四種樣本采集方法檢測EB病毒DNA的比較

(焦作市人民醫(yī)院，河南 焦作 454002)

EB病毒是小兒感染性疾病較為常見的病原體，感染時多無明顯癥狀或引起輕度咽峽炎和上呼吸道感染。EBV感染后具有長期攜帶和條件致病的特點(diǎn)，當(dāng)免疫功能低下時EB病毒會造成再次感染[1]。除了能引起傳染性單核細(xì)胞增多癥以外，EBV還能引起組織細(xì)胞增生癥、吞噬細(xì)胞綜合征等較嚴(yán)重疾病[2]。熒光定量PCR能早期、快速診斷EBV感染，但很少見不同樣本采集方法檢測EB DNA的比較。為此，本文對疑似感染EBV患者的咽拭子、外周血單個核細(xì)胞、全血及血漿同時進(jìn)行檢測，比較不同樣本采集方法的檢測異同。

1 資料與方法

1.1標(biāo)本來源 選取2017年11月至2018年2月本院收治的疑似EBV感染患兒85例為實驗組，另收集同期60名健康體檢者作為對照組。咽拭子標(biāo)本采集方式：用咽拭子擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，立即放入采樣管送檢。兩組均取血漿50 μl、單個核細(xì)胞懸液(PBMC)及抗凝全血，采用全血基因組DNA抽提液抽提DNA，操作步驟嚴(yán)格按照說明書來進(jìn)行。

1.2儀器和試劑 實時定量PCR儀為美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司生產(chǎn)的ABI 7500，高速冷凍離心機(jī)來自美國Backman儀器有限公司。EB DNA熒光定量試劑盒由廣州中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，嚴(yán)格按說明書操作。

1.3結(jié)果評定 不同類型的標(biāo)本均使用試劑盒自帶的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定量分析，以>400拷貝數(shù)/ml判讀為陽性，反之為陰性。

2 結(jié)果

2.1不同標(biāo)本類型陽性率的比較 兩組檢測結(jié)果由高到低依次均為咽拭子、PBMC、外周全血及外周血漿，見表1。

2.2兩組血漿EBV DNA定量檢測 在實驗組標(biāo)本中血漿陽性標(biāo)本中EBV DNA含量經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后在2.84～6.33之間，平均為(4.27±0.88)；對照組在2.13～3.67之間，平均為(3.04±0.49)。兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=9.8，P<0.01)。

2.3結(jié)果一致性判斷 血漿EBV DNA與咽拭子、PBMC及外周全血中EBV DNA結(jié)果一致性逐漸增高，表2。

表1 咽拭子、PBMC及外周全血EBV DNA檢測比較[n(%)]

表2 血漿EBV DNA與咽拭子、PBMC及全血中EBV DNA結(jié)果一致比較

3 討論

EB病毒具有普遍易感性和潛伏性，感染EBV的患兒可出現(xiàn)發(fā)熱、傳染性單核細(xì)胞增多癥，甚至?xí)疠^嚴(yán)重的惡性疾病。早期、正確的診斷對疾病的治療有重要意義[3]。本研究將檢測EBV DNA常見的標(biāo)本類型進(jìn)行了同時收集、檢測，結(jié)果表明疑似病例咽拭子EBV DNA陽性率明顯高于其他標(biāo)本含量。研究還發(fā)現(xiàn)，健康人群亦可檢出EBV DNA，也以咽拭子EBV DNA陽性率最高，達(dá)13.33%。結(jié)果提示EBV可長期潛伏于正常人體的鼻咽部和淋巴細(xì)胞，大部分人群因咽拭子EBV DNA拷貝數(shù)太低，未能到達(dá)檢測下限。血漿和外周血EBV DNA檢測主要的對象為血漿中的游離病毒，其陽性代表病毒血癥，不能夠檢測出血細(xì)胞中攜帶的EB病毒，所以，血漿中的陽性率較單個核細(xì)胞和咽拭子低。單個核細(xì)胞以T淋巴細(xì)胞為主，也包括B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞及單核細(xì)胞等。研究證實，EB病毒對B淋巴細(xì)胞較為敏感。

總之，疑似患者組不同類型標(biāo)本之間EBV DNA陽性率和含量存在較大差異，提示在臨床檢測時可考慮采用咽拭子提高檢出率。