家禽養(yǎng)殖場(chǎng)常用消毒劑及消毒效果評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展

董雯雯 李峰 張世棟 王春玲 艾洪新 李桂明

摘? 要：規(guī)模化養(yǎng)禽場(chǎng)生物安全是保障養(yǎng)禽業(yè)良性循環(huán)、提高養(yǎng)殖效益、實(shí)現(xiàn)優(yōu)質(zhì)、高效、可持續(xù)發(fā)展的基礎(chǔ)。消毒是有效防控疫病的手段之一。本文綜述了消毒劑的種類、消毒原理、消毒劑的選擇及消毒效果評(píng)價(jià)方法等，以期為家禽養(yǎng)殖場(chǎng)消毒劑的選擇與效果評(píng)價(jià)提供一定參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：消毒劑;消毒原理;消毒效果;家禽

中圖分類號(hào)：S859.79+9.1? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ?文章編號(hào)：1673-1085（2019）09-0053-04

近年來(lái)，集約化養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展迅速，然而生物安全體系及養(yǎng)殖環(huán)境的防控并未得到同步提升，疫病防控一旦出現(xiàn)漏洞，病原微生物便會(huì)大肆繁殖，繼而導(dǎo)致各種家禽疾病的發(fā)生，嚴(yán)重威脅我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的生產(chǎn)與發(fā)展。消毒是消除傳染源、切斷疫病傳播途徑的重要保障。因此，對(duì)養(yǎng)禽場(chǎng)進(jìn)行定期有效地消毒，不但可有效預(yù)防家禽疫病，也可以減少人畜共患疫病的發(fā)生與傳播。篩選并配伍有效消毒劑，選取適當(dāng)?shù)南拘Чu(píng)價(jià)方法，將會(huì)給養(yǎng)殖獲利提供一定保障。本文綜述家禽養(yǎng)殖場(chǎng)消毒劑種類、消毒劑選擇及消毒效果評(píng)價(jià)方法，以期為家禽養(yǎng)殖場(chǎng)消毒劑的選擇與效果評(píng)價(jià)提供一定參考依據(jù)。

1? 常見消毒劑種類

禽類對(duì)于各種病原微生物具有較高的易感性，養(yǎng)殖環(huán)境中存在的病原微生物達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，可引起疫病的發(fā)生與流行，嚴(yán)重的可能導(dǎo)致家禽的大批死亡，帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。消毒是控制規(guī)模化養(yǎng)禽場(chǎng)疫病爆發(fā)的重要措施，然而，不規(guī)范的使用消毒劑不但不能有效控制病原微生物，還會(huì)對(duì)畜禽造成一定危害。因此了解養(yǎng)殖場(chǎng)消毒劑的種類、消毒對(duì)象及消毒方式等，可以有效提高養(yǎng)殖場(chǎng)生物安全指數(shù)?，F(xiàn)將養(yǎng)殖場(chǎng)常見消毒劑的種類、用途、使用方式、消毒原理及優(yōu)缺點(diǎn)等進(jìn)行總結(jié)，見表1。

2? 消毒劑的選擇

家禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中最主要的病原微生物為細(xì)菌和病毒。不同的病原微生物對(duì)消毒劑的敏感性有所差異。消毒劑對(duì)細(xì)菌和病毒也具有一定選擇性，其殺菌、殺病毒能力也參差不齊。因此，針對(duì)不同病原微生物的特點(diǎn)選擇合適的消毒劑，是消毒成敗的關(guān)鍵。雖然消毒劑的種類繁多，但目前尚未存在一種消毒劑具有殺菌廣譜、快速、性能穩(wěn)定、易溶于水、無(wú)腐蝕性、無(wú)臭無(wú)色、刺激性小且價(jià)格低廉、不受溫度及物理化學(xué)因素影響等優(yōu)點(diǎn)[1]。因此，在疫病防控消毒時(shí)，需要針對(duì)被消毒病原微生物的性質(zhì)、消毒劑的特性及需要達(dá)到的消毒要求選擇消毒劑。

革蘭氏陰性菌（如大腸桿菌和沙門氏菌）可產(chǎn)生對(duì)消毒劑的抗藥性的耐藥質(zhì)粒，因此，革蘭氏陽(yáng)性菌通常比革蘭氏陰性菌對(duì)消毒劑更敏感[2]。針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌多選用季銨鹽類消毒劑，此類消毒劑具有親脂性，而革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁含類脂高于革蘭氏陰性菌，因此革蘭氏陽(yáng)性菌更容易被該類消毒劑滅活[3];對(duì)于難以滅活的細(xì)菌芽孢，多選用戊二醛、環(huán)氧乙烷、氯制劑和碘伏等便可以達(dá)到較好的消毒效果。病毒種類繁多，突變速度快，消毒劑對(duì)不同種類的病毒消毒效果差異較大：對(duì)于有囊膜的病毒大多數(shù)消毒劑都能將其殺滅，然而對(duì)于無(wú)囊膜的病毒，中效消毒劑（如酚類）和低效消毒劑（如季銨鹽類）的殺滅效果較差，因此，多選用高效消毒劑（堿類、醛類、過(guò)氧化物類、氯制劑和碘伏等）才能達(dá)到有效消毒的效果。

3? 消毒效果評(píng)價(jià)方法

具有良好特性的消毒劑可有效控制禽舍環(huán)境衛(wèi)生、改善禽體健康、增加禽業(yè)收益等。因此，對(duì)消毒劑的消毒效果評(píng)價(jià)也成為消毒工作中的一項(xiàng)重要環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的消毒效果評(píng)價(jià)方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，影響禽舍消毒完畢后后續(xù)工作的開展。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，多種快速高效的檢測(cè)技術(shù)被開發(fā)。

3.1? 消毒劑對(duì)細(xì)菌消毒效果評(píng)價(jià)? 空氣沉降菌法是一種方便便捷的細(xì)菌消毒檢測(cè)方法。根據(jù)北京市動(dòng)物養(yǎng)殖消毒效果評(píng)價(jià)規(guī)范地方標(biāo)準(zhǔn)顯示，采用空氣沉降菌法檢測(cè)消毒后禽舍的細(xì)菌數(shù)量，利用5點(diǎn)法布置測(cè)點(diǎn)。該標(biāo)準(zhǔn)顯示，對(duì)有動(dòng)物舍內(nèi)空氣、舍內(nèi)物體、廠區(qū)道路的平均殺菌率在90%以上為優(yōu)，80%～84%為合格;對(duì)無(wú)動(dòng)物舍內(nèi)空氣、舍內(nèi)物體、廠區(qū)道路的平均殺菌率90%以上為合格[4]。

懸液定量殺菌試驗(yàn)可用于評(píng)價(jià)消毒劑的殺菌能力，該方法是將指示菌懸液與消毒劑溶液進(jìn)行定量混合，作用一段時(shí)間后，使用中和劑去除殘留的消毒劑，隨后，定量接種于平皿或傾注培養(yǎng)基內(nèi)，培育一段時(shí)間后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。陳小強(qiáng)利用有限稀釋法測(cè)定5種消毒劑對(duì)參考菌株（大腸桿菌8099）和雞舍中分離的大腸桿菌的最小殺菌濃度（MBC）;懸液定量殺菌試驗(yàn)測(cè)定5種消毒劑對(duì)參考菌株的殺滅效果;采用自然沉降法測(cè)定雞舍空氣中細(xì)菌含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物粉的MBC值最小，殺菌作用最強(qiáng);5種消毒劑與菌懸液分別作用1、5、10min，過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)大腸桿菌的殺滅效果最佳。雞舍現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)表明，用過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物粉對(duì)雞舍及用具具有顯著的消毒效果，消毒后試驗(yàn)組雞的死亡率比對(duì)照雞群平均下降了2.86%[5]。

Sheridan等人利用熒光定量PCR檢測(cè)分析經(jīng)熱處理和醇類消毒劑致死大腸桿菌細(xì)胞的mRNA，研究結(jié)果顯示，經(jīng)熱處理的大腸桿菌細(xì)胞中目的mRNA片段在2～16h內(nèi)不會(huì)被檢測(cè)到，醇類消毒劑處理的大腸桿菌細(xì)胞中目的mRNA片段在16h后可被檢測(cè)[6]。筆者認(rèn)為mRNA在死細(xì)胞中存在時(shí)間與細(xì)菌滅活方式以及死后的保存條件有關(guān)，因此在用熒光定量PCR檢測(cè)前對(duì)菌體標(biāo)本mRNA的時(shí)間選擇非常重要。Birch比較分析PCR和熒光定量PCR方法評(píng)價(jià)細(xì)胞活性，發(fā)現(xiàn)將大腸桿菌O157培養(yǎng)后進(jìn)行熱滅活處理，用肉湯培養(yǎng)和平板培養(yǎng)均無(wú)法檢測(cè)到活菌，然而對(duì)不同存放時(shí)間的死亡菌體標(biāo)本利用分子生物學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)30h后仍然能夠檢測(cè)到目標(biāo)細(xì)菌特殊核酸序列[7]。

不同溫度條件下對(duì)消毒劑的消毒效果評(píng)價(jià)結(jié)果會(huì)有一定差異。朱大蘭研究不同溫度條件下過(guò)氧化氫泡沫消毒劑對(duì)殺滅枯草桿菌黑色變種芽孢的效果影響試驗(yàn)，結(jié)果表明，在20℃時(shí)，作用30、40、50、60min，對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅率分別為81.56%、97.62%、98.12%、99.89%;在30℃時(shí)，作用30、40、50、60min，對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅率分別為99.00%、99.99%、99.99%、100%;在40℃時(shí)，作用10、20、30min，對(duì)枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅的殺滅率分別達(dá)到97.60%、99.99%、99.99%。本研究結(jié)果表明，有些消毒劑隨著溫度升高，可縮短殺滅病原微生物的時(shí)間，同一時(shí)間點(diǎn)的殺滅率也相應(yīng)增強(qiáng)[8]。

3.2? 消毒劑滅活病毒效果評(píng)價(jià)? 細(xì)胞培養(yǎng)評(píng)價(jià)方法是將病毒利用體外培養(yǎng)的方式獲取具有活性的病毒，是一種較為傳統(tǒng)的評(píng)價(jià)病毒消毒效果的手段。目前細(xì)胞培養(yǎng)評(píng)價(jià)方法的研究日益增多[9-10]，但是該方法耗時(shí)較長(zhǎng)，靈敏度較低。

核酸為病毒的重要組成成分，利用分子生物學(xué)方法檢測(cè)病毒核酸的存在已經(jīng)成為較為常用的手段之一，該方法檢測(cè)快速，但對(duì)于檢測(cè)環(huán)境要求較高，且容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。Suarez等人利用定量PCR檢測(cè)多種消毒劑對(duì)禽流感病毒消毒效果，發(fā)現(xiàn)經(jīng)酚類和季銨鹽類消毒劑消毒后，病毒分離結(jié)果提示樣本中未檢測(cè)到禽流感病毒的存在，但經(jīng)實(shí)時(shí)定量PCR仍能檢測(cè)到病毒核酸，猜測(cè)這可能是因?yàn)榇祟愊緞┑南緳C(jī)制是破壞病毒外殼，而不直接破壞病毒的遺傳物質(zhì)導(dǎo)致，此外過(guò)氧化物類消毒劑和含氯消毒劑在合適濃度下能夠破壞禽流感病毒的核酸，熒光定量PCR無(wú)法檢測(cè)到病毒核酸[11]。因此，對(duì)于病毒消毒效果評(píng)價(jià)中，需要熟悉所選消毒劑的消毒機(jī)理，從而針對(duì)性的選擇相適應(yīng)的評(píng)價(jià)手段。岑斌等人，采用RT-PCR法對(duì)203份活禽流通外環(huán)境標(biāo)本進(jìn)行H7N9病毒核酸檢測(cè)，以大腸菌群和H7N9病毒核酸檢測(cè)為輔助評(píng)判依據(jù)。結(jié)果203份外環(huán)境標(biāo)本甲型H7N9流感病毒核酸陽(yáng)性率為30.0%，其中陽(yáng)性病例相關(guān)家禽圈養(yǎng)點(diǎn)陽(yáng)性率最高，為61.1%，城鄉(xiāng)活禽市場(chǎng)陽(yáng)性率次之，為51.9%，消毒效果評(píng)價(jià)以消毒前后自然菌的殺滅率≥90.0%為主要評(píng)判依據(jù)，結(jié)合清潔效果評(píng)價(jià)、大腸菌群殺滅率和H7N9病毒核酸陰轉(zhuǎn)率為輔助評(píng)判依據(jù)的綜合評(píng)定法科學(xué)且實(shí)用[12]。

反轉(zhuǎn)錄巢式PCR是在反轉(zhuǎn)錄PCR的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，在通過(guò)反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA的基礎(chǔ)上，對(duì)目的基因進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增。與簡(jiǎn)單的反轉(zhuǎn)錄PCR一樣，該方法是用于檢測(cè)某種RNA是否被表達(dá)，或者比較其相對(duì)表達(dá)水平，但是特異性更高、可靠性更強(qiáng)。于洋選擇H9亞型禽流感病毒HA基因?yàn)闄z測(cè)靶標(biāo)，通過(guò)設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性引物，建立了反轉(zhuǎn)錄巢式PCR檢測(cè)方法，添加H9亞型禽流感病毒至土壤進(jìn)行病毒存活時(shí)間的檢測(cè)試驗(yàn)，在病毒污染土壤后的第5天仍能檢測(cè)到。隨后對(duì)相關(guān)的消毒劑進(jìn)行消毒試驗(yàn)效果檢測(cè)，結(jié)果顯示，0.075%的戊二醛作用5min、0.05%的戊二醛作用10min對(duì)H9亞型禽流感病毒的殺滅率達(dá)100%。300mg/L二氧化氯作用2h對(duì)H9亞型流感病毒的殺滅率達(dá)到100%[13]。

4? 總結(jié)

消毒是控制感染的一項(xiàng)重要環(huán)節(jié)，可有效阻斷病原微生物的傳播。安全高效消毒劑的使用可以幫助減少病原傳染的概率，從而增加養(yǎng)殖獲益?，F(xiàn)階段，適用于養(yǎng)殖場(chǎng)的消毒劑種類繁多，效果不一。因此合理的選擇適合的消毒劑，做好消毒劑配伍使用，選擇適當(dāng)?shù)南拘Чu(píng)價(jià)方法有助于消毒劑的改進(jìn)，為養(yǎng)殖消毒劑的正確使用提供相應(yīng)指導(dǎo)依據(jù)。

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