淺談弓形蟲病免疫診斷技術(shù)

丁治南

摘要：弓形蟲病是一種寄生蟲病。弓形蟲可隨著血液流動到各部位，從而引發(fā)多種疾病，且感染率高，致死率高，是危害動物和人體健康的重要疾病。因此，本文將簡單介紹弓形蟲病的幾種免疫診斷技術(shù)，以期為準(zhǔn)確預(yù)防和治療弓形蟲病提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：弓形蟲病;免疫;診斷

弓形蟲是一種專性的細(xì)胞內(nèi)寄生單細(xì)胞真核生物（特別是一種無融合生殖的真核生物），可引起弓形蟲病。在全世界發(fā)現(xiàn)的弓形蟲幾乎能感染所有的溫血動物，但貓（如家貓）是唯一已知的寄生蟲可能進行有性繁殖的確定宿主。弓形蟲病是指由于感染弓形蟲導(dǎo)致動物發(fā)燒、呼吸受阻、食欲下降等一系列臨床癥狀，嚴(yán)重影響動物生長性能的寄生蟲病。弓形蟲病是一種人畜共患病，感染率高，感染嚴(yán)重時半個月內(nèi)就會出現(xiàn)死亡。本文主要對弓形蟲病的免疫診斷技術(shù)進行簡述。

1弓形蟲病的危害

弓形蟲寄生在豬的細(xì)胞中，可隨著血液而流動，到達(dá)機體的大腦、肝臟等各個部位，引發(fā)各種疾病[1]。感染弓形蟲病的豬一周內(nèi)的癥狀和豬瘟十分相似，體溫升高，臟器出血，半個月內(nèi)得不到正確及時的治療會導(dǎo)致病豬死亡。對病豬的淋巴結(jié)、肝臟以及脾臟進行染色，鏡檢，均發(fā)現(xiàn)了弓形蟲。死亡后的病豬作為新的感染源，其糞便或感染器官被鳥類或其他動物啄食后也會被感染，若不及時處理感染病豬，感染范圍越擴越大，情況不容樂觀。孕婦感染弓形蟲病會通過胎盤傳染給胎兒，降低胎兒的免疫力，引發(fā)各種疾病，嚴(yán)重時可導(dǎo)致流產(chǎn)，胎兒畸形，危害極大。因此，必須加強弓形蟲病的診斷技術(shù)，并采取措施提前預(yù)防弓形蟲病的感染。

2弓形蟲病的診斷方式

目前實驗室和臨床上使用的弓形蟲病的診斷方式有鏡檢法、動物接種法、影像學(xué)診斷法、免疫診斷法和比較先進的基于弓形蟲遺傳物質(zhì)的分子生物學(xué)診斷法等。其中，使用最為廣泛的屬免疫診斷法。

3弓形蟲病免疫診斷技術(shù)

弓形蟲病免疫診斷技術(shù)主要依靠的是免疫學(xué)研究，抗原遇到相應(yīng)的抗體時發(fā)生反應(yīng)，再經(jīng)過染色或者其他方式表示弓形蟲病的存在[2]。本文將介紹以下6種弓形蟲免疫診斷技術(shù)：

3.1弓形蟲病的染色試驗

染色試驗是診斷弓形蟲病的經(jīng)典方法之一[3]。染色試驗的原理是抗原與血清中的抗體結(jié)合，從而破壞弓形蟲體表膜結(jié)構(gòu)，使之可以被美藍(lán)染色。該方法操作簡單，不需要借助儀器，結(jié)果準(zhǔn)確，使用范圍較廣，缺點是需要活的寄生蟲，存在局限性。

3.2免疫結(jié)合技術(shù)

采用免疫結(jié)合技術(shù)可檢測出人和動物血清中循環(huán)弓形蟲抗原。用硝酸纖維素紙直接點樣檢測弓形蟲抗原，是一種靈敏的弓形蟲抗原檢測方法。從實驗感染弓形蟲RH株的小鼠和家兔中采集血清樣本，從感染第2天開始收集的小鼠血清和感染后2周和3周的家兔血清中檢測到循環(huán)弓形蟲抗原。該方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，操作簡便。它避免了特殊設(shè)備的需要，而大部分必要的試劑都可以在市場上買到。這種方法的主要缺點是可疑結(jié)果的比例很高。

3.3改良凝集試驗

弓形蟲發(fā)育到速殖子的階段時，將其用福爾馬林浸泡固定，并吸取微量加到含有稀釋待檢血清的測試板上。如果速殖子和血清形成一層薄片狀物質(zhì)，漂浮在測試孔上面，測試結(jié)果為陽性;若是速殖子和血清形成顆粒狀物質(zhì)，沉在底部，測試結(jié)果則為陰性[4]。

3.4間接熒光抗體試驗

帶有熒光的抗體單獨不會發(fā)出熒光，和抗原特異性結(jié)合后才能激發(fā)熒光。間接熒光抗體實驗是將發(fā)熒光的特異性抗體與速殖子結(jié)合后放在顯微鏡下是否能觀察到熒光，以此來診斷機體是否感染了弓形蟲病。實驗首先將沒有活性的速殖子進行培養(yǎng)，重新獲得活力后方可繼續(xù)實驗。

3.5親和力試驗

動物感染弓形蟲分為慢性感染和急性感染，剛感染弓形蟲時自身免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答產(chǎn)生的抗體親和力較弱，隨著機體感染時間的延長，抗體的親和力會越來越強，與抗原的結(jié)合力也隨之增強。因此，通過測定親和力可以判斷感染的時間。但是這種方法精確度不高，參考性較低。

3.6免疫印跡鑒定試驗

用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離弓形蟲蛋白，然后用電泳印跡法將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。用以前已知的弓形蟲抗體水平的人血清檢測免疫反應(yīng)性多肽。以重鏈特異性、過氧化物酶標(biāo)記的抗人免疫球蛋白為指示性抗體，分別鑒定lgG和lgM反應(yīng)多肽。弓形蟲抗體能與Mr-27，000-670，000的幾種抗原反應(yīng)，而弓形蟲特異性lgM似乎只能檢測到少數(shù)多肽。以lgM反應(yīng)多肽為主的Mr為35，000。

除此之外，基于核酸技術(shù)的現(xiàn)代生物學(xué)診斷方法為弓形蟲病診斷和治療提供了一種新思路[5]。

目前用于診斷弓形蟲病的免疫學(xué)技術(shù)比較多，如比較經(jīng)典的染色試驗，精確度高的免疫結(jié)合技術(shù)等，每種技術(shù)都有其優(yōu)缺點和使用局限性，在具體操作時，應(yīng)按需選擇，提高弓形蟲病診斷的準(zhǔn)確率。

參考文獻(xiàn)：

[1]金春梅，劉超，梁晚楓，等.豬弓形蟲病的實驗室診斷與治療[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（8）：100-101

[2]馮嘉軒，趙永坤，孟繁平，等.弓形蟲病診斷方法研究進展[J].傳染病信息，2016，29（3）：139-143

[3]羅瀟，張莉，呂艷，等.我國弓形蟲病誤診現(xiàn)狀及其研究進展[J].中國病原生物學(xué)雜志，2018，13（5）：556-558

[4]郭朝剛.弓形蟲病免疫診斷技術(shù)研究進展[J].甘肅畜牧獸醫(yī)，2011，41（2）35-38

[5]王朝蘭，姚湧，王業(yè)梅.弓形蟲病分子生物學(xué)診斷技術(shù)的研究進展[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志，2012（14）：27-29