女作為對照組，對所有受試者進(jìn)行血清雌二醇及血脂水平測定，發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)后婦女血清E2水平遠(yuǎn)低于其他2組，E2水平與TC、TG、LDL-C含量呈負(fù)相關(guān)，與HDL-C含量呈正相關(guān)[3];陸江等在研究絕育手術(shù)對雌性Beagle犬血脂代謝及抗氧化能力的影響發(fā)現(xiàn)，絕育后犬血中TG、總膽固醇（Chol）、LDL-C含量逐漸升高，HDL-C含量逐漸降低[4]。本研究發(fā)現(xiàn)，貓去卵巢后血液中E2水平急劇降低，TG、LDL-C、apoB 100、FFA的含量升高，與E2水平呈負(fù)相關(guān)，HDL-C、apoA I含量升高且與E2水平呈正相關(guān)，體質(zhì)量增質(zhì)量明顯，增加肥胖癥等脂質(zhì)代謝紊亂性疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，而TC含量變化不明顯，與嚙齒類動物和人不同，這可能與貓飼料中高水平?；撬嵊嘘P(guān)，?；撬峥赏ㄟ^多種途徑發(fā)揮降TC作用[5]。由此可見，雌激素可作為貓脂質(zhì)代謝的一個調(diào)節(jié)因子，研究其作用機(jī)制將為貓肥胖癥、脂肪肝等疾病的預(yù)防與治療提供更加廣闊的空間。

3.2 雌激素對脂肪細(xì)胞因子的影響

脂肪細(xì)胞因子也是影響機(jī)體脂質(zhì)代謝較直接的因素，正常情況下，脂肪組織產(chǎn)生瘦素和脂聯(lián)素等細(xì)胞因子的生理作用處于平衡狀態(tài);若過多的脂肪堆積和脂肪細(xì)胞功能異常，可導(dǎo)致脂肪細(xì)胞因子表達(dá)的調(diào)節(jié)異常、脂質(zhì)代謝紊亂，引發(fā)多種疾病。研究證實(shí)高瘦素血癥是胰島素抵抗發(fā)生的重要原因[6]，而胰島素抵抗又是糖尿病、脂肪肝等疾病發(fā)生的重要機(jī)制[7]。本研究顯示，OVX組出現(xiàn)瘦素升高和脂聯(lián)素降低的顯著變化，與E2水平分別呈負(fù)相關(guān)、正相關(guān)，而補(bǔ)充E2后可明顯改善這一現(xiàn)象，且改變雌激素對抵抗素?zé)o明顯改變，因此雌激素缺乏可直接引起脂肪細(xì)胞因子的代謝障礙，從而間接導(dǎo)致脂肪代謝紊亂，補(bǔ)充E2可起到緩解代謝障礙的作用。然而雌激素作用于脂肪組織的靶點(diǎn)及機(jī)制尚須進(jìn)一步研究。

3.3 雌激素對炎癥因子的影響

在正常生理情況下，機(jī)體血液中含有一定水平的TNF-α、IL-6、IL-8等促炎因子，具有增強(qiáng)免疫功能與抗感染作用，但是與抗炎因子IL-2、IL-10等關(guān)系失調(diào)或者機(jī)體持續(xù)性分泌釋放過多IL-6、TNF-α、IL-8等因子后，則會使機(jī)體處于低炎癥狀態(tài)，引起機(jī)體物質(zhì)能量代謝障礙，甚至組織損傷，如已證實(shí)TNF-α是非乙醇性脂肪肝發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，血中E2水平與TNF-α、IL-6、IL-8等促炎因子水平呈負(fù)相關(guān)，與抗炎因子IL-2、IL-10水平等呈正相關(guān)，表明雌激素缺乏可以提高促炎因子的表達(dá)，抑制抗炎因子的表達(dá)，補(bǔ)充E2后可使促炎因子和抗炎因子趨于正常，這可能與雌激素和其受體結(jié)合后，可激活過氧化物酶體增殖物激活受體（PPARs）等信號通路，從而抑制TNF-α等促炎因子的mRNA表達(dá)有關(guān)[9]。

4 結(jié)論

雌激素缺乏可導(dǎo)致貓的高脂血癥、高瘦素血癥、低脂聯(lián)素血癥，促進(jìn)促炎因子釋放，從而導(dǎo)致脂質(zhì)在體內(nèi)堆積、體質(zhì)量增加，補(bǔ)充雌激素后可緩解上述癥狀。同時也證明，雌激素及其作用機(jī)制可作為新的研究靶點(diǎn)，為貓脂肪代謝紊亂性疾病防治提供新的思路與方法。

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