高危型HPV感染與陰道微生態(tài)及宮頸局部細(xì)胞免疫相關(guān)性研究*

胡國(guó)敏，馮麗君，王立鋒

復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院閔行分院婦產(chǎn)科(上海201100)

人乳頭瘤狀病毒(HPV)感染在女性中普遍存在，多數(shù)患者2年內(nèi)可自行清除，5%～10%最終進(jìn)展為癌前病變或?qū)m頸癌，其中70%的宮頸癌的發(fā)生與高危型HPV(HR-HPV)持續(xù)感染有關(guān)[1-2]。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)病毒感染、疾病發(fā)生與陰道微生態(tài)環(huán)境密切相關(guān)[3-4]。陰道是由陰道解剖結(jié)構(gòu)、微生態(tài)菌群、免疫功能等構(gòu)成的微生態(tài)系統(tǒng)，有助于抵抗致病菌感染、抑制炎性反應(yīng)。陰道微生態(tài)在生理狀態(tài)下處于動(dòng)態(tài)平衡，但一旦菌群失調(diào)或免疫功能下降容易導(dǎo)致HPV感染，但關(guān)于HR-HPV感染對(duì)宮頸免疫功能的影響仍較少報(bào)道[5]。本研究擬通過分析HR-HPV感染者陰道菌群、宮頸局部炎性反應(yīng)的改變，探討HR-HPV感染對(duì)陰道微生態(tài)及宮頸局部細(xì)胞免疫的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

1 一般資料 所有患者均為復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院閔行分院婦科門診于2017年1月至2018年12月期間收治的HPV感染的患者，共251例。入組標(biāo)準(zhǔn)：①均行陰道鏡下活檢、宮頸脫落細(xì)胞學(xué)(TCT)檢查，并行HPV-DNA檢測(cè)；②月經(jīng)規(guī)律，近3個(gè)月內(nèi)未使用抗生素或抗HPV病毒治療；③排除宮頸手術(shù)史、惡性腫瘤或感染等可能影響免疫功能的疾病，合并嚴(yán)重心肝腎器質(zhì)性病變者。年齡29～51歲，平均(41.3±3.7)歲；有分娩史189例，無分娩史62例；產(chǎn)次0～3次，平均(2.1±0.3)次。根據(jù)是否伴有HR-HPV感染分為HR-HPV組(n=114例)、非HR-HPV組(n=137例)。另選擇同期健康體檢者100例作為對(duì)照組，年齡29～51歲，平均(40.8±3.5)歲。各組年齡、分娩史、產(chǎn)次等基本資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2 研究方法

2.1 標(biāo)本采集：取樣前48 h禁性生活，取膀胱截石位，用窺陰器充分暴露陰道和宮頸口，常規(guī)消毒清潔。①采用棉拭子從陰道側(cè)壁上1/3取少量分泌物后置于試管中用于檢測(cè)陰道微生態(tài)；②采用棉拭子在宮頸外口順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)3～4圈，將樣本置于專用保存液中，-20℃保存用于HPV檢測(cè)；③采用宮頸采樣刷從陰道后穹窿、宮頸鱗-柱上皮交界處順時(shí)針?biāo)?～5圈，將采樣刷的刷頭取下并放入生理鹽水中用于檢測(cè)宮頸免疫細(xì)胞。

2.2 陰道微生態(tài)判定：采用陰道微生態(tài)聯(lián)合測(cè)定試劑盒(北京中生金域診斷技術(shù)有限公司)檢測(cè)白細(xì)胞酯酶、過氧化氫、唾液酸苷酶活性，以唾液酸苷酶活性呈紫色或紅色為陽性，白細(xì)胞酯酶呈藍(lán)色或綠色為陽性，過氧化氫呈藍(lán)色為陽性。若三個(gè)指標(biāo)均為陰性者則微生態(tài)正常，其中一個(gè)指標(biāo)陽性則微生態(tài)失調(diào)。同時(shí)，檢測(cè)乳酸桿菌、細(xì)菌性陰道炎、衣原體、解脲脲原體、滴蟲的感染情況。

2.3 HR-HPV檢測(cè)：采用第二代雜交捕獲技術(shù)(HCII)，利用凱普生物化學(xué)有限公司提供HPV-DNA試劑盒檢測(cè)HR-HPV基因型，包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。

2.4 免疫功能檢測(cè)：將標(biāo)本液以3000 r/min離心10 min，棄上清后收集下層細(xì)胞置于含肝素的抗凝管中，采用美國(guó)貝克曼庫爾特流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群，包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0版統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)與百分比表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用方差分析或t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 HR-HPV感染類型分布 114例HR-HPV陽性患者中，共檢測(cè)出種5種HR-HPV基因亞型，復(fù)合型感染占14.91%，單一型感染占85.09%，其中HPV 16占38.60%、HPV 18占28.07%，HPV 33占18.42%，見表1。

表1 HR-HPV感染類型分布

2 HPV陽性患者與對(duì)照組陰道微生態(tài)比較 HR-HPV組陰道微生態(tài)失調(diào)率高于非HR-HPV組、對(duì)照組，非HR-HPV組顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 HPV陽性患者與對(duì)照組陰道微生態(tài)比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與非HR-HPV組比較，△P<0.05

3 HPV陽性患者與對(duì)照組陰道菌群比較 HR-HPV組、非HR-HPV組陰道乳酸桿菌異常率及各菌群陽性率均高于對(duì)照組，HR-HPV組乳酸桿菌異常率、衣原體和解脲脲原體陽性率高于非HR-HPV組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

4 HPV陽性患者與對(duì)照組宮頸局部組織T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)比較 與對(duì)照組比較，HR-HPV組、非HR-HPV組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均明顯降低，而HR-HPV組上述各T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)明顯低于非HR-HPV組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表3 HPV陽性患者與對(duì)照組陰道菌群比較[例(%)]

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與非HR-HPV組比較，△P<0.05

表4 HPV陽性患者與對(duì)照組宮頸局部組織T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與非HR-HPV組比較，△P<0.05

討 論

陰道微生態(tài)平衡是女性生殖系統(tǒng)的一道重要屏障，生理情況下陰道微生態(tài)菌群中HPV呈陰性，而一旦陰道菌群穩(wěn)態(tài)失調(diào)可誘發(fā)HPV感染，尤其是HR-HPV病毒的表達(dá)能力更強(qiáng)，可使厭氧菌過度生長(zhǎng)，進(jìn)而導(dǎo)致宮頸細(xì)胞學(xué)改變[6-7]。HPV感染類型存在一定的地域差異，尤以HPV 16、18最為常見，對(duì)宮頸癌的影響程度高達(dá)69.7%[8]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，114例HR-HPV患者中，以單一型感染為主，其中HPV 16、HPV 18、HPV 33共占85.09%，與既往研究結(jié)果基本一致[9]。HR-HPV感染與陰道微生態(tài)的關(guān)系已被普遍證實(shí)，但兩者之間的因果關(guān)系，HR-HPV的持續(xù)感染對(duì)陰道菌群的影響尚需進(jìn)一步探索。

女性陰道的菌群相對(duì)單一，其中乳酸桿菌為維持陰道正常微生態(tài)的優(yōu)勢(shì)菌，有助于抑制致病微生物的入侵及生殖道腫瘤的發(fā)生，并可激活宮頸局部免疫系統(tǒng)，及時(shí)清除致病微生物，但HR-HPV感染者菌群多樣性增加[10]。本研究結(jié)果顯示，HR-HPV組陰道微生態(tài)失調(diào)率高于非HR-HPV組、對(duì)照組，且乳酸桿菌異常率也明顯升高(P<0.05)，與崔艷雙等[11]研究結(jié)果一致，說明HR-HPV陽性患者乳酸桿菌的生長(zhǎng)受到明顯抑制，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體對(duì)條件致病菌的屏障作用減弱，衣原體、解脲脲原體及其他厭氧菌等異常繁殖，陰道微環(huán)境pH升高，加上厭氧菌代謝產(chǎn)物亞硝基胺的致癌作用，進(jìn)一步促進(jìn)宮頸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化和宮頸癌變的風(fēng)險(xiǎn)增加。張展等[12]研究認(rèn)為，HR-HPV感染者宮頸菌群變化較陰道菌群更明顯，可增加宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，且衣原體、解脲脲原體亦與宮頸癌密切相關(guān)。

陰道的微生態(tài)直接決定了機(jī)體免疫功能，而免疫功能下降又進(jìn)一步加劇了陰道微生態(tài)失衡。細(xì)胞免疫是抗腫瘤免疫的主要形式，T淋巴細(xì)胞亞群作為主要的免疫因子，在調(diào)節(jié)免疫功能方面具有重要作用[13]。有研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌或癌前病變時(shí)宮頸局部組織T細(xì)胞亞群不同程度紊亂，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)I患者 CD4+/CD8+比值顯著高于CIN II、CIN III[14]。本研究結(jié)果顯示，HR-HPV組、非HR-HPV組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均較對(duì)照組明顯降低，且 HR-HPV組各T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)明顯低于非HR-HPV組(P<0.05)，提示HR-HPV感染與宮頸局部T淋巴細(xì)胞免疫存在較好的相關(guān)性，HR-HPV可導(dǎo)致免疫功能失衡。

綜上所述，HR-HPV感染可加重患者陰道微生態(tài)紊亂程度，降低宮頸局部細(xì)胞免疫功能，從而進(jìn)一步惡化病情。臨床上應(yīng)及時(shí)檢測(cè)HR-HPV感染者陰道菌群分布和免疫功能，積極防治HR-HPV感染，從而降低宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。