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    母乳與山羊乳功能性不飽和脂肪酸及脂肪球微觀結(jié)構(gòu)的比較

    2019-10-30 05:32:22王立娜張宏達李曉東冷友斌鞏燕妮蔣士龍
    食品科學(xué) 2019年19期
    關(guān)鍵詞:泌乳期初乳母乳

    張 宇,王立娜,張宏達,李曉東,*,劉 璐,冷友斌,鞏燕妮,蔣士龍

    (1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,乳品科學(xué)教育部重點實驗室,黑龍江 哈爾濱 150030;2.黑龍江飛鶴乳業(yè)有限公司,黑龍江 哈爾濱 150030;3.黑龍江完達山林海液奶有限公司,黑龍江 牡丹江 157100)

    母乳為嬰兒提供所需的膳食能量、必需營養(yǎng)素以及生理活性分子。母乳的脂質(zhì)占母乳總能量的40%~55%,為新生兒提供了大約一半的能量需求;同時,其也提供了基本的脂肪酸(fatty acid,F(xiàn)A)和脂溶性維生素。功能性FA是特指那些來源于人類膳食油脂、滿足人體營養(yǎng)需求,并對人體一些相應(yīng)缺乏癥和內(nèi)源性疾病有積極防治作用的FA,如花生四烯酸(arachidonic acid,ARA)、亞油酸(linoleic acid,LA)等。功能性FA的組成與含量取決于乳的品種、泌乳階段等[1]。郭紫玥[2]綜合研究了母乳與牛乳、羊乳中3 種主要功能性FA(ARA、二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA))的變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)與牛乳相比,羊乳中這3 種FA水平與母乳更為接近。山羊乳含有人體所需要的多種營養(yǎng)素及生物活性物質(zhì)[3],且脂肪結(jié)構(gòu)與母乳較為接近,營養(yǎng)價值高。解慶剛等[4]研究發(fā)現(xiàn)山羊乳有牛乳和綿羊乳不可比擬的優(yōu)勢,其脂肪更容易被消化;山羊乳中不易消化的棕櫚酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)含量比牛乳低,而易消化的中短鏈FA比牛乳和綿羊乳高。

    乳中脂肪以微小的球狀液滴或乳脂肪球(milk fat globule,MFG)的形式分布,以乳液形式穩(wěn)定存在。Keenan[5]、Mather[6]以及Heid[7]等對優(yōu)質(zhì)母乳MFG的來源和分泌進行了詳細的介紹,認為MFG在乳腺的分泌細胞中形成。甘油三酯(triacylglycerols,TAG)在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)表面上或表面內(nèi)合成,并在細胞質(zhì)中以微脂滴的形式積累;MFG的粒徑、分布與多種因素有關(guān),即使同一種乳的MFG,其粒徑也會有很大差異,與乳的性質(zhì)和加工特性密切相關(guān)[8]。

    目前,對不同泌乳期母乳MFG粒徑和ζ電位的研究較少,對不同泌乳期母乳與山羊乳主要功能性FA及MFG物理結(jié)構(gòu)的差異也鮮有系統(tǒng)性地研究,尤其是對功能性FA中DHA的最佳補充水平還鮮有研究;同時,對MFG物理結(jié)構(gòu)與FA含量之間的相關(guān)性分析也較少。因此,本研究測定不同泌乳期母乳與山羊常乳中主要功能性不飽和FA的相對含量,并比較不同泌乳期母乳與山羊乳MFG物理特性的差異,與FA相對含量進行相關(guān)性分析,深入了解母乳不同泌乳期及山羊乳脂肪結(jié)構(gòu)和主要功能性FA的組成差異,為FA母乳化的研究提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    母乳采集:母乳樣本在吉林省松原市根據(jù)文獻[2]中具體采樣方案進行采集,采集后的樣品于-20 ℃冷凍保存,待檢。山羊乳采集:研究對象為健康的純種奶山羊,在黑龍江哈爾濱地區(qū)由專業(yè)養(yǎng)殖人員根據(jù)文獻[2]中具體采樣方案進行采集,樣品置于-20 ℃的冷凍箱中,待檢。

    甲醇、乙醚、石油醚、乙醇 北京索萊寶科技有限公司;焦性沒食子酸、正己烷、尼羅紅、氯化鈉、氫氧化鉀 天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠。

    1.2 儀器與設(shè)備

    3K15臺式冷凍離心機 德國Sigma公司;PS-60AL超聲波清洗器 深圳市深華泰實業(yè)有限公司;68523氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 美國安捷倫科技有限公司;N100氮吹儀 上海精密儀器儀表有限公司;Mastersize 2000激光散射粒度分析儀、Nano-Z電位儀 英國馬爾文公司;激光共聚焦顯微鏡 德國蔡司公司。

    1.3 方法

    1.3.1 樣品分組

    初乳為1~7 d母乳(n=15),過渡乳為7~14 d母乳(n=15),成熟乳為超過14 d母乳(n=20),山羊乳為常乳(n=20),其中n表示樣品數(shù)。

    1.3.2 乳中脂肪質(zhì)量濃度和FA相對含量的測定

    采用巴布科克法(AOAC 989.04)測定母乳與山羊乳脂肪的質(zhì)量濃度。

    參考Folch等[9]的方法提取乳中的脂肪。參考Kelly[10]、王存芳[11]等的堿催化法對乳脂肪進行前處理,用面積歸一化法定量。

    色譜柱為HP-5MS(質(zhì)量分數(shù)5%苯甲基硅烷)彈性石英毛細管柱(30 m×250 μm,0.25 μm),氦氣流速為0.8 mL/min。起始柱溫為40 ℃,保持2 min;首先以8 ℃/min升到200 ℃;然后以3 ℃/min升到215 ℃;最后以10 ℃/min升到230 ℃,保持7 min;280 ℃后運行2 min。進樣量為10 μL,分流比為30∶1。進樣口溫度260 ℃,檢測器溫度280 ℃。電子轟擊離子源;離子源溫度為230 ℃,掃描范圍為33~450 u,能量為70 eV。用Xcalibur軟件處理數(shù)據(jù),未知化合物與NIST譜庫(包含107 000 種化合物)相匹配,僅報道正反匹配度均大于80的鑒定結(jié)果。

    1.3.3 MFG粒徑、ζ電位測定

    分別量取乳樣10 mL。用Mastersize 2000激光散射粒度分析儀測定MFG的粒徑和分布。MFG在466 nm和633 nm波長處的折光指數(shù)分別為1.460和1.458。顆粒吸收率0.1,遮光度10%~20%。

    分別取乳樣10 μL,用蒸餾水稀釋1 000 倍體積,用Nano-Z Zeta電位儀在25 ℃條件下測定ζ電位。

    1.3.4 MFG微觀結(jié)構(gòu)觀察

    分別取原料乳1 mL,向樣品中加入10 μL的尼羅紅,混合樣品,對乳樣中的中性脂質(zhì)進行標記。將混合樣品室溫下避光放置30~40 min,將標記的樣品與5 g/L瓊脂糖(貯存在45 ℃)等量混合,將15 μL混合物取出至載玻片上,采用He-Ne激光器在488 nm與543 nm波長處激發(fā)尼羅紅熒光探針,使用63×1.4 倍的油鏡物鏡。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

    所有實驗均進行3 次平行測定,結(jié)果以平均值±標準差表示。所得數(shù)據(jù)應(yīng)用Excel、SPSS軟件計算平均值、方差及相關(guān)性,采用單因素方差分析法分析差異顯著性。采用Origin 8.5軟件和Excel軟件進行作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 母乳與山羊乳功能性FA差異分析

    2.1.1 母乳與山羊乳脂肪質(zhì)量濃度

    在嬰兒從出生到斷奶的喂養(yǎng)過程中,母乳中微量和宏量營養(yǎng)素組成都會隨母親的飲食習(xí)慣變化有所波動[12]。在乳的基本化學(xué)成分中,脂肪質(zhì)量濃度的變化幅度最大[13]。母乳中脂肪質(zhì)量濃度隨著泌乳期的延長顯著增加(P<0.05),由初乳時的(26.7±3.6)g/L上升至過渡乳期的(33.7±4.6)g/L,又顯著增加至成熟乳期的(41.0±6.8)g/L。這與Martysiak-Zurowska等[13]的研究結(jié)果一致。山羊乳中脂肪質(zhì)量濃度為(42.1±4.3)g/L,顯著高于母乳初乳和過渡乳(P<0.05),但與成熟乳沒有顯著性差異。王風梅等[14]報道薩能奶山羊乳和荷斯坦牛乳中的脂肪質(zhì)量濃度分別為40.4、35.5 g/L,陸東林等[15]報道山羊乳、牛乳、牦牛乳、綿羊乳、馬乳脂肪相對含量分別為4.5%、3.8%、6.5%、7.2%、1.6%,可以看出,與其他乳相比,牛乳和山羊乳脂肪相對含量與母乳最為接近。

    2.1.2 母乳與山羊乳功能性FA組成分析

    表1 母乳、山羊乳主要功能性FA的相對含量Table 1 Relative contents of major functional fatty acids in breast milk and goat milk%

    母乳中功能性FA主要包括n-9、n-6和n-3多不飽和脂肪酸3 個系列。通過表1可以看出,母乳與山羊乳中主要功能性FA相對含量有很大不同,母乳中富含LA、α-亞麻酸(alpha-linolenic acid,ALA)、ARA、DHA和EPA,這幾種FA對降低嬰兒體內(nèi)膽固醇含量、促進大腦與視力的發(fā)育等方面都具有重要作用,在母乳中的相對含量顯著高于山羊乳。油酸相對含量在母乳3 個泌乳期沒有顯著變化(P>0.05),分別為32.27%、32.12%、30.53%,但是顯著高于山羊乳(20.79%)。LA相對含量在母乳初乳、過渡乳和成熟乳中分別為20.07%、19.76%、21.73%,在山羊乳中為4.43%,差異顯著(P<0.05)。LA可降低嬰兒血液中膽固醇含量,其相對含量是評價FA營養(yǎng)價值的一個重要指標。ARA相對含量在初乳、過渡乳、成熟乳中相對含量分別為0.89%、0.71%、0.66%,在山羊乳中為0.15%,顯著低于母乳(P<0.05)。對國內(nèi)外幾種不同品牌的嬰兒配方奶粉中FA組成的研究發(fā)現(xiàn),嬰幼兒配方奶粉中ARA相對含量在0.02%~0.67%之間[1,16],與母乳比較,其相對含量嚴重不足。ARA是類花生酸的前體[17],是參與調(diào)節(jié)免疫功能和血小板聚集的局部介質(zhì)。所以,在設(shè)計研究山羊乳嬰幼兒配方奶粉配方時要注意ARA的補充。ALA相對含量在母乳成熟乳期最高(1.66%),而山羊乳中相對含量極少,僅為0.05%。對比母乳與山羊乳EPA相對含量發(fā)現(xiàn),母乳中EPA相對含量在初乳期最高,為1.42%,顯著高于山羊乳(0.18%),可達山羊乳的7.8 倍。DHA相對含量在母乳的成熟乳中最低,為0.35%,是山羊乳的2.69 倍,其對于嬰幼兒神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育十分重要[18]。所以,在以山羊乳為基質(zhì)的嬰幼兒配方奶粉中,應(yīng)該強化ALA、EPA及DHA的相對含量。

    2.2 母乳與山羊乳MFG物理特性分析

    2.2.1 粒徑分析

    脂肪球的粒徑是判斷乳濁液穩(wěn)定性的重要指標,脂肪球粒徑越大穩(wěn)定性越低。此外,MFG的粒徑對乳脂的消化吸收及營養(yǎng)價值也有一定的作用[19]。從表2可以看出,母乳不同泌乳期MFG粒徑發(fā)生改變,初乳MFG具有最大的體積平均粒徑((5.63±0.51)μm),過渡乳期最小,為(4.21±0.35)μm,成熟乳期為(4.66±0.23)μm。然而,Rüegg等[20]報道,母乳MFG的體積平均粒徑隨著泌乳期的延長而增大,從初乳的1.74 μm增大到成熟乳中的4.10 μm,與本研究結(jié)果不同,這可能是飲食習(xí)慣、生活方式、人種不同等因素所致。山羊乳體積平均粒徑為(3.63±0.31)μm,比母乳小。文獻[21]報道,山羊乳MFG粒徑比母乳小,范圍在2.57~3.25 μm,與本研究結(jié)果一致。母乳初乳MFG粒徑不大于(4.87±0.34)μm和(9.87±0.31)μm的顆粒體積分數(shù)分別為50%、90%,高于過渡乳、成熟乳及山羊乳。

    MFG粒徑影響乳的熱穩(wěn)定性、起泡特性、膠凝行為和感官知覺[21-25]。山羊乳的MFG粒徑小,MFG不易聚集在一起,可以使乳脂肪穩(wěn)定地分散在乳膠體溶液中,但是也反映出山羊乳脂肪分離難度比母乳大。從物理角度來看,根據(jù)拉普拉斯方程(ΔP=4γ/d,其中:ΔP是曲面兩側(cè)之間存在的壓力差/Pa;γ是界面張力/(N/m);d是顆粒的直徑/μm),在界面張力一定時,d越小ΔP越大,因此MFG在乳加工過程中被破壞的靈敏度取決于其粒徑,對于粒徑較大的MFG而言,其靈敏度會增加。在機械壓力下,山羊乳比母乳MFG具有更高的抵抗變形和聚結(jié)的能力。這可能有助于更好地了解乳制品生產(chǎn)過程中MFG的穩(wěn)定性。

    圖1 不同泌乳期母乳及山羊乳MFG的粒徑分布Fig. 1 Particle size distribution of breast milk fat globules at different lactation stages and goat milk fat globules

    從圖1可以看出,母乳與山羊乳的粒徑均呈正態(tài)分布。母乳不同泌乳期MFG粒徑分布范圍差異明顯。初乳、過渡乳和成熟乳MFG粒徑分布范圍分別為0.63~39.91、0.44~13.46 μm和0.79~18.37 μm。初乳粒徑分布較寬,過渡乳和成熟乳具有較窄的粒徑分布;山羊乳的粒徑分布范圍為0.48~15.88 μm,窄于初乳和成熟乳。Truong等[22]也報道了類似的結(jié)果。母乳初乳和成熟乳都有兩個峰,這意味著這兩個時期的母乳可能含有兩組MFG[26-27]。在乳中不同粒徑的MFG具有不同的化學(xué)成分,特別是Argov等[27]報道的一些亞微米小球,具有新的代謝和營養(yǎng)功能。不同哺乳階段母乳MFG的粒徑及分布不一致可能與各階段嬰兒生長的特定需求有關(guān)。

    2.2.2 ζ電位分析

    ζ電位可以反映體系中顆粒的帶電性和顆粒之間相互作用的強弱,是反映MFG穩(wěn)定性的重要表征之一,ζ電位(正或負)越高,體系越穩(wěn)定。自然狀態(tài)下母乳MFG表面呈負電勢,母乳表面電位在初乳期最低((-5.72±0.21)mV),過渡乳和成熟乳ζ電位分別為(-6.53±0.27)、(-7.76±0.23)mV。隨著泌乳時間的延長,ζ電位顯著增加(P<0.05)。山羊乳ζ電位為(-13.69±0.27)mV,顯著高于母乳3 個泌乳期(P<0.05)。不同哺乳期或來自不同物種MFG的ζ電位差異很大程度上歸因于MFG膜中極性脂質(zhì)磷脂、蛋白質(zhì)和礦物質(zhì)等含量的不同[28]。

    2.3 母乳與山羊乳MFG的微觀結(jié)構(gòu)

    圖2 尼羅紅染色觀察不同泌乳期母乳及山羊乳MFG中甘油三酯的微觀結(jié)構(gòu)Fig. 2 Microstructure of triacylglycerols in human colostrum,transitional, mature milk and goat MFG stained with a Nile Red fluorescent probe

    由圖2可以看出,母乳與山羊乳MFG均為球狀,形態(tài)完整,以液滴的形式分散于乳中,紅色部分為尼羅紅熒光探針染色后呈現(xiàn)的MFG結(jié)構(gòu),在相同倍數(shù)油鏡的觀察下,母乳不同泌乳期及山羊乳MFG的密度和粒徑不同,每毫升原料乳中,山羊乳的MFG顆粒數(shù)較多,可以說明山羊乳MFG較小,而母乳初乳MFG體積大于過渡乳和成熟乳。由于樣品乳沒有經(jīng)過高壓均質(zhì)等處理,因此可以看到MFG粒徑不均一,小的MFG發(fā)生了聚集,大的MFG周圍吸附有小MFG。此外,尼羅紅可通過MFG膜染色小MFG核心中的TAG,表明MFG膜具有一定的滲透性,可以允許一些分子通過。因此,如果小MFG的結(jié)構(gòu)沒有受到機械或熱損傷,TAG應(yīng)完全位于脂肪球的核心。

    2.4 母乳與山羊乳各指標相關(guān)性分析

    如表3所示,乳中MFG的ζ電位與脂肪質(zhì)量濃度呈正相關(guān)。隨著泌乳期的延長,脂肪質(zhì)量濃度顯著增加,MFG表面電位也顯著升高。來自不同哺乳期或來自不同物種MFG的ζ電位差異很大程度上歸因于MFG膜中極性脂質(zhì)、蛋白質(zhì)及存在于水性環(huán)境中礦物質(zhì)含量的不同[28],同時,與乳中脂肪質(zhì)量濃度也有一定的相關(guān)性。乳中MFG粒徑和脂肪質(zhì)量濃度也呈正相關(guān),其中山羊乳MFG體積平均粒徑與脂肪質(zhì)量濃度間相關(guān)性系數(shù)可達0.887(P<0.05)。Ménard等[29]研究發(fā)現(xiàn)水牛和荷斯坦牛乳MFG粒徑和脂肪含量也存在相關(guān)性(線性相關(guān))。不同乳源MFG體積平均粒徑與LA相對含量都呈正相關(guān),但相關(guān)性不完全一致,成熟乳中其相關(guān)系數(shù)為0.945,相關(guān)性極顯著(P<0.01),但過渡乳和山羊乳中相關(guān)性不顯著。不同泌乳階段大、小MFG的組成成分不同,MFG的結(jié)構(gòu)、組成、泌乳階段、FA相對含量、脂肪質(zhì)量濃度之間的相關(guān)性也并不完全一致,這可能是個體差異導(dǎo)致的,F(xiàn)A組成與脂肪結(jié)構(gòu)之間的相互作用還有待進一步研究。

    表3 母乳與山羊乳中主要功能性FA相對含量、MFG粒徑、ζ電位及脂肪質(zhì)量濃度之間的相關(guān)性Table 3 Correlation between relative contents of major functional fatty acids and average particle size of MFG, zeta-potential and fat content in breast milk and goat milk

    3 結(jié) 論

    本研究結(jié)果顯示,母乳與山羊乳中功能性FA及MFG物理特性存在明顯差異,母乳初乳、過渡乳、成熟乳和山羊乳中脂肪質(zhì)量濃度分別為(26.7±3.6)、(33.7±4.6)、(41.0±6.8)、(42.1±4.3)g/L。母乳中主要功能性FA LA、ALA、ARA、EPA和DHA相對含量顯著高于山羊乳(P<0.05)。其中ALA相對含量在母乳成熟期達到最高,為1.66%,而山羊乳中僅為0.05%。母乳與山羊乳粒徑分布均為正態(tài)分布,并且觀測到完整的MFG結(jié)構(gòu)。母乳初乳MFG具有最大的體積平均粒徑((5.63±0.51)μm)和最低的ζ電位((-5.72±0.21)mV)。山羊乳MFG體積平均粒徑((3.63±0.31)μm)小于母乳,而ζ電位((-13.69±0.31)mV)顯著高于母乳(P<0.05),F(xiàn)A相對含量、MFG粒徑、ζ電位及脂肪相對含量之間有一定的相關(guān)性。因此,在以山羊乳為基質(zhì)的嬰幼兒配方奶粉中應(yīng)該注意主要功能性FA相對含量以及MFG的結(jié)構(gòu)調(diào)整,尤其應(yīng)該注意增加ARA、EPA、DHA的相對含量。

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