巴楚蘑菇多糖成分對小鼠抗氧化以及免疫功能的影響

唐天龍

（鄭州工程技術學院，河南 鄭州 450044）

食用真菌在我國分布廣泛，其栽培和食用歷史長達數(shù)千年。食用真菌具有較高的食用價值，不僅可以提供人體所需的蛋白質、脂肪、糖類、維生素以及各種礦物質以外，其自身的鮮美口感也廣受食用者的好評[1]。此外，近年來食用真菌的藥用價值也不斷被挖掘，其糖蛋白、萜類物質、黃酮、多酚等物質對人體抗氧化性能以及免疫功能均具有良好影響[2]。巴楚蘑菇，學名裂蓋馬鞍菌（Helvella leucopus），屬子囊菌綱（Ascomycetes）馬鞍菌科（Helvella），其菌蓋直徑一般為3 cm ～ 6 cm，常帶有馬鞍狀裂紋，部分黑色表面帶有明顯絨毛，因為其可以人工養(yǎng)殖，所以具有很高的醫(yī)用和食用價值[3]。巴楚蘑菇的維生素含量極其豐富，尤其是維生素B1含量遠高于一般的食用菌類。有關生物學家對其研究結果表明，巴楚蘑菇含有較多種類的多糖[4]。多糖的組成形式多樣，結構較為復雜，目前尚沒有辦法對其性能進行完全準確的概括，已知的多糖成分已經被證實具有增強免疫力、抗腫瘤、降血糖、抗病毒等作用[5]。巴楚蘑菇內的多糖，在醫(yī)學領域研究和藥物提取工作中具有研究價值。通過醫(yī)學生物體內試驗研究可以得出結論，巴楚蘑菇多糖提取物可以有效提高生物中性粒細胞自身的外界吞噬力以及免疫淋巴細胞的轉換率[6]，這說明巴楚蘑菇對生物體內的免疫功能有較大影響。為了探究巴楚蘑菇多糖成分的功能，試驗以小鼠抗氧化和免疫能力為分析目標，進行巴楚蘑菇影響性分析。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

二硝基氟苯試劑、甲醇試劑、溶菌酶試劑盒、總抗氧化能力試劑盒、超氧化酶試劑盒和丙二醛測定試劑盒，均購自中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司；試劑盒，購自南京生物工程研究所。試驗用巴楚蘑菇2019年購自新疆巴楚縣，在40℃條件下烘干，并用粉碎機打粉過篩，篩孔為40目。將石油醚按照4∶1的比例填入巴楚蘑菇粉中進行脫脂，靜置一天一夜后再次烘干，備用[7]。

1.2 試驗對象培育和分組

試驗采用單因子隨機法設計，將60只1日齡的試驗小鼠隨機劃分3個組，即對照組、少劑量組和多劑量組，每組小鼠數(shù)量為20只。其中對照組小鼠喂基礎培育飼料和水，少劑量組和多劑量組在基礎營養(yǎng)飼料和水的基礎上，分別添加上述制備的巴楚蘑菇粉。少劑量組巴楚蘑菇粉添加量為2 g，多劑量組為6 g。3組初始小鼠重量均為1.5 g左右，為了減輕體質因素對試驗影響性分析的誤差，3組進行統(tǒng)一培育。

培育共分為2個階段，育雛期為1日～ 10日齡，育成期為10日～ 25日齡。培育前需要對小鼠嚴格消毒，采用4層立體籠式培養(yǎng)。每日保證小鼠生長所需的飲食采水量，舍內溫度、濕度光照環(huán)境完全一致且嚴格按照培養(yǎng)要求進行。育雛期需要進行人工輔助保溫，分別在3日齡、7日齡和10日齡時接種新城疫IV系列疫苗。培育飼料成分和含量見表1。

表1 小鼠基礎營養(yǎng)飼料組成及營養(yǎng)成分表Tab.1 Basic nutritional feed composition and nutrient composition of mice

按表1配制的基礎飼料， 含有代謝能11.50 J·mol-1、粗蛋白 24.10 J·mol-1、鈣 0.82 J·mol-1、有效磷 0.57 J·mol-1、氨基酸 0.60 J·mol-1、賴氨酸 0.35 J·mol-1。

1.3 培育試驗生產性能

試驗前需要將所有試驗小鼠單獨稱重，計算平均初始體重。培育期間觀測記錄對照組、少劑量組、多劑量組試驗小鼠的生理和精神狀況。每天記錄小鼠進食前后體重，并記錄固定時間間隔下的階段采食量、增重變化規(guī)律以及飼料轉化規(guī)律（FCR）。

1.4 試驗結果處理

試驗結果采集數(shù)據(jù)采用TPSS 13.54軟件進行差異性顯著特征分析。當P＜0.05時差異。最終試驗數(shù)據(jù)使用“平均值±標準差”的形式表示。

2 結果與討論

2.1 巴楚蘑菇多糖成分對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

胸腺、脾腺和法氏囊包括肝臟是鼠類重要的免疫器官，也是免疫細胞形成、分化以及生成的最重要場所，其生長發(fā)育與當前基體免疫功能具有直接關聯(lián)。免疫器官指數(shù)測定選擇第25天，從3個試驗組隨機抽取12只體重相近的試驗小鼠（每組4只），空腹15 h后開始進行心臟采血、血清分離。隨后進行生物解剖， 摘取小鼠的肝臟、脾臟、法氏囊、胸腺進行稱重， 計算免疫器官指數(shù)，公式（T）為：

式中：n為小鼠免疫器官重量，g為小鼠解剖前活體重量。

對照組、少劑量組、多劑量組之間的對比結果，見表2。

由表2可知，劑量組小鼠胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著提高（P＜0.05），且多計量組的影響程度明顯大于少劑量組。而劑量組與對照組相比，對肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)整體影響不大。因此，添加適量的巴楚蘑菇粉，可以提高小鼠免疫器官胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)，增強機體免疫應答。不同育齡期的小鼠和各自的對照組相比，均可以明顯提高胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)。說明巴楚蘑菇多糖成分對免疫器官的生長和發(fā)育具有明顯的促進作用，且對免疫功能具有一定影響。

表2 小鼠免疫器官指數(shù)Tab.2 Index of mice immune organs

2.2 巴楚蘑菇多糖成分對小鼠新城疫HV抗體效應影響

新城疫抗體效應的評價測定，需要在小鼠培育期的25 d，從3個試驗組抽取15只試驗小鼠（每組5只）進行心臟采血（1 mL）。在常規(guī)室溫下靜置30 min析出血清后，收集血清，用β微量法檢測血清中的新城疫HV抗體。檢測過程中，需要進行樣品血凝抑制試驗，以驗小鼠對新城疫的抗體效應。在96孔的微量凝血面板上順次添加無菌生理鹽水，每排首個凝血孔加入小鼠血清，向后依次按照1∶3的比例稀釋，直到第12孔。向每孔填入抗原，在微量振蕩器上混蕩后，放入溫箱靜置20 min，待對照孔紅細胞沉淀后判定結果。結果判定時，檢測孔內紅細胞需要呈網狀凝劑，孔底出現(xiàn)圓點狀沉淀物。以100%的凝集抗原處，以最大稀釋孔作為原血凝價，也就是單位凝集；從該孔前移2孔的抗原稀疏度作為最終4單位的抗原稀釋度，結果見表3。

表3 多糖成分對新城疫抗體效應影響Tab.3 Effect of polysaccharide components on newcastle disease antibody

由表3可知，添加一定量的巴楚蘑菇粉，可以有效提高小鼠新城疫HV抗體效應評價。新城疫HV抗體影響評價也是反映機體免疫應答的常用評價指標。巴楚蘑菇粉的添加量與小鼠新城疫抗體效應存在正相關，多劑量組的增強幅度明顯高于少劑量組。

2.3 巴楚蘑菇多糖成分對小鼠PHA有效誘導細胞反應趾皮膚厚度的影響

通過對巴楚蘑菇多糖成分對小鼠PHA有效誘導細胞反應趾皮膚厚度的影響的具體研究好分析結果，見表4。

表4 多糖成分對小鼠趾皮膚厚度影響Tab.4 Effects of polysaccharide components on toe skin thickness in mice

由表4可知，少劑量組和多劑量組對小鼠的PHA誘導細胞反應明顯更強，其中多劑量組的反應差異更為明顯。由此可以推測，巴楚蘑菇的多糖成分是T淋巴細胞的促增長因子，可以刺激T淋巴細胞的增殖分化，引起小鼠皮膚外部的腫脹刺激。其腫脹程度與當前小鼠的免疫強度成正比例關系。因此，小鼠PHA有效誘導細胞反應趾皮膚厚度可以在一定程度上判定小鼠免疫淋巴細胞功能，代表小鼠當前機體的細胞免疫狀態(tài)。試驗中添加巴楚蘑菇的小鼠趾皮膚厚度增加，表明其可以通過促進小數(shù)據(jù)T淋巴細胞的生殖速率，提高小數(shù)據(jù)細胞免疫反應，進而提高小鼠的免疫功能。

2.4 巴楚蘑菇多糖成分對小鼠抗氧化能力的影響

生物機體抗氧化能力與身體健康具有重要關聯(lián)。當抗氧化能力降低時，生物機體容易引起炎癥、免疫系統(tǒng)疾病。超氧化歧化酶（SOD）對細胞氧化還原和抗氧化能力具有重要的平衡作用，它能有效殺滅生物機體中的有氧陰離子，保護細胞自由基不會受到損傷。此外，SOD在生物體中還能作為自由基清除酶，提高機體活力。其活性的實際值可以間接反映出當前機體對體內有氧自由基的清除能力。丙二醛（MDA）是機體脂質過氧化產物之一，測定其具體含量可以反映出當前機體脂質的過氧化程度，間接評價當前細胞活力和損傷程度。巴楚蘑菇多糖成分是生物機體內源性抗損傷重要營養(yǎng)元素，可以有效清除機體有氧自由基和脂質過氧化， 因此對于抗氧化能力T-AOC、SOD、MDA指標檢測，可以充分反映出當前機體抗氧化能力的整體效應增減。

按照2.2中血清培育方法重新提取小鼠血清，利用總抗氧化能力試劑盒、超氧化酶試劑盒和丙二醛測定試劑盒檢測3組小鼠血清樣本的（T-AOC）和（SOD）的活性指數(shù)以及（MDA）的具體含量。 研究在不同項目情況下，3個試驗組的具體數(shù)據(jù)，見表5。

表5 多糖成分對小鼠航氧化能力的影響Tab.5 Effects of polysaccharide components on aero-oxidation ability of mice

由表5可知，添加一定量的巴楚蘑菇粉，可以有效增加不同育齡小鼠血清中SOD活力值。有效降低小鼠體內血液中MDA的產生，有效提高其抗氧化能力。此外隨著巴楚蘑菇多糖成分劑量的上升，T-AOC和SOD活性提高幅度明顯加劇，說明該影響性具有遞增效應，MDA量也在不斷遞減，證明其脂質過氧化作用逐漸衰弱。綜上所述，巴楚蘑菇多糖成分可以有效提高試驗小鼠抗氧化能力，對小鼠免疫能力具有間接性的影響。

3 結語

免疫功能是生物機體生存發(fā)展的重要保障，經過試驗，巴楚蘑菇粉對機體新城疫HV抗體有效性具有正向影響，證明其對生物免疫機體具有正向調節(jié)作用。巴楚蘑菇粉可以通過提高淋巴細胞的繁殖能力，促進機體細胞免疫功能，抑制MDA值的擴大，提高機體超氧化歧化酶活性和丙二醛活性，提高機體抗氧化能力。綜上所述，可以推測巴楚蘑菇中的多糖成分對生物體免疫器官具有重要的促進作用。