采精頻率、稀釋濃度和溫度對大白豬精子活力和保存時間的影響

胡國娟

（白銀市白銀區(qū)獸醫(yī)局，甘肅 白銀 730900）

近年來，一些研究者們針對提高精液質量開展了相關研究，發(fā)現(xiàn)精子活力和保存時間是反映其品質的兩個主要因素主。精子活力和保存時間受眾多因素的影響，如公豬的遺傳因素、年齡、日糧、環(huán)境、管理及疾病等[1]。本研究通過精液的采集、稱量、稀釋、檢測精子活力和密度以及封裝保存的方法，搜集了有關稀釋度、采精頻率、保存溫度等相關數(shù)據(jù)，分析了其對大白豬精子活力和保存時間的影響，為提高豬精液品質提供參考。

1 影響精液品質的因素

1.1 稀釋度

人工授精采取的精液不會立刻投入使用，需經(jīng)過適當?shù)南♂屧偈褂?，一方面可擴大精液體積，另一方面有助于延長精子存活時間，提高母豬受胎率。由于未經(jīng)稀釋的精液中副性腺分泌物的濃度高，加入稀釋液后副性腺分泌物得到稀釋,從而鞏固了原生質膜，同時稀釋液還供給精子充分的營養(yǎng)物質，提供緩沖劑，保持精液適當?shù)膒H值，為較長期保存和長途運輸提供了便利[2]。

1.2 采精頻率

小公豬訓練成功后，每隔5 d采精一次，成年公豬每隔兩天即可采精。精子從精原干細胞到生成具有受精能力的成熟精子大約需要42 d才能完成。采精頻率過高，精子的結構和功能尚未完全發(fā)育，導致其品質差、密度小、活力低；而采精頻率過低，精子會在附睪內(nèi)大量積壓，使得采集的精液精子活力較差，畸形率高，同時精子產(chǎn)生大量活性氧（ROS）與精子質膜發(fā)生脂質過氧化反應，造成精子質膜損傷，精子活力下降，不適合配種[3]。

有研究發(fā)現(xiàn)，采精頻率在一定范圍內(nèi)時，對種豬的影響最小，淘汰率也最低，精液品質也相對較好。采精次數(shù)太少，會導致精液在附睪中積壓過多，影響精子質量；同時，采精次數(shù)過多不僅會影響種豬性欲，也會由于附睪產(chǎn)精子供應不足，采集的精液大多為精清。

1.3 保存方法

到目前為止，將豬精液常溫保存3 d以上而保持良好受精率的稀釋液配方尚未取得令人滿意的結果，但卻有所進步[4]。研究發(fā)現(xiàn)，豬精液最適合常溫保存，在15～25℃時，由于微生物生長迅速而影響精液質量，使得精液的保存時間和成活率都不高[5]。當精子處于休眠狀態(tài)時，活力較穩(wěn)定，從而可以延長保存時間。

1.4 其他因素

不同品種的種公豬其精液密度會因其遺傳特性有所差異，而種公豬的精液密度與總產(chǎn)仔數(shù)、初生窩重、窩產(chǎn)活仔數(shù)表現(xiàn)為強的正相關[6]。對于不同使用年限的公豬，精液質量也是不同的，剛開始進行馴化、誘情的小公豬不僅采精量少，而且精液質量也相對較差。一般來講，投入生產(chǎn)1～2年左右的種公豬生產(chǎn)的精液品質是最好的。達到一定年限，將會按照種公豬淘汰規(guī)則定期淘汰不能繼續(xù)生產(chǎn)的種公豬。嚴格執(zhí)行操作流程，保持干凈無菌的環(huán)境，可以有效地避免精液污染。因此公豬站的建立一般是按照SPF 標準建立。

公豬的飼養(yǎng)環(huán)境條件要求很高，濕度不宜太大，一般控制在 65% 左右。公豬對于熱的應激遠遠大于冷應激；溫度范圍在18～22 ℃ 可以使公豬感到舒適。公豬舍在冬天溫度應該在15 ℃ 以上，夏天在30 ℃以內(nèi)，超過或低于相應限度均會影響公豬的誘情，降低公豬性欲，從而影響精液質量。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 精液的采集 試驗豬為武川李家豬場飼養(yǎng)的1～2歲大白種公豬，以同一采精員采集的精液作為試驗材料。采用徒手法采精，具體操作為：將經(jīng)過馴化的公豬擠出尿液后引至假母臺，通過母豬尿液或公豬精液對其誘情，引發(fā)公豬性欲，待公豬陰莖呈螺旋狀抽動，用手卡在陰莖頭部，用保溫杯接取精液，將比較濃稠的部分收集保存，經(jīng)過過濾處理后保存于保溫杯中，放入實驗室進行檢測。

2.1.2 儀器設備 可調精液保存箱、恒溫水浴鍋、電子顯微鏡（400倍）、37 ℃ 保溫板、精液封裝機、離心管、恒溫磁力加熱攪拌器。

2.2 方法

2.2.1 不同稀釋比例對精子活力和保存時間的影響 每500 g稀釋粉與1 000 ml蒸餾水的比例配置成稀釋液，放置在攪拌器上攪拌15 min后，靜置15 min，二次攪拌15 min后再靜置15 min，然后與原精混合。

用離心管將靜置后的稀釋液與原精按1:1、1:3、1:6、1:9、1:12的比例混合，靜置于37℃的保溫板上分別鏡檢一次（鏡檢后存于可調精液保存箱中，每次鏡檢前均需在恒溫水浴鍋中加熱），根據(jù)鏡檢結果計算精子活力，觀察是否有死精以及精液的粘連程度，判斷精子畸形率。

精子的活力是指原精液在 37 ℃ 下呈直線運動的精子占全部精子總數(shù)的百分率[7]。

2.2.2 采精頻率對精子活力的影響 隨機抽取9頭種公豬，記錄對應耳牌號、采精日期、采精量、活力比、密度，分別觀察記錄一個月內(nèi)正常采精次數(shù)下采精量的多少、檢測精子活力，并對采精量、活力比、密度求均值進行分析。種公豬采精頻率為每3 d 采精1次[8]。

2.2.3 不同常溫保存方法對精子活力的影響精液保存技術通過降低或抑制精子的新陳代謝強度從而達到延長精子在體外存活時間的目的[9]。將配制好的同一種豬同比例精液（本實驗中用1:9）等量分成6份置于離心管中，放在37 ℃ 保溫板上，將6份精液分次放入可調精液保存箱中儲存1 h ，溫度分別調為15 ℃、17 ℃、19 ℃、21 ℃、23 ℃、25 ℃，連續(xù)觀察5 d天，記錄觀察精子活力變化。

3 結果與分析

3.1 不同稀釋比例對與精子活力和保存時間的影響

不同比例稀釋液下精子活力變化差異顯著，也間接影響其畸形。不同稀釋比例下精子活力大小、畸形變化和保存時間的關系分析結果見表1。

從表1可見，在1:1、1:3、1:6條件下，第五天時精子基本失去活力。第四天時通過精子的粘連程度來看，此時精子畸形率最高，不宜使用。在1：9和1:12條件下，精子保持較高活力狀態(tài)的保存時間可以達到第五天且畸形率低。綜合考慮，精子在1:9稀釋比例條件下品質最佳。

3.2 采精頻率對精子活力的影響

針對所選種豬，將采精量、活力比以及密度求均值后進行比較。同一品系大白豬在4月份不同采精次數(shù)采精量、活力比和密度均值見表2。

由表2可見，采精次數(shù)在5～6次的種豬采精量相對普遍較高，且活力比也較為穩(wěn)定。就對比結果來看，一頭種豬一個月內(nèi)的采精次數(shù)需在5～6次，過少或過多的采精頻率均會影響精子活力，降低精液品質。

3.3 不同保存溫度對精子活力和保存時間的影響

為制作更高品質的精液，將溫度范圍精確到單個溫度值波動范圍內(nèi)。不同溫度下保存時間和精子活力大小見表3。

表1 不同稀釋度與精子活力和保存時間的關系

表2 采精頻率與精子活力的關系

由表3可見，精液儲存在略低的溫度下可以延長精子的存活期，在17 ℃下精子活力最為穩(wěn)定，基本處于休眠狀態(tài)。因此，可以選用17 ℃精液保存箱保存，以提高精液質量。

4 總結

影響精液質量的因素除了上述的公豬年齡、季節(jié)、稀釋液對精液質量的影響外，還有飼養(yǎng)管理、營養(yǎng)水平、采精操作、保存運輸?shù)萚10]。綜合考慮影響精液品質的不同因素，能夠大范圍影響精液品質的因素主要有配比稀釋液的濃度、月均每頭豬的采精頻率和保存時間及溫度的控制三個方面。

本研究結果分析發(fā)現(xiàn)：原精液與稀釋液的配制比例應該控制在1:9左右，可以有效維持精子活力，降低畸形率；每頭可正常生產(chǎn)的大白豬每月采精頻率應控制在5～6次，可以維持公豬良好的生產(chǎn)狀態(tài)，延長使用期限；精液保存溫度應控制在17 ℃，盡量保證隨產(chǎn)隨用，減少儲精積壓，保證精液活力。

表3 不同保存溫度與精子活力的關系