張繼東 曹立華 趙培利 楊延源
(河北省秦皇島市第三醫(yī)院 河北 秦皇島 066001)
肝炎是由乙肝病毒(HBV)傳播造成的一種疾病,其中乙型肝炎是對患者威脅最大的肝炎之一[1]。目前,國內(nèi)通常主要根據(jù)患者血清內(nèi)HBsAg含量和HBV-DNA載量對乙肝患者的病情精心診斷鑒別[2]。但是由于醫(yī)療設(shè)備等原因,利用熒光定量PCR法檢測患者血清HBV-DNA載量的做法難以在全國各個醫(yī)院進(jìn)行普及[3]。為了提高對乙型肝炎患者的診斷鑒別能力,本文探討的電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)定量檢測乙型肝炎表面抗原(HBsAg)與熒光定量PCR檢測乙肝病毒DNA(HBV-DNA)載量的關(guān)系,希望對診斷和治療乙型肝炎患者提供有意義的參考。
選擇2018年1月至2019年2月我院收治的170例慢性乙型肝炎患者為研究對象,其中男性患者116例,女性患者54例,患者年齡在13歲至65歲之間,平均年齡為(38.15±10.21)歲,抽取患者靜脈血液分離血清,檢測后留存血清標(biāo)本。
采用ECLIA法對患者血清進(jìn)行HBsAg含量檢測和采用熒光定量PCR法對患者血清進(jìn)行HBV-DNA載量檢測。電化學(xué)發(fā)光法所使用的儀器羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)E602,檢測過程嚴(yán)格按照檢測試劑(來自羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司)的說明書來進(jìn)行操作。熒光定量PCR法所用儀器為上海宏石SLAN96S熒光定量PCR儀,檢測過程嚴(yán)格按照檢測試劑(來自東北制藥股份有限公司)的說明書來進(jìn)行操作以取得最終結(jié)果。
用Microsoft Excel軟件建立數(shù)據(jù)庫,整理后用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行Pearson相關(guān)分析和處理。
170例患者中,有151例患者血清檢測結(jié)果為HBsAg陽性,所占比率為88.82%,有96例患者血清檢測結(jié)果為HBV-DNA陽性,所占比率為56.47%,有96例患者的血清檢測結(jié)果同時為HBsAg和HBV-DNA陽性,所占比率為56.47%,有55例(32.3 5%)患者的血清檢測結(jié)果為HBsAg陽性和HBV-DNA陰性,有19例(11.1 8%)患者的血清檢測結(jié)果為HBsAg陰性和HBV-DNA陰性,有0例患者的血清檢測結(jié)果為HBsAg陰性和HBV-DNA陽性。見下表1。
表1 HBs Ag定性與HBV-DNA定性檢測結(jié)果比較
根據(jù)HBV-DNA載量進(jìn)行分組,分為陰性組、低載量組、中載量組和高載量組。若患者血清HBV-DNA載量小于等于1000IU/ml,則為陰性組;若患者血清HBV-DNA載量在103至105IU/ml之間,則為低載量組;若患者血清HBV-DNA載量在10^5 至10^7IU/ml之間,則為中載量組;若患者血清HBV-DNA載量大于1.0*10^7IUml,則為高載量組。各組患者血清HBVDNA載量和HBsAg定量檢測結(jié)果見下表2。
表2 HBV-DNA載量與HBsAg定量檢測結(jié)果平均值比較
通過Pearson相關(guān)性分析方法,對四組中患者血清HBsAg定量與HBVDNA載量進(jìn)行分析,統(tǒng)計分析結(jié)果顯示兩者之間的r值均小于3,P>0.05,說明兩者之間缺乏相關(guān)性,具體見表3。
表3 HBsAg定量與HBV-DNA相關(guān)性分析
肝炎是由乙肝病毒(HBV)傳播造成的一種疾病,其中乙型肝炎是對患者威脅最大的肝炎之一,傳播途徑包括血液、性接觸以及母嬰等。乙型肝炎患者的臨床表現(xiàn)具有多樣性、不明顯性的特點,較難被患者發(fā)覺,很容易惡化轉(zhuǎn)變成肝硬化,小部分患者甚至?xí)夯稍l(fā)性肝癌,嚴(yán)重威脅著患者的生命健康。目前,我國乙型肝炎患者群體越來越多,越來越威脅著國民的生命健康[4-5]。
隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展,在臨床應(yīng)用上熒光定量PCR法愈發(fā)的成熟,利用熒光定量PCR法檢測患者血清HBV-DNA載量成為主要的診斷鑒別乙肝的有效方法[6]?;颊吒腥綡BV主要在于乙肝病毒在宿主體內(nèi)不斷進(jìn)行復(fù)制,所以若可以對乙肝病毒的復(fù)制活動進(jìn)行檢測,那對乙肝患者的診斷就會更加準(zhǔn)確,而恰好HBV-DNA載量水平便可以很好的反應(yīng)乙肝病毒的復(fù)制活動。有相關(guān)文獻(xiàn)表明,目前評價乙肝病毒在宿主體內(nèi)的復(fù)制情況的“金標(biāo)準(zhǔn)”就是患者血清的HBV-DNA載量水平。測定HBV-DNA載量水平為診斷治療患者提供了可靠的依據(jù),是非常重要的指標(biāo)。但是,熒光定量PCR法的操作非常復(fù)雜,需要非常專業(yè)的高能力的人員和非常好的實驗室條件才可以進(jìn)行,這種苛刻的條件嚴(yán)重束縛了這種技術(shù)在全國的推廣,只有那些具有非常好人力資源和技術(shù)資源的醫(yī)院才有能力獨自進(jìn)行熒光定量PCR法的操作。此外,慢性乙型肝炎患者在經(jīng)過一段時間的藥物治療后,一定比例的患者血清HBV-DNA會下降到較為低的水平,難以被檢測。因此,以其為依據(jù),判定何時對患者停止抗病毒藥物的使用具有一定的局限性。
乙型肝炎病毒在感染患者正常的肝細(xì)胞過程中,由病毒S基因編碼的多肽的HBV外膜蛋白起到了重要的作用。正常健康者在受到HBV感染后的5到7天內(nèi),血清中就會有HBsAg的出現(xiàn),在非活動攜帶狀態(tài)期、免疫耐受期、再活動期和免疫清除期,HBV感染以及部分肝硬化和肝癌患者的血清中均可檢測到HB s A g;在HBV感染的急性期,對患者的血清進(jìn)行檢測,仍舊可以檢測到HB s A g,所以對患者血清進(jìn)行HBsAg進(jìn)行檢測一直是臨床上一種傳統(tǒng)的診斷HBV感染的方法。對于HBsAg的檢測方法,以往一般采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)行檢測。有一部分文獻(xiàn)以該方法進(jìn)行HBsAg檢測,得出了患者血清內(nèi)HBsAg水平和HBV-DNA載量之間具有正的相關(guān)性的結(jié)論。但也有一部分文獻(xiàn)認(rèn)為患者血清內(nèi)HBsAg水平和HBV-DNA載量之間之間不具有相關(guān)性。
近幾年來,國際上對通過電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)檢測血清HBsAg含量而非ELISA法,分析HBsAg含量與HBV-DNA表現(xiàn)出了較強的興趣。本文也是在電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)的基礎(chǔ)上,探討電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)定量檢測乙型肝炎表面抗原(HBsAg)與熒光定量PCR檢測乙肝病毒DNA(HBV-DNA)載量的關(guān)系,希望對診斷和治療乙型肝炎患者提供有意義的參考。本次研究結(jié)果顯示,在170例患者當(dāng)中,有151例患者血清檢測結(jié)果為HBsAg陽性,所占比率為88.82%,有96例患者血清檢測結(jié)果為HBV-DNA陽性,所占比率為56.47%,有96例患者的血清檢測結(jié)果同時為HBsAg和HBV-DNA陽性,所占比率為56.47%。利用統(tǒng)計學(xué)知識,分析發(fā)現(xiàn),HBsAg含量和HBV-DNA載量之間不具有相關(guān)性,P>0.05。本次研究認(rèn)為HBsAg含量和HBV-DNA載量之間不具有相關(guān)性,這與一些文獻(xiàn)的結(jié)論相一致,但是也與采用ELISA方法檢測HBsAg的文獻(xiàn)結(jié)論不同。不同原因可能在于所用方法不同,也可能是由于研究對象本身所具有的特性不同。
綜上所述,ECLIA法定量檢測HBsAg和熒光定量PCR法檢測HBV-DNA載量之間不具有相關(guān)性,在對患者進(jìn)行診斷時候,同時采用這兩種方法檢測HBsAg和HBV-DNA載量,可以為臨床提供更優(yōu)的診斷依據(jù),提高治療效果。