海州常山莖的化學(xué)成分研究

李林珍，魏 茜，劉 璐，李勇軍，梁敬鈺

(1貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴陽 550025；2中國藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室，南京 210009；3貴州醫(yī)科大學(xué)民族藥中藥開發(fā)應(yīng)用教育部研究工程中心，貴陽 550004；4貴州醫(yī)科大學(xué)大學(xué)城醫(yī)院，貴陽 550025)

海州常山為大青屬ClerodendrumLinn.植物，落葉灌木或小喬木，又名臭梧桐、泡火桐、后庭花、香楸、地梧桐、矮桐子等。分布于我國華北、華東、中南、西南等地，朝鮮、日本以及菲律賓北部也有分布[1]。其味苦、微辛，性平，具有祛風(fēng)除濕、平肝降壓、解毒殺蟲的功效。主治風(fēng)濕痹痛，半身不遂，高血壓病，偏頭痛，瘧疾，痢疾等[2]。目前，從海州常山中分離得到的化學(xué)成分類型主要有苯丙素類[3-6]、黃酮類[7]、二萜[8-9]、三萜[10]和甾體化合物[11]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)海州常山具有抗氧化[3]、抗HIV病毒[4]、抗哮喘[5]、降壓[6]、細(xì)胞毒[9,11]及抗炎[12]等多種生物活性。海州常山在民間應(yīng)用廣泛，根、莖、葉、花、果皆可入藥，且可治療多種疾病，但目前研究的部位多以葉、根居多，莖部位研究較少。為了更好地開發(fā)海州常山的藥用價值，闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，筆者對海州常山莖化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。繼筆者從海州常山莖中分離得到二萜[13]、蒽醌和木脂素[14]后，本實驗報道分離并鑒定13個化合物，包括4個三萜：木栓酮(friedelin，1)，白樺脂酸(betulinic acid，2)，蒲公英萜醇(taraxerol，3)和3-羥基-30-去甲基-20-酮基-28-羽扇豆酸(3-hydroxy-30-nor-20-oxo-28-lupanoic acid,platanic acid，4)；2個黃酮：金合歡素(acacetin，5)和5,7-二羥基3′,4′-二甲氧基黃酮(5,7-dihydroxy 3′,4′-dimethoxyflavone，6)；4個甾體：β-谷甾醇(β-sitosterol，7)，豆甾醇(stigmasterol，8)，胡蘿卜苷(daucosterol，9)和豆甾醇-3-O-葡萄糖苷(stigmasterol-3-O-glucopyranoside，10)；3個其他類型化合物：異香草醛(isovanillin，11)，鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate，12)和丁香醛(syringaldehyde，13)。其中化合物4，6，11～13均為首次從該屬植物中分離得到，化合物4，6，10～13為首次從該物種中分離得到。

Figure1 Structures of compounds1-13from the stems ofClerodendrumtrichotomumThunb.

1 材 料

X-4型數(shù)字顯示雙目顯微熔點測定儀(溫度未校正，北京泰克儀器有限公司制造)；Bruker Avance-300和Bruker Avance-500核磁共振儀；Agilent HP-100型質(zhì)譜儀；Sephadex LH-20為Pharmacia產(chǎn)品；薄層色譜、柱色譜用硅膠均為青島海洋化工集團(tuán)產(chǎn)品；其余試劑均為分析純試劑。

海州常山藥材2012年11月采自江蘇省南京市，經(jīng)江蘇省中國科學(xué)院植物研究所姚淦研究員鑒定為馬鞭草科大青屬植物海州常山ClerodendrontrichotomumThunb.的干燥莖，憑證標(biāo)本(標(biāo)本編號No.CT20121116)保存在中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室。

2 提取與分離

海州常山干燥莖15 kg，鍘細(xì)，粉碎，用85%的乙醇回流提取3次，濃縮至無醇味后加適量水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯部位70 g經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯(60∶1→0∶100)梯度洗脫，減壓蒸餾，得到5個組分f1～f5。將f1組分用硅膠柱色譜梯度洗脫(石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng))，經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜、ODS柱色譜、凝膠柱色譜、制備薄層色譜、重結(jié)晶等多種分離純化手段，從中分離得到化合物1(266.6 mg)，化合物2(50.6 mg)，化合物3(56.7 mg)，化合物7(28.2 mg)，化合物8(20.2 mg)，化合物11(48.7 mg)和化合物12(221.9 mg)。將f3組分經(jīng)硅膠柱色譜梯度洗脫(二氯甲烷-甲醇系統(tǒng))，經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜、ODS柱色譜、凝膠柱色譜、制備薄層色譜、重結(jié)晶等多種分離純化手段，從中分離得到化合物4(11.3 mg),化合物5(6.9 mg)，化合物6(3.4 mg)和化合物13(8.4 mg)。將f5組分經(jīng)硅膠柱色譜梯度洗脫(二氯甲烷-甲醇系統(tǒng))，用以上分離方法得到化合物9(548.2 mg)和化合物10(516.2 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色針狀結(jié)晶，溶于二氯甲烷、三氯甲烷。Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性。EI-MSm/z:426[M]+，分子式C30H50O。1H NMR(CDCl3,300 MHz)δ：1.20(3H,s,28-H)，1.07(3H,s,27-H)，1.03(3H,s,26-H)，1.02(3H,s,30-H)，0.97(3H,s,29-H)，0.90(3H,d,J=6.7 Hz,23-H)，0.89(3H,s,25-H)和0.74(3H,s,24-H)。13C NMR(CDCl3,75 MHz)δ:22.3(C-1)，41.5(C-2)，213.1(C-3)，58.2(C-4)，42.1(C-5)，41.3(C-6)，18.2(C-7)，53.1(C-8)，37.4(C-9),59.5(C-10)，35.6(C-11)，30.5(C-12)，39.7(C-13)，38.3(C-14)，32.4(C-15)，36.0(C-16)，30.0(C-17)，42.8(C-18)，35.3(C-19)，28.2(C-20)，32.8(C-21)，39.2(C-22)，6.8(C-23)，14.6(C-24)，17.9(C-25)，20.2(C-26)，18.6(C-27)，32.1(C-28)，35.0(C-29)，31.8(C-30)。對照波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報道一致，鑒定該化合物為木栓酮(friedelin)。

化合物2白色針狀結(jié)晶，易溶于二氯甲烷、三氯甲烷等。Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性。ESI-MSm/z:455[M-H]-，分子式C30H48O3。1H NMR(CDCl3,300 MHz)δ:4.74(1H,br.s,H-29a)，4.61(1H,br.s,H-29b)，3.19(1H,m,H-3)，3.00(1H,m,H-19)，1.69(3H,s,H-30)，0.98(3H,s,H-27)，0.97(3H,s,H-23)，0.94(3H,s,H-25)，0.83(3H,s,H-26)，0.76(3H,s,H-24)。13C NMR(CDCl3,75 MHz)δ：38.7(C-1)，27.4(C-2)，79.0(C-3)，38.9(C-4)，55.4(C-5)，18.3(C-6)，34.4(C-7)，40.7(C-8)，50.6(C-9)，37.2(C-10)，20.9(C-11)，25.5(C-12)，38.4(C-13)，42.5(C-14)，30.6(C-15)，32.2(C-16)，56.3(C-17)，46.9(C-18)，49.3(C-19)，150.4(C-20)，29.7(C-21)，37.0(C-22)，28.0(C-23)，15.3(C-24)，16.0(C-25)，16.1(C-26)，14.7(C-27)，177.6(C-28)，109.7(C-29)，19.4(C-30)。對照波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報道一致，鑒定該化合物為白樺脂酸(betulinic acid)。

化合物3白色粉末，易溶于二氯甲烷、三氯甲烷等。Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性。1H NMR(CDCl3,300 MHz)δ:5.53(1H,dd,J=8.2,3.3 Hz,15-H)，3.19(1H,dd,J=10.2,5.0 Hz,3-H)，1.09(3H,s,H-27)，0.98(3H,s,H-23)，0.95(3H,s,H-25)，0.93(3H,s,H-26)，0.91(3H,s,H-29)，0.91(3H,s,H-30)，0.82(3H,s,H-28)，0.80(3H,s,H-24)。13C NMR(CDCl3,75 MHz)δ：37.8(C-1)，27.2(C-2)，79.1(C-3)，39.0(C-4)，55.5(C-5)，18.8(C-6)，35.1(C-7)，38.8(C-8)，48.8(C-9)，38.0(C-10)，17.5(C-11)，35.8(C-12)，37.7(C-13)，158.1(C-14)，116.9(C-15)，36.7(C-16)，38.0(C-17)，49.3(C-18)，41.3(C-19)，28.8(C-20)，33.7(C-21)，33.1(C-22)，28.0(C-23)，15.4(C-24)，15.4(C-25)，29.9(C-26)，25.9(C-27)，29.8(C-28)，33.3(C-29)，21.3(C-30)。對照波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報道一致，鑒定該化合物為蒲公英萜醇(taraxerol)。

化合物4白色粒狀結(jié)晶，易溶于二氯甲烷、三氯甲烷等。Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性。ESI-MSm/z:457[M-H]-，分子式C29H46O4。1H NMR(CDCl3,300 MHz)δ:2.19(3H,s,H-23)，1.02(3H,s,H-27)，0.98(3H,s,H-24)，0.93(3H,s,H-26)，0.84(3H,s,H-25)，0.77(3H,s,H-23)。13C NMR(CDCl3,75 MHz)δ：38.7(C-1)，27.3(C-2)，78.9(C-3)，38.8(C-4)，55.3(C-5)，18.2(C-6)，34.2(C-7)，40.6(C-8)，50.3(C-9)，37.2(C-10)，20.8(C-11)，27.2(C-12)，37.5(C-13)，42.2(C-14)，28.3(C-15)，31.5(C-16)，36.2(C-17)，49.2(C-18)，51.2(C-19)，212.2(C-20)，29.7(C-21)，36.7(C-22)，15.3(C-23)，28.0(C-24)，16.1(C-25)，16.0(C-26)，14.7(C-27)，181.2(C-28)，30.1(C-29)。對照波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18-19]報道一致，鑒定該化合物為3-羥基-30-去甲基-20-酮基-28-羽扇豆酸(3-hydroxy-30-nor-20-oxo-28-lupanoic acid,platanic acid)。

化合物5淺黃色粉末，不溶于二氯甲烷和甲醇，易溶于DMSO等。與FeCl3溶液、AlCl3呈陽性反應(yīng)。ESI-MSm/z:313[M-H]-，分子式C17H14O6。1H NMR(DMSO-d6,500 MHz)δ:12.92(1H,s,5-OH)，10.81(1H,s,7-OH)，7.68(1H,dd,J=8.5,2.0 Hz,H-6′)，7.57(1H,d,J=2.1 Hz,H-2′)，7.13(1H,d,J=8.6 Hz,H-5′)，6.96(1H,s,H-3)，6.53(1H,d,J=2.0 Hz,H-8)，6.21(1H,d,J=2.0 Hz,H-6)，3.88(3H,s,3′-OCH3)，3.86(3H,s,4′-OCH3)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報道一致，鑒定該化合物為5,7-二羥基3′,4′-二甲氧基黃酮(5,7-dihydroxy 3′,4′-dimethoxyflavone)。

化合物6淺黃色針狀結(jié)晶，不溶于二氯甲烷和甲醇，易溶于DMSO等。與FeCl3溶液、AlCl3呈陽性反應(yīng)。ESI-MSm/z:283[M-H]-，分子式C16H12O5。1H NMR(DMSO-d6,300 MHz)δ:12.92(1H,s,5-OH)，10.81(1H,s,7-OH)，8.03(2H,d,J=8.3 Hz,H-2′,6′)，7.10(2H,d,J=8.3 Hz,H-3′,5′)，6.86(1H,s,H-3)，6.50(1H,s,H-8)，6.20(1H,s,H-6)，3.86(3H,s,4′-OCH3)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報道一致，鑒定該化合物為金合歡素(acacetin)。

化合物7白色針狀結(jié)晶，易溶于二氯甲烷、三氯甲烷等。ESI-MSm/z:413[M-H]-，分子式C29H50O。Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性，TLC與β-谷甾醇對照品一致，且混合熔點不下降，故該化合物鑒定為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物8白色針晶，易溶于二氯甲烷、三氯甲烷等。EI-MSm/z:412[M]+，分子式C29H48O。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ:5.36(1H,d,J=5.1 Hz,H-6)，5.15(1H,dd,J=15.7,6.0 Hz,H-22)，5.06(1H,dd,J=15.7,5.8 Hz,H-23)，3.53(1H,t,J=4.5 Hz,H-3)，0.94(3H,d,J=6.8 Hz,21-CH3)，0.86(3H,t,J=7.2 Hz,29-CH3)，0.84(3H,d,J=7.0 Hz,26-CH3)，0.83(3H,d,J=7.0 Hz,27-CH3)，0.81(3H,s,19-CH3)，0.69(3H,s,18-CH3)。13C NMR(75 MHz,CDCl3)δ:31.2(C-1)，31.7(C-2)，71.8(C-3)，39.7(C-4)，140.8(C-5)，121.7(C-6)，31.7(C-7)，31.9(C-8)，50.2(C-9)，37.3(C-10)，21.5(C-11)，39.8(C-12)，42.3(C-13)，55.9(C-14)，24.3(C-15)，29.4(C-16)，56.9(C-17)，12.3(C-18)，19.8(C-19)，40.2(C-20)，21.3(C-21)，137.2(C-22)，130.1(C-23)，52.0(C-24)，31.9(C-25)，18.6(C-26)，21.2(C-27)，25.7(C-28)，12.4(C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道[22]基本一致。且樣品與對照品混合測熔點不下降，故鑒定該化合物為豆甾醇(stigmasterol)。

化合物9白色粉末，不溶于二氯甲烷、三氯甲烷和甲醇等，易溶于吡啶。Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性。與胡蘿卜苷對照品共薄層對照，Rf及顯色行為均一致，且與對照品混合后熔點不下降，故鑒定該化合物為胡蘿卜苷(daucosterol)。

化合物10白色粉末，不溶于二氯甲烷、三氯甲烷和甲醇等，易溶于吡啶。Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性。ESI-MSm/z:575[M+H]+，分子式C35H58O6。1H NMR(300 MHz,C5D5N)δ:5.32(1H,s,H-6)，5.16(1H,d,J=8.4 Hz,H-22)，4.97(1H,d,J=8.4 Hz,H-23)，3.61(1H,m,H-3)，1.03(3H,d,J=6.5 Hz,21-CH3)，1.01(3H,t,J=7.1 Hz,29-CH3)，0.94(3H,d,J=7.0 Hz,26-CH3)，0.91(3H,d,J=6.9 Hz,27-CH3)，0.75(3H,s,19-CH3)，0.56(3H,s,18-CH3)。13C NMR(75 MHz,C5D5N)δ:39.4(C-1)，29.3(C-2)，78.6(C-3)，39.3(C-4)，140.9(C-5)，121.9(C-6)，31.2(C-7)，31.0(C-8)，49.8(C-9)，36.9(C-10)，22.4(C-11)，40.0(C-12)，42.5(C-13)，56.3(C-14)，24.6(C-15)，29.1(C-16)，56.0(C-17)，11.6(C-18)，19.4(C-19)，40.4(C-20)，23.6(C-21)，137.6(C-22)，130.3(C-23)，50.4(C-24)，32.0(C-25)，20.8(C-26)，19.3(C-27)，25.5(C-28)，11.5(C-29)，102.6(C-1′)，75.3(C-2′)，78.6(C-3′)，71.7(C-4′)，78.1(C-5′),62.9(C-6′)。與文獻(xiàn)[23]數(shù)據(jù)基本一致，確定為豆甾醇-3-O-葡萄糖苷。

化合物11黃色膠狀固體，易溶于二氯甲烷、三氯甲烷等。三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應(yīng)呈陽性。ESI-MSm/z:151[M-H]-，分子式C8H8O3。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ:9.80(1H,s,1-CHO)，6.49(1H,br.s,3-OH)，7.42(1H,br.s,2-H)，7.40(1H,br.s,6-H)，7.02(1H,d,J=8.5 Hz,5-H)，3.93(3H,s,4-OCH3)。13C NMR(CDCl3,75 MHz)δ：129.8(C-1)，108.9(C-2)，147.2(C-3)，151.8(C-4)，114.4(C-5)，127.5(C-6)，190.9(1-CHO)，56.0(4-OCH3)。對照波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]報道一致，鑒定該化合物為異香草醛(isovanillin)。

化合物12黃色油狀液體，易溶于二氯甲烷、三氯甲烷等。ESI-MSm/z:301[M+Na]+，分子式C16H22O4。1H NMR(CDCl3,300 MHz)δ:7.71(2H,dd,J=5.6,3.4 Hz,H-3和H-6)，7.51(2H,m,H-4和H-5)，4.30(4H,t,J=6.7 Hz,H2-8和H2-8′)，1.72(4H,m,H2-9和H2-9′)，1.43(4H,m,H2-10和H2-10′)，0.95(6H,t,J=7.4 Hz,H3-11和H3-11′)。13C NMR(CDCl3,75 MHz)δ：130.8(C-1,2)，128.8(C-3,6)，132.3(C-4,5)，167.6(C-7,7′)，65.5(C-8,8′)，30.5(C-9,9′)，19.1(C-10,10′)，13.6(C-11,11′)。對照波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]報道一致，鑒定該化合物為鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate)。

化合物13棕黃色粉末，易溶于二氯甲烷、三氯甲烷，不溶于甲醇。ESI-MSm/z:183[M+H]+，分子式C9H10O4。1H NMR(CDCl3,300 MHz)δ:9.82(1H,s,1-CHO)，7.15(2H,s,H-2,6)，6.09(1H,s,4-OH)，3.97(6H,s,H-3,5-OCH3)。13C NMR(CDCl3,75 MHz)δ：128.4(C-1)，106.8(C-2,6)，147.4(C-3,5)，140.9(C-4)，190.6(1-CHO)，56.5(C-3,5-OCH3)。對照波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]報道一致，鑒定該化合物為丁香醛(syringaldehyde)。