規(guī)模豬場豬瘟病毒、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒、偽狂犬病病毒及口蹄疫病毒抗體水平監(jiān)測及免疫效果評價

柴剛

摘? 要：某100頭基礎(chǔ)母豬的規(guī)模豬場，在常規(guī)免疫情況下，10余頭母豬在妊娠后期出現(xiàn)了流產(chǎn)現(xiàn)象。為調(diào)查該豬場免疫效果，分別采集空懷母豬、妊娠前期母豬、妊娠后期及妊娠后期流產(chǎn)母豬血清共20份，進行豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）、高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus， HP-PRRSV）、偽狂犬病病毒（Pseudorabies Virus，PRV）-gE、口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，F(xiàn)MDV）抗體檢測。檢測結(jié)果表明，PRV-gE抗體和HP-PRRSV抗體陽性率均在95%以上，提示該豬群可能存在PR野毒感染;CSFV抗體陽性率為85%，且阻斷率大于0.6的占53.8%，說明該豬群CSFV抗體沒有達到理想水平;FMDV抗體陽性率為35%，說明該豬群FMD免疫效果較差，應(yīng)該及時補免。調(diào)查結(jié)果提示，PR野毒感染可能是導(dǎo)致該規(guī)模場母豬流產(chǎn)的主要原因。

關(guān)鍵詞：豬瘟;高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征;偽狂犬病;口蹄疫;抗體監(jiān)測;免疫效果評價

中圖分類號：S858.28 文獻標志碼：A 文章編號：1001-0769（2019）09-0020-08

隨著時代的發(fā)展，人民生活水平不斷提高，豬肉的需求量不斷增大，生豬的養(yǎng)殖量以及養(yǎng)殖密度也不斷增加，規(guī)模化養(yǎng)豬場生豬的流動和引種也越來越頻繁，這在很大程度上增加了疫病的發(fā)病風(fēng)險。而疫苗免疫接種是當(dāng)前防控重大動物疫病的主要方法，但由免疫失敗引發(fā)的疫病時有發(fā)生，給養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的困擾。

豬瘟（Classical Swine Fever，CSF）、高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome， HP-PRRS）、偽狂犬?。≒seudorabies，PR）和口蹄疫（Foot and Mouth Disease，F(xiàn)MD）是常見的危害養(yǎng)豬業(yè)的主要動物疫病，被世界動物衛(wèi)生組織列為必須通報的動物疫病。我國將FMD、CSF和? ? HP-PRRS列為一類動物疫病，將PR列為二類動物疫病。農(nóng)業(yè)部將CSF和FMD列入國家重大動物疫病強制免疫病種，2007年又將HP-PRRS列為國家強制免疫病種。雖然2017年? 1月1日起，國家對CSF和HP-PRRS暫不實施強制免疫政策，但這兩種疫病及豬FMD、豬PR的疫苗免疫仍然是當(dāng)前防控豬場重大動物疫病的重點。由于各規(guī)模場免疫程序不同，疫苗免疫失敗的案例時有發(fā)生，抗體水平達不到國家標準的情況屢見不鮮，嚴重影響了養(yǎng)豬業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。

甘肅某100頭基礎(chǔ)母豬的規(guī)模豬場，在常規(guī)免疫程序下，10頭母豬在妊娠后期出現(xiàn)了不同程度的流產(chǎn)現(xiàn)象，為了解該規(guī)模場中豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）、口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，F(xiàn)MDV）、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus， HP-PRRS）和偽狂犬病病毒（Pseudorabies Virus，PRV）的抗體水平及免疫效果，分別采集空懷母豬、妊娠前期母豬、妊娠后期及妊娠后期流產(chǎn)母豬血清共20份，進行CSFV、HP-PRRSV、? ?PRV-gE和FMDV抗體檢測，為規(guī)模豬場制定合理有效的免疫程序以及相應(yīng)疫病的免疫預(yù)防提供參考。

1? 材料與方法

1.1 樣品的制備

分別采集該規(guī)模場各階段母豬血樣20份，每份采集母豬前腔靜脈血10 mL置于真空采血管中，室溫靜置50 min，待血液凝固后，在4 ℃下以1 900 r/min離心10 min，將上層血清轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中，注意槍頭不要觸碰中間層，將分離出的血清在4 ℃以1 600 r/min離心10 min，取上清液至新的1.5 mL離心管中，-80 ℃保存?zhèn)溆?。本試驗采集了空懷母豬血樣5份、妊娠前期母豬血樣5份、妊娠后期母豬血樣7份及妊娠后期流產(chǎn)母豬血樣3份，分別進行CSFV、HP-PRRSV、PRV-gE和FMDV抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）檢測。

1.2 檢測試劑及檢測方法

將采集的20份血清樣品分別用武漢科前CSFV、HP-PRRSV和PRV-gE抗體檢測試劑盒，以及蘭州獸醫(yī)研究所O型FMDV抗體檢測試劑盒對送檢樣品進行ELISA抗體檢測，所有檢測均按各自試劑盒說明書進行。

2 結(jié)果與免疫效果評價

2.1 CSFV抗體檢測結(jié)果及效果評價

圖1、圖2、圖3、圖4、圖5及表1顯示了CSFV抗體檢測的基本數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，CSFV抗體檢測阻斷率低于0.4的有3份，分別是8、14和15號，陽性率為85%;阻斷率大于0.6的占53.8%，比例偏低。不同階段母豬離散度差異較大，說明抗體整齊度較差，通過多次免疫，母豬群CSFV抗體沒有達到理想水平。此時，應(yīng)從環(huán)境管理、免疫時間、疫苗劑量、操作以及免疫抑制等方面進行考慮，此外是否有溫和型CSF對豬群的干擾，還待進一步檢測確認。

2.2 HP-PRRSV抗體檢測結(jié)果及效果評價

圖6、圖7、圖8、圖9、圖10及表2顯示了HP-PRRSV抗體檢測的基本數(shù)據(jù)，結(jié)果表明HP-PRRSV抗體陽性率為95%，抗體離散度較大，HP-PRRSV抗體水平和保護力不是正相關(guān)的關(guān)系，存在抗體依賴增強作用，母豬群連續(xù)免疫S/P值應(yīng)該在2.5左右較好，但S/P值大于2.5的樣品只占45%，說明HP-PRRSV還在豬場復(fù)制循環(huán)。如果沒有免疫疫苗，檢測的抗體則為野毒抗體，提示豬群可能存在HP-PRRS野毒感染，為了使豬場生產(chǎn)安全，需根據(jù)實際情況，做進一步的病原學(xué)檢測。

2.3? PRV-gE抗體檢測結(jié)果及效果評價

圖11、圖12、圖13、圖14、圖15及表3顯示了豬PRV-gE抗體檢測的基本數(shù)據(jù)，該豬場PRV-gE檢測只有1例陰性，其余19例為陽性，母豬PRV-gE抗體陽性率高達95%，說明該豬群存在PR野毒感染，感染原因有待進一步溯源。豬群一旦感染PR可終生帶毒，因此豬群可能出現(xiàn)不穩(wěn)定現(xiàn)象。目前，對該母豬群免疫PR疫苗只能減少排毒，不能改善野毒感染狀態(tài)。要阻斷PRV在豬群中的感染，首先要制定合理的免疫程序，如滴鼻免疫與肌肉注射相結(jié)合的免疫程序，且只能從仔豬及后備豬開始進行免疫工作，可通過檢測育肥豬gE抗體評價疫苗免疫是否到位。

2.4 FMDV抗體檢測結(jié)果及效果評價

圖16顯示了豬FMDV抗體檢測的基本數(shù)據(jù)，口蹄疫免疫后陽性率為35%，說明FMDV免疫抗體不佳。由未進行疫苗免疫或者免疫時間過長引起的抗體不足或下降屬于正?，F(xiàn)象。此時應(yīng)主動免疫FMD疫苗，否則感染概率較大;如果免疫疫苗時間不長，那么這樣的抗體水平須考慮多方面的因素，例如產(chǎn)生抗體的時間不足、免疫抑制、免疫程序不合理或疫苗質(zhì)量差等?？傊肛i群由于疫苗免疫密度較大，這樣的免疫抗體水平遠遠達不到要求。

3? 影響疫苗免疫的因素

3.1 疫苗之間的相互影響

不同種類疫苗聯(lián)合免疫會產(chǎn)生相互干擾，從而影響豬的免疫效果。有學(xué)者研究表明，HP-PRRS滅活苗對CSF弱毒苗免疫無明顯干擾作用，兩者可同時免疫;而PRRS弱毒苗對CSF疫苗的免疫有極顯著干擾作用，免疫時CSFV抗體合格率僅為60%，不能達到免疫保護要求;兩種疫苗間隔7 d免疫仍有顯著干擾作用，但CSF抗體能達到免疫保護要求，PRRS免疫效果較差[1]。這是由于兩種病毒受體之間存在競爭作用，其中一種病毒感染機體細胞后產(chǎn)生干擾素，從而影響另一種病毒的復(fù)制[2]。此外，PRRS疫苗和O型FMD滅活疫苗不能同時免疫，這可能與檢測方法以及母源抗體水平等因素有關(guān)。在PRRS對PR疫苗免疫影響的研究中，PRV與PRRSV混合感染占PRV陽性數(shù)的94.44%，表明免疫抑制性疾病的存在和流行影響了母豬PRV中和抗體的產(chǎn)生，致使PR疫苗免疫失敗或延遲，從而導(dǎo)致混合感染[3]。

3.2 母源抗體的干擾

母源抗體的被動免疫能保護新生仔豬免受病原微生物侵害，但對后期的疫苗免疫會產(chǎn)生一定的干擾作用。多數(shù)傳染性豬病，仔豬在母源抗體水平較高時進行疫苗免疫，都會受到母源抗體的干擾。CSF母源抗體從28日齡開始加劇下降，半衰期為17 d左右。PRRS母源抗體21日齡開始加劇下降，半衰期為9 d左右[1]。PR母源抗體的半衰期在15 d 左右，在65～75日齡之間下降到最低，保護力也隨之消失[4-5]。FMD母源抗體在仔豬10日齡時達到最高水平，45～60日齡時降至不完全保護水平[6]。因此，為避免母源抗體的干擾，確定合適的首免日齡，建立合理的免疫程序尤為重要。首免日齡最好選在仔豬母源抗體不會影響疫苗的免疫效果而又能防御病毒感染的期間，此時接種疫苗效果最佳。

3.3 免疫操作不規(guī)范

生產(chǎn)實踐中，由于免疫操作不規(guī)范造成的免疫失敗時有發(fā)生，疫苗免疫過程中，注射部位、注射深度、注射劑量以及消毒等因素，都可能導(dǎo)致免疫后抗體水平不整齊或不合格，從而不能起到理想的保護效果。此外，免疫接種前后豬受到環(huán)境或其他的應(yīng)激因素，也可導(dǎo)致豬免疫應(yīng)答能力減弱，達不到理想免疫效果。

3.4 疫苗質(zhì)量因素

疫苗質(zhì)量的好壞直接影響免疫成敗。疫苗質(zhì)量低劣或者在疫苗運輸、保存以及使用等過程中操作不規(guī)范，都會造成疫苗變質(zhì)或效價降低，從而導(dǎo)致免疫失敗。因此，疫苗選購過程中一定要選擇正規(guī)企業(yè)生產(chǎn)或政府采購疫苗，運輸、保存以及使用過程中嚴格按照說明書進行，保證疫苗免疫的質(zhì)量和效果，減少免疫失敗的發(fā)生。

3.5 免疫抑制的影響

免疫抑制是導(dǎo)致免疫失敗的主要原因之一，造成機體免疫抑制的因素很多。重金屬、放射性輻射、霉菌毒素、應(yīng)激因素、營養(yǎng)不全以及維生素缺乏等都可引起免疫抑制，從而導(dǎo)致免疫失敗。此外，免疫抑制性疾病如PRRS和豬圓環(huán)病的感染普遍存在，因此加強疫病監(jiān)測，消除疫病和應(yīng)激造成的免疫抑制現(xiàn)象尤為重要。

3.6 飼養(yǎng)管理因素

科學(xué)的飼養(yǎng)管理，也會對豬群的免疫造成一定的影響。飼料營養(yǎng)不全價，豬群生產(chǎn)生活環(huán)境差，消毒保健等措施不完善等都會使豬的健康水平受到影響，從而導(dǎo)致免疫接種后抗體水平不理想，導(dǎo)致豬群免疫失敗。因此科學(xué)的飼養(yǎng)管理對提升豬健康水平至關(guān)重要。

綜上所述，合理的免疫程序、健康的飼養(yǎng)管理環(huán)境、優(yōu)質(zhì)的疫苗、規(guī)范的免疫操作、合理的免疫次數(shù)和劑量以及足夠的免疫密度是免疫成功的關(guān)鍵。在生產(chǎn)實踐中，為達到理想的免疫效果，應(yīng)該根據(jù)該場疫病的發(fā)生情況以及當(dāng)?shù)匾卟〉牧餍刑攸c，結(jié)合豬群的種類、年齡、飼養(yǎng)管理、母源抗體的干擾以及疫苗的性質(zhì)、類型和免疫途徑等各方面因素，制定適合本場的免疫程序。還應(yīng)將免疫與監(jiān)測相結(jié)合，通過監(jiān)測確定合理的首免日齡、免疫次數(shù)、免疫劑量以及免疫途徑和免疫密度，根據(jù)豬群不同時期的跟蹤監(jiān)測評價免疫效果，制定合理的免疫程序，確保免疫的時效性，避免母源抗體的干擾以及疫苗間的相互干擾，科學(xué)安排免疫時間，避免盲目免疫。

參考文獻：（6篇，略）