2種經(jīng)典模型對(duì)抗生素與重金屬鋅的蛋白核小球藻時(shí)間依賴(lài)聯(lián)合毒性作用的評(píng)估比較

王滔，張瑾，卞志強(qiáng)，姜慧，申慧彥

安徽建筑大學(xué)環(huán)境與能源工程學(xué)院，安徽省水污染控制與廢水資源化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，合肥 230601

抗生素通常用于治療和預(yù)防人類(lèi)和動(dòng)物的致命感染[1]，但抗生素不能完全被機(jī)體吸收，大約有20%～75%會(huì)通過(guò)糞便或代謝產(chǎn)物排出[2]。由于去除抗生素的水處理工藝尚不完善，城市污水處理廠(chǎng)成為向環(huán)境排放抗生素的主要源頭[3]。進(jìn)入水體的抗生素不僅污染環(huán)境，而且會(huì)對(duì)水生生物的生存甚至人類(lèi)的健康構(gòu)成潛在的威脅。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，環(huán)境中有的抗生素具有較強(qiáng)的生物毒性，有的抗生素殘留會(huì)誘導(dǎo)出耐藥細(xì)菌，甚至通過(guò)食物鏈的傳遞作用最終在人體內(nèi)積累并產(chǎn)生危害[4-6]。氨基糖苷類(lèi)抗生素是一種價(jià)廉、高效的廣譜性殺菌劑，對(duì)嚴(yán)重的細(xì)菌感染尤其有效，在世界范圍內(nèi)得到廣泛使用，導(dǎo)致其在環(huán)境中的大量殘留，引起了人們的普遍關(guān)注[7-8]。

重金屬是環(huán)境中另一類(lèi)典型的污染物，越來(lái)越受到全球尺度的特別關(guān)注[9]。重金屬污染物通過(guò)各種自然和人為來(lái)源被引入水體環(huán)境，包括家庭排放以及采礦和冶煉等工業(yè)排放[10]。由于重金屬是不可生物降解的持久性污染物，容易在生物體中積累，對(duì)生態(tài)系統(tǒng)甚至人類(lèi)健康構(gòu)成威脅[11]，如重金屬鋅，因其在日常生產(chǎn)和生活中的廣泛應(yīng)用而進(jìn)入水體環(huán)境中，成為環(huán)境污染物，水生生物對(duì)其具有很強(qiáng)的吸附能力，且容易在生物體內(nèi)富集，當(dāng)濃度過(guò)高時(shí)會(huì)造成生物組織氧化損傷[12]。然而，污染物在環(huán)境中不是以單個(gè)物質(zhì)的形式存在，而是以各種形式和濃度共存，不同組分間可能產(chǎn)生累積與聯(lián)合毒性作用，且隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，其潛在的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)可能會(huì)更大[13]。目前有很多關(guān)于重金屬或抗生素單一污染物對(duì)生物毒性效應(yīng)的研究，但很少有兩者聯(lián)合毒性作用動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的研究[14]。

關(guān)于污染物聯(lián)合毒性作用，早期使用的評(píng)估方法主要包括等效線(xiàn)圖法、混合毒性指數(shù)法和相似性參數(shù)法等[15-16]。這些傳統(tǒng)方法多采用等毒性濃度設(shè)計(jì)混合物，考察濃度范圍單一，具有較大局限性。在2000年時(shí)，德國(guó)不來(lái)梅大學(xué)的學(xué)者利用非線(xiàn)性函數(shù)模擬劑量-效應(yīng)曲線(xiàn)，用回歸方法計(jì)算低效應(yīng)濃度，并將濃度加和(concentration addtion, CA)與獨(dú)立作用(independent action, IA)模型應(yīng)用于多元混合物濃度-效應(yīng)的預(yù)測(cè)[17]，此后污染物聯(lián)合毒性相互作用的研究進(jìn)入了新時(shí)期。CA和IA模型應(yīng)用也越來(lái)越廣泛，一般情況下，CA模型適用于具有相似毒作用模式/作用機(jī)制(mode/mechanism of toxic action, MOA)污染物的混合物毒性評(píng)估，而IA模型適用于具有相異MOA污染物的混合物毒性評(píng)估[18]。但對(duì)于大多數(shù)污染物，其生物毒性作用機(jī)理不是完全清楚，越來(lái)越多的學(xué)者在進(jìn)行混合物毒性評(píng)估時(shí)，同時(shí)使用2種模型，然后選擇較合適的模型。也有學(xué)者只采用其中一種模型(CA模型更為常用)評(píng)估混合毒性作用。然而，文獻(xiàn)中同時(shí)將2種模型CA和IA用于評(píng)估具有時(shí)間依賴(lài)特征的污染物間聯(lián)合毒性作用的研究較少[19-20]。

鑒于此，本研究擬以3種氨基糖苷類(lèi)抗生素和重金屬鋅為研究對(duì)象，以蛋白核小球藻為測(cè)試生物，采用直接均分射線(xiàn)法[21]設(shè)計(jì)抗生素和重金屬不同濃度配比的代表性混合物，應(yīng)用時(shí)間毒性微板分析法[22]系統(tǒng)測(cè)定單個(gè)污染物及其混合物在不同暴露時(shí)間的毒性，應(yīng)用CA與IA模型評(píng)估在不同暴露時(shí)間的混合物毒性相互作用，揭示抗生素和重金屬混合污染物毒性相互作用隨時(shí)間變化規(guī)律，并比較2種模型預(yù)測(cè)結(jié)果的異同，以期為科學(xué)評(píng)價(jià)抗生素與重金屬混合物的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)提供數(shù)據(jù)和方法參考。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 材料

3種氨基糖苷類(lèi)抗生素包括硫酸安普霉素(apramycin sulfate, APR)、雙氫鏈霉素(dihydrostreptomycin sulfate, DIH)和硫酸鏈霉素(streptomycin sulfate, STS)，均購(gòu)自上海原葉生物科技有限公司，其理化性質(zhì)列于表1中。重金屬選擇氯化鋅化合物，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，其理化性質(zhì)列于表1中。測(cè)試藥品儲(chǔ)備液用超純水配制，并于4 ℃冰箱中保存、備用。

Synergy 2 Multi-Mode多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)BioTek伯騰儀器有限公司)，YXQ-LS-100S11立式壓力蒸汽滅菌器(上海博訊醫(yī)療生物儀器股份有限公司)，MGC-250智能型光照培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 藻種與培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)藻種：蛋白核小球藻(C. pyrenoidosa)購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)淡水藻種庫(kù)(FACHB)，編號(hào)為FACHB-5。C. pyrenoidosa的培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)過(guò)程見(jiàn)參考文獻(xiàn)[23]。

1.3 時(shí)間毒性測(cè)定與數(shù)據(jù)擬合

微板設(shè)計(jì)與時(shí)間毒性的測(cè)定方法見(jiàn)參考文獻(xiàn)[23]，污染物及其混合物對(duì)蛋白核小球藻在不同暴露時(shí)間的生長(zhǎng)抑制率按如下公式進(jìn)行計(jì)算[23]：

Ei,j=(1-μi,j/μ0,j)×100%

(1)

式中：Ei,j為污染物在暴露時(shí)間j(j = 12, 24, 48,72, 96 h)對(duì)C. pyrenoidosa的生長(zhǎng)抑制率；μi,j為ci微孔中C. pyrenoidosa在暴露時(shí)間j時(shí)的平均生長(zhǎng)速率；μ0,j為微板中空白藻在暴露時(shí)間j時(shí)的平均生長(zhǎng)速率[24]。

對(duì)各個(gè)污染物及其混合物在不同暴露時(shí)間的濃度-抑制率數(shù)據(jù)進(jìn)行非線(xiàn)性擬合的兩參數(shù)函數(shù)Logit公式[23]：

E=1/[1+exp(-α-β×lgc)]

(2)

式中：E表示效應(yīng)；c表示單個(gè)化合物或混合物的濃度；α和β分別為位置和斜率參數(shù)。

1.4 混合物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

為系統(tǒng)考察二元混合物毒性隨時(shí)間和濃度的變化規(guī)律，采用直接均分射線(xiàn)法(Equ-Ray)設(shè)計(jì)3個(gè)二元混合物體系，每個(gè)體系有5條濃度比不同的射線(xiàn)[25]，每條混合物射線(xiàn)的組分及其濃度比(pi)列于表2中。

表1 3種抗生素與重金屬鋅的理化性質(zhì)Table 1 Physiochemical properties of three antibiotics and one heavy metal Zn

表2 3組二元混合物體系的組分及其濃度比(pi)Table 2 The components and their concentration ratios (pi) of three binary mixture systems

1.5 混合物毒性相互作用分析

CA和IA模型是混合物毒性評(píng)估中常用的加和參考模型，計(jì)算公式見(jiàn)(3)和(4)[26-28]，如果混合物的觀(guān)測(cè)毒性等于、大于或小于預(yù)測(cè)毒性，則混合物毒性相互作用分別為加和作用、協(xié)同作用或拮抗作用。

CA模型數(shù)學(xué)表達(dá)式為：

(3)

IA模型數(shù)學(xué)表達(dá)式為：

(4)

式中：ci表示混合物中產(chǎn)生某一效應(yīng)x%時(shí)組分i的濃度，ECx,i表示混合物中第i個(gè)化合物單獨(dú)存在時(shí)產(chǎn)生效應(yīng)x%時(shí)的濃度。

2 結(jié)果與討論(Results and discussion)

2.1 抗生素和重金屬鋅對(duì)C. pyrenoidosa的時(shí)間毒性

Logit非線(xiàn)性函數(shù)能較好擬合污染物及其混合物對(duì)C. pyrenoidosa的濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)[29]。應(yīng)用t-MTA方法測(cè)定不同暴露時(shí)間時(shí)濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)，并將擬合的濃度-效應(yīng)曲線(xiàn)(CRC)繪于圖1。從圖1可以看出，3種抗生素對(duì)C. pyrenoidosa的毒性具有明顯的時(shí)間依賴(lài)性，即在開(kāi)始的12 h，3種抗生素對(duì)C. pyrenoidosa基本無(wú)毒性，隨著暴露時(shí)間延長(zhǎng)，毒性逐漸增加，在72 h后增幅變緩。而鋅對(duì)C. pyrenoidosa的時(shí)間依賴(lài)毒性不如抗生素明顯，在12 h就達(dá)到50%以上的抑制率。

圖1 3種抗生素和Zn在不同暴露時(shí)間對(duì)蛋白核小球藻的濃度-效應(yīng)曲線(xiàn)Fig. 1 The concentration-effect curves of three antibiotics and Zn in different time toward C. pyrenoidosa

為了比較抗生素對(duì)C. pyrenoidosa在不同暴露時(shí)間的毒性大小(通常以半數(shù)效應(yīng)濃度的負(fù)對(duì)數(shù)pEC50表示)，以時(shí)間為X軸，pEC50為Y軸作圖，4種物質(zhì)在0～96 h內(nèi)的pEC50值變化曲線(xiàn)如圖2所示。從圖2可以更明顯地看出4種物質(zhì)pEC50值隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而增大，但不同物質(zhì)的pEC50值隨時(shí)間變化的規(guī)律稍有不同，如Zn的pEC50值隨時(shí)間的延長(zhǎng)，在緩慢增加，而抗生素APR和STS在0～48 h內(nèi)抑制率低于50%，但48 h后pEC50值迅速增加，然后增速減慢?？股谼IH在0～72 h也達(dá)不到50%的抑制率，在72 h后pEC50值迅速增加，甚至超過(guò)APR和Zn的pEC50值?？梢?jiàn)，4種物質(zhì)的毒性隨暴露時(shí)間的變化而發(fā)生變化，但不同物質(zhì)變化的規(guī)律不同。以pEC50值為毒性大小的判斷依據(jù)，則在暴露時(shí)間節(jié)點(diǎn)12 h和24 h，只有Zn有毒性，pEC50值分別為2.503和2.706；在暴露時(shí)間節(jié)點(diǎn)48 h，除抗生素DIH沒(méi)有毒性，其他都呈現(xiàn)出一定的毒性，其毒性大小順序?yàn)椋篠TS>APR>Zn；在暴露時(shí)間72 h和96 h，4種污染物毒性大小順序均為：STS>DIH>APR>Zn。結(jié)果表明，暴露時(shí)間也是污染物的生物毒性的重要影響因素，因此，只有系統(tǒng)考察濃度與時(shí)間2個(gè)因素，才能比較客觀(guān)和全面地了解污染物的生物毒性效應(yīng)，才能更深入地了解污染物的毒理作用機(jī)制與途徑，提高生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的可靠性。

圖2 3種抗生素和Zn的pEC50值隨時(shí)間變化曲線(xiàn)Fig. 2 The changing curves of pEC50 values of three antibiotics and Zn with time

2.2 抗生素-重金屬鋅的二元混合物對(duì)C. pyrenoidosa的時(shí)間毒性

抗生素與重金屬二元混合物對(duì)蛋白核小球藻的濃度-效應(yīng)數(shù)據(jù)點(diǎn)及其擬合結(jié)果如圖3所示。從圖3可看出，3個(gè)混合物體系中的每條混合物射線(xiàn)對(duì)C. pyrenoidosa也具有明顯的時(shí)間依賴(lài)毒性。結(jié)合表2，可看出抗生素與鋅二元混合物體系的射線(xiàn)R1到R5，Zn的濃度比逐漸減小，抗生素的濃度比逐漸增加，混合物體系中射線(xiàn)的毒性隨時(shí)間的依賴(lài)性也逐漸明晰，這可能是由于抗生素對(duì)蛋白核小球藻具有明顯的時(shí)間依賴(lài)毒性。

圖3 3個(gè)混合物體系在不同暴露時(shí)間對(duì)蛋白核小球藻的濃度-效應(yīng)曲線(xiàn)Fig. 3 The concentration-effect curves of three mixture systems in different time toward C. pyrenoidosa

圖4是3組混合物體系中各射線(xiàn)的pEC50值隨時(shí)間的變化圖。從圖4可知，各組混合物射線(xiàn)的pEC50值隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加，但具有不同濃度比射線(xiàn)的pEC50值隨時(shí)間變化的規(guī)律稍有不同，如在Zn-APR混合物體系中，射線(xiàn)R1、R2和R3在暴露時(shí)間12 h就達(dá)到50%的抑制效應(yīng)，pEC50值從暴露時(shí)間12 h開(kāi)始，隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加，72 h后不再增加，而R4和R5則在48 h之后才達(dá)到50%的抑制效應(yīng)，然后隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加；在Zn-DIH混合物體系中，射線(xiàn)R1和R2在暴露時(shí)間12 h就達(dá)到50%的抑制率，隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加，96 h后不再增加，R3和R4則在24 h之后才達(dá)到50%的抑制效應(yīng)，然后隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加，R5則在48 h之后才達(dá)到50%的抑制效應(yīng)；在Zn-STS混合物體系中，射線(xiàn)R1和R2的pEC50值從暴露時(shí)間12 h就開(kāi)始隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加，而R3、R4和R5則在24 h之后才達(dá)到50%的抑制效應(yīng)，然后隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增加。對(duì)于Zn-DIH和Zn-STS這2個(gè)混合物體系，在96 h時(shí)各條射線(xiàn)的毒性大小順序均為R5>R4>R3>R2>R1，結(jié)合表2可知，混合物毒性隨組分中抗生素濃度比的增加而增加，具有明顯的組分濃度比依賴(lài)毒性，Zhang等[30]也發(fā)現(xiàn)了混合污染物毒性與其組分的濃度配比有關(guān)。

2.3 抗生素與重金屬鋅之間的時(shí)間依賴(lài)毒性相互作用

應(yīng)用CA和IA模型對(duì)Zn-APR、Zn-DIH和Zn-STS這3組混合物體系的15條射線(xiàn)進(jìn)行毒性相互作用分析，結(jié)果見(jiàn)圖5。由于3個(gè)混合物體系的射線(xiàn)中，有的呈現(xiàn)協(xié)同作用，有的呈加和作用，但3個(gè)混合物體系中的5條射線(xiàn)的協(xié)同作用隨暴露時(shí)間延長(zhǎng)的變化規(guī)律相似，因此，圖5給出3個(gè)混合物體系中各自具有代表性的混合物射線(xiàn)的實(shí)驗(yàn)觀(guān)測(cè)值及其95%置信區(qū)間(observed confident interval, OCI)、擬合曲線(xiàn)以及CA和IA預(yù)測(cè)結(jié)果。

從圖5可以看出，部分射線(xiàn)的CA和IA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)位于實(shí)驗(yàn)觀(guān)測(cè)置信區(qū)間下方，表現(xiàn)為協(xié)同作用，其余射線(xiàn)的CA和IA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)位于實(shí)驗(yàn)觀(guān)測(cè)置信區(qū)間內(nèi)，表現(xiàn)為加和作用。但在不同混合物體系中，毒性相互作用發(fā)生的濃度區(qū)域不同，如Zn-APR和Zn-DIH混合物體系中協(xié)同作用主要發(fā)生在較高濃度區(qū)域，而Zn-STS混合物體系中加和作用發(fā)生在整個(gè)濃度區(qū)域，這表明毒性相互作用類(lèi)型與混合物的濃度有關(guān)。

圖5還顯示，混合物體系在不同暴露時(shí)間的協(xié)同作用強(qiáng)度不同，Zn-APR和Zn-DIH這2個(gè)混合物體系具有相似的規(guī)律。在12 h到24 h期間，隨著暴露時(shí)間延長(zhǎng)，協(xié)同作用逐漸增強(qiáng)。在24 h到48 h期間，協(xié)同作用逐漸減弱，48 h后逐漸向加和作用轉(zhuǎn)變。

圖4 3個(gè)混合物體系的pEC50值隨時(shí)間變化圖Fig. 4 The changing of pEC50 values with the time for three mixture systems

圖5 3個(gè)Zn-抗生素混合物體系代表性射線(xiàn)的實(shí)驗(yàn)觀(guān)測(cè)點(diǎn)及其95%置信區(qū)間、擬合濃度-效應(yīng)曲線(xiàn)(CRC)以及CA和IA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)注：圖中分散點(diǎn)(·)表示實(shí)驗(yàn)點(diǎn)，實(shí)線(xiàn)(—)為擬合線(xiàn)，紅色短斷線(xiàn)(---)為CA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)，黑色虛點(diǎn)點(diǎn)線(xiàn)(--)為IA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)，藍(lán)色虛點(diǎn)線(xiàn)(--)為95%置信區(qū)間。Fig. 5 The observed concentration-effect data with 95% confidential intervals, fitted concentration response curve (CRC) and predicted curve by CA and IA of representative ray of three Zn-antibiotics mixture systemsNote: black dispersed point (·), solid line (—), red short dash line (---), black dash dot dot line (--), blue dash dot line (--) refer to the observed data, the fitted line, predicted curve by CA, predicted curve by IA and 95% confidential interval.

這表明協(xié)同作用強(qiáng)度隨暴露時(shí)間的變化而變化，即與暴露時(shí)間有關(guān)。

綜上所述，3組抗生素和重金屬的二元混合物體系對(duì)蛋白核小球藻的毒性具有明顯的濃度和時(shí)間依賴(lài)性，因此，在進(jìn)行污染物生態(tài)毒性評(píng)估時(shí)，需要考慮時(shí)間和濃度2個(gè)因素，才能深入了解組分間相互作用機(jī)制，從而更準(zhǔn)確地評(píng)估生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)。

2.4 2種經(jīng)典模型對(duì)聯(lián)合毒性的評(píng)估比較

通過(guò)比較CA和IA預(yù)測(cè)線(xiàn)與實(shí)驗(yàn)觀(guān)測(cè)值之間的位置關(guān)系，并分析混合物體系在不同暴露時(shí)間和不同濃度區(qū)域的毒性相互作用，發(fā)現(xiàn)Zn-APR與Zn-DIH二元混合物體系的毒性相互作用變化具有相似的規(guī)律。在低濃度區(qū)域，CA和IA預(yù)測(cè)線(xiàn)始終位于實(shí)驗(yàn)觀(guān)測(cè)OCI內(nèi)，呈現(xiàn)出加和作用。在中濃度和高濃度區(qū)域內(nèi)，CA和IA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)在開(kāi)始暴露的時(shí)候位于實(shí)驗(yàn)OCI下方，并隨暴露時(shí)間延長(zhǎng)逐漸向?qū)嶒?yàn)OCI靠近，96 h的CA預(yù)測(cè)線(xiàn)在高濃度區(qū)域時(shí)位于實(shí)驗(yàn)OCI下方，中濃度區(qū)域時(shí)位于實(shí)驗(yàn)OCI內(nèi)，而IA預(yù)測(cè)線(xiàn)整體位于OCI內(nèi)；這2個(gè)混合物體系使用CA與IA模型可以得到不同的結(jié)果，比較IA預(yù)測(cè)線(xiàn)與觀(guān)測(cè)值的擬合CRCs，可知毒性相互作用從協(xié)同作用逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榧雍妥饔?，而比較CA預(yù)測(cè)線(xiàn)與觀(guān)測(cè)值的擬合CRCs，可知中濃度區(qū)域的毒性相互作用始終呈現(xiàn)協(xié)同作用，高濃度區(qū)域的毒性相互作用從協(xié)同作用逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榧雍妥饔?。?duì)于Zn-STS二元混合物體系，在24 h，中濃度區(qū)域的CA和IA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)同時(shí)位于實(shí)驗(yàn)OCI下方，呈現(xiàn)出協(xié)同作用；而在其他時(shí)間和濃度區(qū)域內(nèi)，預(yù)測(cè)線(xiàn)均位于實(shí)驗(yàn)OCI內(nèi)，呈現(xiàn)出加和作用。以上結(jié)果表明2種模型對(duì)抗生素和重金屬的二元混合物毒性評(píng)估結(jié)果除在少數(shù)射線(xiàn)的高濃度區(qū)域呈現(xiàn)出不同的作用類(lèi)型外，基本一致。

綜上所述，在不同混合物體系的不同射線(xiàn)中，CA與IA預(yù)測(cè)線(xiàn)之間的位置關(guān)系始終保持一致，即在總效應(yīng)為10%以下時(shí)，CA與IA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)幾乎重合，但隨著總濃度增加，CA與IA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)的差距逐漸增大；當(dāng)總濃度較高時(shí)，IA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)始終位于CA預(yù)測(cè)曲線(xiàn)上方，這可能由于抗生素與重金屬具有不同的MOA，而IA模型更適用于相異MOA污染物的混合物毒性評(píng)估，從而與實(shí)驗(yàn)觀(guān)測(cè)值更加接近。這與宋曉青等[17]在部分除草劑與重金屬混合體系對(duì)發(fā)光菌的毒性研究中的結(jié)論相似。也有學(xué)者認(rèn)為當(dāng)混合物組分的CRC較陡(steep concentration response curves)，CA預(yù)測(cè)混合物毒性高于IA；當(dāng)混合物組分的CRC較平(flat concentration response curves)，CA預(yù)測(cè)混合物毒性低于IA，而本研究中2種物質(zhì)的CRC曲線(xiàn)較平緩，但平緩和較陡CRC的界定不明確，尚需進(jìn)一步深入研究。

本研究得出：

(1) 3種抗生素和重金屬鋅對(duì)蛋白核小球藻的毒性隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，有明顯的時(shí)間依賴(lài)性，在暴露時(shí)間72 h后，4種物質(zhì)的毒性大小順序?yàn)镾TS>DIH>APR>Zn。

(2) 3組抗生素和重金屬鋅的二元混合物體系，對(duì)蛋白核小球藻的毒性相互作用，在低濃度區(qū)域始終呈現(xiàn)加和作用，而在高濃度區(qū)域則隨暴露時(shí)間延長(zhǎng)從協(xié)同作用逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榧雍妥饔茫哂忻黠@的時(shí)間依賴(lài)毒性和濃度依賴(lài)毒性。

(3) CA與IA模型對(duì)3種抗生素和重金屬Zn的混合物毒性作用評(píng)估結(jié)果，除少數(shù)射線(xiàn)的高濃度區(qū)域的作用類(lèi)型不同外，基本一致，但隨著總濃度增加，CA與IA模型之間預(yù)測(cè)值的差別逐漸增大，IA預(yù)測(cè)CRC曲線(xiàn)始終位于CA預(yù)測(cè)CRC曲線(xiàn)上方，更接近實(shí)驗(yàn)觀(guān)測(cè)曲線(xiàn)，顯示IA模型更適用于相異MOA污染物的混合物毒性評(píng)估。