巴馬特色飲食模式對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠運(yùn)動(dòng)能力和抗焦慮水平的影響

蘭海靜，楊伯寧，黃聯(lián)莉，孫 薈，宋 奇，黃燕婷，何潛祖，李 萌，李全陽,*

（1.廣西大學(xué)輕工與食品工程學(xué)院，廣西 南寧 530004；2.廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣西 南寧 530021；3.廣西普生三鳳乳業(yè)有限公司，廣西 南寧 530226；4.廣西大學(xué)醫(yī)院，廣西 南寧 530004）

《“健康中國2030”規(guī)劃綱要》[1]把人們對(duì)健康食品的重視程度提升到一個(gè)新高度，為此我們?cè)噲D采用“問計(jì)于百歲老人求健康飲食”的策略，探索新型的健康飲食模式。日常飲食習(xí)慣在健康衰老中被認(rèn)為是最重要的影響因素[2-3]，對(duì)大腦認(rèn)知功能也有很大的影響[4-5]。地中海飲食被認(rèn)為是一種被廣泛認(rèn)可的健康飲食模式，對(duì)多種疾病具有預(yù)防、治療作用[6]，如心血管疾病和其他與年齡相關(guān)的疾病[2,7]；也可降低總死亡率及癌癥風(fēng)險(xiǎn)[8]，并改善認(rèn)知功能[4,9]。其飲食營養(yǎng)成分特點(diǎn)是高纖維素、高蛋白質(zhì)、低脂肪和低熱量[8]。除此之外，沖繩的長壽優(yōu)勢(shì)被認(rèn)為與健康的生活方式有關(guān)，沖繩傳統(tǒng)飲食中主食為紅薯，這可能有助于減少與年齡相關(guān)的慢性疾病，如癌癥和心血管疾病[2,10]。

本團(tuán)隊(duì)的前期研究已對(duì)巴馬長壽地區(qū)老人的營養(yǎng)素?cái)z入量和飲食結(jié)構(gòu)進(jìn)行了調(diào)查分析，“世界長壽之鄉(xiāng)”巴馬長壽人群日常膳食中碳水化合物比例、維生素?cái)z入量偏高，且具有低能量、低脂肪、低蛋白、低膽固醇的特征，有利于人類健康長壽[11]。王芳的研究表明廣西巴馬長壽地區(qū)是以粥類、粗雜糧類等食物為主的膳食纖維多糖飲食模式[12]。宋奇等[13]研究的5 種巴馬長壽飲食模式中復(fù)合飲食對(duì)衰老小鼠的抗氧化應(yīng)激效果最佳，而元素組的抗氧化應(yīng)激效果并不明顯，表明巴馬長壽飲食模式具有較顯著的抗衰老作用和良好的開發(fā)潛力。單一食材不足以評(píng)估飲食對(duì)健康長壽的影響，組合型食物能夠更大限度地發(fā)揮膳食抗氧化劑的作用[14]。

在現(xiàn)有文獻(xiàn)中，多數(shù)研究都以預(yù)防與年齡有關(guān)的慢性疾病為出發(fā)點(diǎn)，鮮有從借鑒長壽地區(qū)飲食結(jié)構(gòu)的角度切入，構(gòu)建健康長壽飲食模式再進(jìn)行研究驗(yàn)證的報(bào)道[7]；而且因各地的食材和氣候差別很大，國外的飲食模式很難被中國普通人群所接受，從而有必要探索適合中國普通居民健康長壽的新型飲食模式。目前鮮有飲食模式對(duì)衰老小鼠的運(yùn)動(dòng)能力和抗焦慮水平影響效果的報(bào)道，以及改善衰老動(dòng)物運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力及抗焦慮能力對(duì)飲食模式效果的研究。為此，本研究總結(jié)巴馬長壽老人的飲食特點(diǎn)及特色益生菌，構(gòu)建巴馬特色飲食模式，利用動(dòng)物模型進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)一步從D-半乳糖致衰老小鼠運(yùn)動(dòng)能力和抗焦慮方面來探索巴馬特色飲食模式對(duì)衰老小鼠的抗衰老效果，以期為適合中國普通居民健康長壽新型飲食模式的構(gòu)建提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

6 周齡SPF級(jí)昆明小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量（25±2）g，購自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（桂）2014-002），飼養(yǎng)溫度控制在（24±2）℃，相對(duì)濕度（60±10）%，12 h晝夜交替，每天給予5 g飼料[15-16]，自由飲水。

白藜蘆醇、抗壞血酸鈉、大豆異黃酮、低聚木糖、D-半乳糖 上海源葉生物技術(shù)有限公司；基礎(chǔ)飼料（符合GB 13078—2017《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》和GB 14924.3—2010《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 配合飼料營養(yǎng)成分》要求） 北京科奧協(xié)力飼料有限公司；低聚果糖 量子高科（中國）生物股份有限公司；異麥芽低聚糖 山東天久生物技術(shù)有限公司；VE粉末、VA醋酸酯干粉末 新昌新和成維生素有限公司；LT-P132發(fā)酵乳桿菌、LT-L614干酪乳桿菌（均分離自廣西巴馬百歲老人糞便） 廣西大學(xué)輕工與食品工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)室；MRS培養(yǎng)基按GB 4789.35—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 乳酸菌檢驗(yàn)》方法配制，固態(tài)培養(yǎng)基中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.5%瓊脂。

1.2 儀器與設(shè)備

超微粉碎機(jī) 浙江省溫嶺市創(chuàng)力藥材機(jī)械廠；曠場(chǎng)測(cè)試系統(tǒng) 西班牙Panlab公司；立式高壓滅菌鍋 上海三申醫(yī)療器械有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海新苗醫(yī)療器械有限公司；超凈工作臺(tái) 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；KQ320DB型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；WGL-125B電熱鼓風(fēng)干燥箱 天津市泰斯特儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 小鼠飼料的制備

因巴馬特色飲食模式以膳食纖維多糖為主，具有高膳食纖維、高VA、低能量、低脂肪、低蛋白、低膽固醇攝入的特征，同時(shí)微量元素鐵、錳、鈷、硒對(duì)健康長壽現(xiàn)象的形成具有重要而積極的影響[11-12]。宋奇等的研究結(jié)果表明5 種巴馬長壽飲食模式中復(fù)合飲食對(duì)衰老小鼠的抗氧化應(yīng)激效果最佳[13]。因此，本研究將小鼠基礎(chǔ)飼料打粉，以此為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)巴馬特色飼料。依據(jù)宋奇等[13]的研究結(jié)果，結(jié)合GB 14924.3—2010、中國居民膳食營養(yǎng)素推薦攝入量、保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年版）、文獻(xiàn)[11]中巴馬百歲組營養(yǎng)素?cái)z入量，并參考齊廣海[17]、侯放亮[18]等的方法，配制巴馬特色飼料II、III、IV，并以巴馬特色益生菌發(fā)酵乳桿菌LT-P132和干酪乳桿菌LT-L614體積比1∶1混合灌胃，加以基礎(chǔ)飼料喂食作為巴馬特色飲食模式I（模式I）。巴馬特色飲食模式II（模式II）飼料中VA、VE及微量元素鐵、錳、硒的添加量依據(jù)GB 14924.3—2010設(shè)計(jì)；硒、鈷添加量參考宋奇等[13]實(shí)驗(yàn)中元素組、復(fù)合組設(shè)計(jì)；大豆異黃酮、VC及白藜蘆醇添加量參考文獻(xiàn)[19-21]設(shè)計(jì)；膳食纖維添加量參考文獻(xiàn)[22-24]設(shè)計(jì)。巴馬特色飲食模式III（模式III）飼料中維生素類及微量元素添加量依據(jù)中國居民膳食營養(yǎng)素推薦攝入量10 倍和保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年版）設(shè)計(jì)；大豆異黃酮及白藜蘆醇添加量參考文獻(xiàn)[19,25]設(shè)計(jì)；膳食纖維添加量參考文獻(xiàn)[26-28]設(shè)計(jì)。巴馬特色飲食模式IV（模式IV）飼料中膳食纖維添加量參考文獻(xiàn)[28-30]設(shè)計(jì)，維生素類及微量元素類添加量參考巴馬百歲老人攝入量[31]，白藜蘆醇及大豆異黃酮添加量參考文獻(xiàn)[19,32]設(shè)計(jì)。

1.3.2 動(dòng)物分組及處理

SPF級(jí)昆明小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，每組10 只，雌雄各半，隨機(jī)分成6 組：年輕對(duì)照組、衰老模型組、巴馬特色飲食模式I、II、III、IV組。除年輕對(duì)照組注射等體積生理鹽水外，其余5 組每日上午頸背部皮下注射100 g/L D-半乳糖溶液0.2 mL/20 g mb建立衰老模型。從造模第9周開始，除年輕對(duì)照組外，其他組均繼續(xù)注射D-半乳糖溶液。巴馬特色飲食模式II、III、IV組每天給予相應(yīng)巴馬特色飼料飼養(yǎng)，巴馬特色飲食模式I組給予基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)，各巴馬特色飲食組均按0.1 mL/10 g mb分別灌胃濃度為109CFU/mL的干酪乳桿菌LT-L614、發(fā)酵乳桿菌LT-P132（體積比1∶1），其余組繼續(xù)以基礎(chǔ)飼料飼喂，灌胃等量生理鹽水。于實(shí)驗(yàn)第18周開展運(yùn)動(dòng)能力和抗焦慮測(cè)試，整個(gè)飼養(yǎng)過程中無小鼠死亡，每周稱體質(zhì)量一次。

1.3.3 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)[33-36]進(jìn)行。緊繩實(shí)驗(yàn)參照文獻(xiàn)[37-39]進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有結(jié)果表示為 ±s。如果數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，則進(jìn)行組間多重比較，采用單因素方差分析和Duncan’s檢驗(yàn)；如果數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，則進(jìn)行組間Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。顯著性水平定為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 巴馬特色飲食模式對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠體質(zhì)量的影響

圖1 巴馬特色飲食模式對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠體質(zhì)量的影響Fig. 1 Effect of Bama characteristic dietary patterns on body mass of D-galactose-induced aging mice

體質(zhì)量的改變是衰老的生理指標(biāo)之一[40]。本研究持續(xù)追蹤了整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間小鼠的體質(zhì)量變化，由圖1可知，各組小鼠的初始體質(zhì)量沒有明顯差異，與年輕對(duì)照組相比，衰老模型組小鼠體質(zhì)量增加緩慢，可能是由于隨著D-半乳糖處理時(shí)間的延長，小鼠衰老程度不斷加重而造成的。在第9周，飼喂巴馬特色飼料及灌胃益生菌后，各組小鼠體質(zhì)量在整個(gè)飼養(yǎng)過程中沒有顯著性差異（P＞0.05），整體的變化趨勢(shì)為：在第10周時(shí)各組小鼠體質(zhì)量有下降趨勢(shì)；在第11周時(shí)各小組小鼠體質(zhì)量開始緩慢增加，直至第16周時(shí)達(dá)最高點(diǎn)。Spindler等[41]的研究中未觀察到營養(yǎng)品組合對(duì)小鼠體質(zhì)量增長具有顯著性差異。本研究中巴馬特色飲食模式也均未對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠體質(zhì)量產(chǎn)生影響，表明巴馬特色飲食模式對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的生長發(fā)育基本沒有影響。

2.2 巴馬特色飲食模式對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的影響

圖2 巴馬特色飲食模式對(duì)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中各組小鼠后肢直立數(shù)（A）、穿越方格數(shù)（B）、總運(yùn)動(dòng)距離（C）及平均速率（D）的影響Fig. 2 Effect of Bama characteristic dietary patterns on the number of hind limb stand (A), the number of squares crossed (B), total movement distance (C) and average speed (D) of each group

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)是評(píng)估小鼠對(duì)新環(huán)境的自發(fā)探索行為和感覺運(yùn)動(dòng)能力時(shí)使用比較廣泛的一種行為學(xué)實(shí)驗(yàn)[35,42]，跨越方格數(shù)和后肢直立數(shù)可以表征小鼠的活動(dòng)能力[36]。D-半乳糖可以損傷小鼠自發(fā)探索能力[43-44]，且經(jīng)過D-半乳糖處理的小鼠在一系列行為測(cè)試中顯示出與衰老有關(guān)的缺陷[43]。由圖2A可知，與年輕對(duì)照組相比，衰老模型組小鼠后肢直立數(shù)顯著減少至（9.40±4.43）次（P＜0.05），表明經(jīng)D-半乳糖處理的小鼠運(yùn)動(dòng)探究能力顯著衰退。模式I、II、III、IV組小鼠的后肢直立數(shù)與年輕對(duì)照組無顯著性差異（P＞0.05）；與衰老模型組比，模式I、II、III、IV組小鼠后肢直立數(shù)分別提高至（18.20±7.38）、（21.80±8.95）、（19.70±11.28）、（18.30±8.92）次，表明巴馬特色飲食模式能緩解或修復(fù)D-半乳糖致衰老因子所造成的小鼠活動(dòng)能力損傷，提高衰老小鼠的自主活動(dòng)能力及適應(yīng)能力，降低其焦慮水平。與模式I組相比，模式II組小鼠后肢直立數(shù)提高幅度最大，提高了19.78%，表明巴馬特色飲食模式II較模式I對(duì)改善致衰老小鼠運(yùn)動(dòng)探究能力的作用效果更佳。由圖2B、C可知，與年輕對(duì)照組相比，衰老模型組小鼠穿越方格數(shù)、總運(yùn)動(dòng)距離分別下降了14.10%和13.62%（P＞0.05），顯示D-半乳糖能使小鼠在一定程度上產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)障礙。模式II組較衰老模型組、模式I組小鼠穿越方格數(shù)分別增加19.71%、13.89%（P＞0.05），總運(yùn)動(dòng)距離分別提高16.92%、9.76%（P＞0.05）。從圖2D可以看出，模式II組小鼠的平均速率大于衰老模型組及模式I組小鼠。表明巴馬特色飲食模式II相對(duì)于模式I而言對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠運(yùn)動(dòng)探究能力具有更好的改善作用，增加了D-半乳糖致衰老小鼠對(duì)新環(huán)境的探索動(dòng)力。

為了更具體地展現(xiàn)小鼠在曠場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)情況，采用小鼠累積活動(dòng)量三維圖來表征小鼠在曠場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)情況（圖3）。

圖3 各組小鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)典型運(yùn)動(dòng)情況Fig. 3 Typical movement maps of mice from each group in open field test

由圖3可知，年輕對(duì)照組小鼠在曠場(chǎng)中活動(dòng)范圍廣泛，多趨向于在曠場(chǎng)中心活動(dòng)。衰老模型組小鼠幾乎不到曠場(chǎng)中心活動(dòng)，活動(dòng)范圍較窄，且多趨向于曠場(chǎng)周邊。模式I組小鼠多于曠場(chǎng)周邊運(yùn)動(dòng)，其運(yùn)動(dòng)量大于衰老模型組。模式II、III、IV組小鼠活動(dòng)范圍較廣，運(yùn)動(dòng)量增加，其中模式II、III組小鼠較年輕對(duì)照組、衰老模型組和模式I組小鼠表現(xiàn)更佳。

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)還可以用來評(píng)估小鼠情緒反應(yīng)[33]及焦慮性[34]。小鼠在曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間越短，表明其焦慮水平越高；后肢直立次數(shù)越多，表明其焦慮性越低[45]。衰老可顯著影響小鼠情緒[46]。從圖4A中可以看出，年輕對(duì)照組小鼠在曠場(chǎng)中總運(yùn)動(dòng)時(shí)間為（277.34±11.34）s。與年輕對(duì)照組相比，衰老模型組小鼠總運(yùn)動(dòng)時(shí)間顯著縮短至（260.21±17.65）s，表明D-半乳糖損害了衰老小鼠的運(yùn)動(dòng)探究能力。巴馬特色飲食模式I、II、III、IV組小鼠的總運(yùn)動(dòng)時(shí)間分別為（273.11±9.53）、（273.72±8.78）、（274.10±12.68）、（272.47±17.97）s，與年輕對(duì)照組相比沒有顯著性差異（P＞0.05），表明巴馬特色飲食模式均能使D-半乳糖致衰老小鼠的運(yùn)動(dòng)能力提高至正常水平。與衰老模型組相比，巴馬特色飲食模式I、II、III、IV組小鼠的總運(yùn)動(dòng)時(shí)間分別顯著延長了4.96%、5.19%、5.34%和4.71%（P＜0.05），表明巴馬特色飲食能改善由D-半乳糖所致的運(yùn)動(dòng)損傷。

圖4 各組小鼠總運(yùn)動(dòng)時(shí)間（A）及在曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間（B）Fig. 4 Effect of Bama characteristic dietary patterns on total movement time (A) and central activity time (B) of each group in open field test

由圖4B可知，年輕對(duì)照組小鼠曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間為（46.45±14.04）s。與年輕對(duì)照組小鼠相比，衰老模型組小鼠曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間顯著縮短了33.33%（P＜0.05）；模式I、II、IV組小鼠曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間較年輕對(duì)照組均無顯著性差異（P＞0.05），分別為（50.52±14.42）、（53.72±11.05）s及（49.08±8.38）s，表明模式I、II、IV均能對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的情緒有調(diào)節(jié)作用。與衰老模型組相比，模式I、II、III、IV組小鼠中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間分別顯著延長了63.12%、73.46%、116.60%和58.48%（P＜0.05），表明巴馬特色飲食模式能降低D-半乳糖致衰老小鼠的焦慮水平，使其對(duì)新刺激的敏感性增加。與模式I組相比，模式III組小鼠中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間顯著延長32.78%，表明巴馬特色飲食模式III對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠焦慮性的抑制效果明顯優(yōu)于模式I。與年輕對(duì)照組相比，模式III組小鼠曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間顯著延長了44.41%（P＜0.05），這種現(xiàn)象在目前研究中還鮮有報(bào)道，進(jìn)一步表明巴馬特色飲食模式III能逆轉(zhuǎn)D-半乳糖致衰老小鼠的焦慮性，使其情緒更加穩(wěn)定。

據(jù)報(bào)道，灌胃100 mg/kg紫甘薯色素能使注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)5% D-半乳糖8 周致衰老小鼠跨越方格數(shù)提高至130 格[43]；灌胃高、中劑量的活性肽-N分別能使注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)1% D-半乳糖致衰老小鼠后肢直立數(shù)提高83.85%（P＜0.05）、119.10%（P＜0.01）[47]。本研究通過注射18 周質(zhì)量分?jǐn)?shù)10% D-半乳糖使小鼠衰老，巴馬特色飲食模式II、III、IV組小鼠的后肢直立數(shù)分別提高131.91%（P＜0.05）、109.57%（P＜0.05）和94.68%（P＞0.05），表明巴馬特色飲食能明顯提高致衰老小鼠的活動(dòng)能力。Tian Yan等[35]研究發(fā)現(xiàn)，灌胃400 mg/（kg·d）高分子質(zhì)量柿子單寧能使D-半乳糖致衰老小鼠后肢直立數(shù)和跨越方格數(shù)分別增加至8 次和110 格，而本實(shí)驗(yàn)中巴馬特色飲食模式II、III、IV組小鼠平均后肢直立數(shù)幾乎是其2 倍。模式II使D-半乳糖致衰老小鼠的運(yùn)動(dòng)距離增加16.92%（P＞0.05），曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間顯著延長73.46%（P＜0.05）；模式III使致衰老小鼠中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間顯著延長116.60%（P＜0.05）。Zhang Yan等[48]研究發(fā)現(xiàn)，飼喂柚皮素后，注射150 mg/kg D-半乳糖8 周致衰老小鼠的運(yùn)動(dòng)距離顯著提高約11.54%，曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間顯著延長約57.14%。對(duì)比看來，本研究中的模式II、III對(duì)致衰老小鼠的抗焦慮性、自發(fā)探索行為及感覺運(yùn)動(dòng)能力的提高效果與相關(guān)報(bào)道結(jié)果相比具有一定的優(yōu)勢(shì)。

2.3 巴馬特色飲食模式對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠緊繩實(shí)驗(yàn)的影響

緊繩實(shí)驗(yàn)主要檢測(cè)小鼠神經(jīng)肌肉協(xié)調(diào)與感覺運(yùn)動(dòng)能力[49]，它要求小鼠有較好的協(xié)調(diào)能力、較強(qiáng)的肌肉力量和較低的焦慮水平[37]。懸掛時(shí)間考察小鼠體力及平衡能力，懸掛時(shí)間的縮短及轉(zhuǎn)換分值的下降反映小鼠運(yùn)動(dòng)平衡能力的下降[37]。由圖5A可知，衰老模型組小鼠懸掛時(shí)間較年輕對(duì)照組縮短24.88%（P＞0.05），表明D-半乳糖致衰老小鼠的平衡運(yùn)動(dòng)能力減退。模式II、III、IV組小鼠懸掛時(shí)間相對(duì)于年輕對(duì)照組分別延長至（58.90±4.74）、（57.67±6.28）、（57.47±7.78）s（P＞0.05），表明巴馬特色飲食模式II、III、IV能提高致衰老小鼠的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力。與衰老模型組相比，巴馬特色飲食模式I～I(xiàn)V組小鼠懸掛時(shí)間分別延長20.45%（P＞0.05）、51.92%（P＜0.05）、48.75%（P＜0.05）和48.23%（P＜0.05）。與模式I組相比，模式II、III、IV組小鼠懸掛時(shí)間分別顯著延長26.12%、23.49%及23.06%（P＜0.05），表明巴馬特色飲食能顯著改善衰老小鼠肌肉力量、運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性和平衡能力，且效果優(yōu)于益生菌飲食。

圖5 各組小鼠緊繩懸掛時(shí)間（A）、轉(zhuǎn)換分值（B）Fig. 5 Effect of Bama characteristic dietary patterns on suspension time (A) and conversion score (B) of each group in tight rope test

由圖5B可知，與年輕對(duì)照組相比，衰老模型組小鼠轉(zhuǎn)換分值顯著減少43.55%（P＜0.05），模式I組小鼠轉(zhuǎn)換分值下降15.43%（P＞0.05），而模式II、III、IV組分別提高43.66%（P＜0.05）、39.33%（P＜0.05）和16.02%（P＞0.05），表明巴馬特色飲食模式II、III能顯著逆轉(zhuǎn)D-半乳糖致衰老小鼠的運(yùn)動(dòng)失衡，提高其感覺運(yùn)動(dòng)能力，且效果明顯優(yōu)于模式I。與衰老模型組小鼠相比，巴馬特色飲食模式I～I(xiàn)V組小鼠轉(zhuǎn)換分值分別顯著增加了49.81%、154.47%、146.79%和105.50%（P＜0.05）。表明巴馬特色飲食模式能顯著改善D-半乳糖致衰老小鼠肌肉力量、運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性和感覺運(yùn)動(dòng)能力，其中模式II、III效果更佳。

白藜蘆醇能顯著提高衰老小鼠神經(jīng)肌肉協(xié)調(diào)與感覺運(yùn)動(dòng)能力，使得衰老小鼠的懸掛時(shí)間顯著延長42.86%，轉(zhuǎn)換分值顯著增加75%[49]。本研究中巴馬特色飲食模式II組小鼠能將懸掛時(shí)間顯著延長51.92%（P＜0.05），轉(zhuǎn)換分值顯著增加154.47%（P＜0.05），與相關(guān)報(bào)道相比具有一定的優(yōu)勢(shì)。然而，在現(xiàn)有文獻(xiàn)中鮮有對(duì)飲食模式改善神經(jīng)肌肉協(xié)調(diào)與感覺運(yùn)動(dòng)能力方面的研究。本研究發(fā)現(xiàn)D-半乳糖致衰老小鼠經(jīng)巴馬特色飲食模式干預(yù)后，模式II、III、IV組小鼠懸掛時(shí)間及轉(zhuǎn)換分值均得到顯著延長和提高，此現(xiàn)象在目前飲食模式的相關(guān)研究中鮮有報(bào)道。

3 結(jié) 論

本研究以“問計(jì)于百歲老人求健康飲食”為出發(fā)點(diǎn)，以巴馬長壽老人飲食特征為借鑒，探索新型健康的飲食模式，設(shè)計(jì)了4 種巴馬特色飲食模式，并利用D-半乳糖致衰老小鼠模型進(jìn)行驗(yàn)證。研究發(fā)現(xiàn)，各巴馬特色飲食模式均對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的體質(zhì)量變化沒有顯著影響（P＞0.05）。通過曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、緊繩實(shí)驗(yàn)來探究巴馬特色飲食模式對(duì)衰老小鼠模型自發(fā)探索行為、神經(jīng)肌肉協(xié)調(diào)性、感覺運(yùn)動(dòng)能力和抗焦慮水平的影響，發(fā)現(xiàn)在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中巴馬飲食模式能提高衰老小鼠的后肢直立數(shù)和跨越方格數(shù)，增加衰老小鼠的運(yùn)動(dòng)距離和平均移動(dòng)速率，顯著延長D-半乳糖致衰老小鼠的總運(yùn)動(dòng)時(shí)間及在曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間（P＜0.05），其中模式III組小鼠在曠場(chǎng)中心活動(dòng)時(shí)間較年輕對(duì)照組顯著延長（P＜0.05），表明巴馬特色飲食模式III對(duì)改善D-半乳糖致衰老小鼠自發(fā)運(yùn)動(dòng)能力和抗焦慮水平的效果好于模式I、IV。緊繩實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，巴馬特色飲食模式能夠顯著延長衰老小鼠懸掛時(shí)間（P＜0.05），顯著提高轉(zhuǎn)換分值（P＜0.05），巴馬特色飲食模式II、III、IV組小鼠懸掛時(shí)間均長于年輕對(duì)照組（P＞0.05），模式II、III組小鼠轉(zhuǎn)換分值較年輕對(duì)照組分別顯著提高43.66%和39.33%（P＜0.05），表明巴馬特色飲食對(duì)保護(hù)衰老小鼠的神經(jīng)肌肉協(xié)調(diào)性和感覺運(yùn)動(dòng)能力具有良好的效果，這種現(xiàn)象在目前研究中還鮮見報(bào)道。綜上所述，巴馬特色飲食模式能改善D-半乳糖致衰老小鼠的運(yùn)動(dòng)能力和抗焦慮水平，且巴馬特色飲食模式II、III、IV的效果要優(yōu)于模式I，尤其是巴馬特色飲食模式II、III值得深入探討，以期能夠服務(wù)于普通人群。