EDTA抗凝標(biāo)本保存條件和時(shí)間對(duì)微柱凝膠法檢測(cè)血型的影響

徐 樸 周 愫 何紫琪 余 華

EDTA抗凝標(biāo)本是血型檢測(cè)常用的標(biāo)本，而微柱凝膠法是目前檢測(cè)血型的常用方法[1～5]。臨床輸血相關(guān)法規(guī)規(guī)定輸血標(biāo)本檢測(cè)后于2～6℃至少保存7天，主要是為了追查不良事件，如果能保存更長(zhǎng)時(shí)間則更有利于追查不良事件，但EDTA抗凝標(biāo)本究竟保存多長(zhǎng)時(shí)間仍然能有效地檢測(cè)出血型，目前尚無(wú)報(bào)道。本研究對(duì)血型標(biāo)本保存時(shí)間和結(jié)果的準(zhǔn)確性方面進(jìn)行了探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

材料與方法

1.標(biāo)本來(lái)源：隨機(jī)收集筆者醫(yī)院2017年9月體檢健康人群EDTA-K2抗凝標(biāo)本256例，分為常溫組和4℃組。常溫組128例，其中男性76例，女性52例，患者年齡18～56歲，中位年齡35歲；4℃組128例，其中男性67例，女性61例，患者年齡19～53歲，中位年齡32歲；為避免血型之間的差異，每組A型、B型、AB型、O型標(biāo)本各選取64例。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組間年齡、性別構(gòu)成、ABO血型比例比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.試劑與儀器：ABO、RhD血型定型檢測(cè)卡由長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供。卡式離心機(jī)為BYL型血型血清學(xué)多用途離心機(jī)。

3.保存條件與觀(guān)察指標(biāo)：常溫組于室溫下保存，4℃于2～6℃冰箱保存，觀(guān)察標(biāo)本開(kāi)始發(fā)生溶血(部分溶血)和完全溶血的時(shí)間。

4.微柱凝膠法檢測(cè)血型：對(duì)發(fā)生溶血不同階段的標(biāo)本用微柱凝膠法檢測(cè)血型，按試劑說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作，在BYL型血型血清學(xué)多用途離心機(jī)上離心后觀(guān)察結(jié)果。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：使用SPSS 20.0軟件學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組間差異采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.不同保存條件下標(biāo)本溶血狀態(tài)比較：標(biāo)本分類(lèi)保存后開(kāi)始記錄，第1周均未發(fā)現(xiàn)溶血。從第2周開(kāi)始，無(wú)論哪種條件保存，均有部分標(biāo)本開(kāi)始溶血。常溫保存至35天時(shí)所有標(biāo)本均完全溶血，4℃保存至77天時(shí)所有標(biāo)本均完全溶血。4℃與常溫條件比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳見(jiàn)表1。

表1 不同保存條件下標(biāo)本溶血狀態(tài)比較 (n)

與常溫比較，t=3.033,P=0.011

2.不同溶血狀態(tài)對(duì)微柱凝膠法檢測(cè)血型的影響：用微柱凝膠法檢測(cè)血型，當(dāng)標(biāo)本不溶血時(shí)正反定型結(jié)果均清晰可見(jiàn)，詳見(jiàn)圖1；部分溶血時(shí)，正定型無(wú)影響而反定型稍有影響，但不影響血型鑒定，詳見(jiàn)圖2；當(dāng)標(biāo)本完全溶血后，反定型無(wú)法判斷結(jié)果，而正定型結(jié)果已模糊不清，血型不能準(zhǔn)確鑒定，詳見(jiàn)圖3。

圖1 未溶血時(shí)微柱凝膠法檢測(cè)結(jié)果

圖2 部分溶血時(shí)微柱凝膠法檢測(cè)結(jié)果

圖3 完全溶血時(shí)微柱凝膠法檢測(cè)結(jié)果

討 論

安全有效的臨床輸血是現(xiàn)代醫(yī)療中的一項(xiàng)重要措施，而準(zhǔn)確的血型鑒定是臨床輸血安全的重要保障[6～8]。為保障臨床輸血安全及輸血后不良事件追蹤與調(diào)查，無(wú)論是臨床輸血科(血庫(kù))還是血站，均會(huì)對(duì)檢測(cè)的血型標(biāo)本留存以方便后期核查，一般認(rèn)為保存時(shí)間越長(zhǎng)則越有利于不良事件的追蹤與調(diào)查，但這些標(biāo)本究竟可以保存多長(zhǎng)時(shí)間而不影響血型鑒定，目前尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。EDTA抗凝標(biāo)本由于無(wú)稀釋、無(wú)凝塊、可用于自動(dòng)化檢測(cè)等諸多優(yōu)點(diǎn)，因而是輸血前檢測(cè)常用的標(biāo)本[9～12]。標(biāo)本保存常用的條件是常溫和4℃。微柱凝膠法具有簡(jiǎn)單、規(guī)范、靈敏度高、易于操作等優(yōu)點(diǎn)而成為目前檢測(cè)血型常用的方法[13～16]。本研究就常用的EDTA抗凝標(biāo)本在常溫和4℃條件下保存后用微柱凝膠法檢測(cè)血型，探討保存條件和保存時(shí)間對(duì)微柱凝膠法檢測(cè)血型的影響。

隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，標(biāo)本開(kāi)始溶血并且逐漸加重。溶血狀態(tài)通常有不溶血、不完全溶血和完全溶血3種。不溶血標(biāo)本血清(漿)層呈淡黃色清晰透明，紅細(xì)胞和血清(漿)層分界清晰，不完全溶血標(biāo)本血清(漿)層呈紅色半透明狀態(tài)，紅細(xì)胞和血清(漿)層分界模糊，完全溶血標(biāo)本呈暗紅色混濁狀態(tài)，紅細(xì)胞和血清(漿)不能分層。

本研究發(fā)現(xiàn)，在常溫或4℃保存條件下，第7天均未發(fā)現(xiàn)溶血；第14天時(shí)，常溫保存標(biāo)本約有1/3開(kāi)始溶血，4℃保存標(biāo)本只有少量發(fā)生溶血，隨保存時(shí)間延長(zhǎng)，溶血程度逐漸加重；常溫保存標(biāo)本第35天時(shí)均完全溶血，而4℃保存標(biāo)本第77天時(shí)均完全溶血。標(biāo)本未同時(shí)發(fā)生溶血與不同個(gè)體紅細(xì)胞膜穩(wěn)定性、脆性以及采血技巧等有關(guān)。上述結(jié)果表明，無(wú)論是常溫還是4℃保存，EDTA-K2抗凝標(biāo)本在1周內(nèi)均無(wú)明顯變化，但隨著保存時(shí)間延長(zhǎng)，4℃保存條件明顯優(yōu)于常溫保存(P<0.05)。

通過(guò)觀(guān)察不同溶血狀態(tài)對(duì)微柱凝膠法血型檢測(cè)結(jié)果的影響發(fā)現(xiàn)，標(biāo)本未溶血時(shí)，正反定型結(jié)果均清晰可見(jiàn)，對(duì)血型鑒定無(wú)影響；當(dāng)標(biāo)本發(fā)生部分溶血時(shí)，正定型無(wú)明顯影響，而反定型雖然液體顏色偏紅，但不影響凝集強(qiáng)度的觀(guān)察，對(duì)血型鑒定影響不大；當(dāng)標(biāo)本發(fā)生完全溶血后，反定型結(jié)果受到嚴(yán)重干擾，已無(wú)法判斷，正定型結(jié)果亦較難判斷，此時(shí)已不能再用微柱凝膠法進(jìn)行鑒定。上述結(jié)果表明，常溫標(biāo)本保存至第35天、4℃標(biāo)本保存至第77天時(shí)，已無(wú)法用微柱凝膠法檢測(cè)血型。本研究結(jié)果與許桂平等[17]研究發(fā)現(xiàn)溶血標(biāo)本對(duì)血型檢測(cè)有影響的結(jié)果一致。而屠海濤等[18]研究發(fā)現(xiàn)，標(biāo)本溶血對(duì)反定型無(wú)影響，完全溶血對(duì)正定型有影響。該研究對(duì)正定型的影響和完全溶血標(biāo)本無(wú)法進(jìn)行血型檢測(cè)的結(jié)論與本研究一致，但反定型的結(jié)論與本研究不一致，其原因是該研究采取冰凍和機(jī)械溶血的方法，而本研究模擬日常工作對(duì)標(biāo)本的保存方式進(jìn)行保存，隨保存時(shí)間延長(zhǎng)，溶血更為徹底；同時(shí)該研究采用的實(shí)驗(yàn)方法為試管法，與本研究采用的微柱凝膠法也不一致。

綜上所述，本研究中無(wú)論是常溫還是4℃保存，EDTA抗凝標(biāo)本的最佳保存時(shí)間為1周，此時(shí)用微柱凝膠法檢測(cè)血型無(wú)影響。常溫保存35天內(nèi)、4℃保存77天內(nèi)，對(duì)反定型有影響，此時(shí)用微柱凝膠法檢測(cè)血型須謹(jǐn)慎。常溫標(biāo)本保存超過(guò)35天、4℃標(biāo)本保存超過(guò)77天時(shí)，標(biāo)本發(fā)生完全溶血，此時(shí)不宜用微柱凝膠法檢測(cè)血型。上述研究可為輸血不良事件調(diào)查中關(guān)于標(biāo)本保存條件、期限以及檢測(cè)方法提供實(shí)驗(yàn)室參考數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自身需要選擇標(biāo)本保存條件、期限和檢測(cè)方法。