• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    南亞實(shí)蠅轉(zhuǎn)錄組及嗅覺(jué)相關(guān)基因的初步分析

    2019-10-22 01:18:59杜迎剛季清娥賴鐘雄
    熱帶作物學(xué)報(bào) 2019年9期
    關(guān)鍵詞:引誘劑實(shí)蠅南亞

    杜迎剛 季清娥 賴鐘雄

    摘 ?要??南亞實(shí)蠅Bactrocera tau (Walker),是葫蘆科、茄科蔬菜和多種熱帶、亞熱帶果樹上的主要害蟲,抗逆性強(qiáng),繁殖速度快,防治難度大。為挖掘可用于生物防治的分子靶標(biāo)和探討副信息素類引誘劑對(duì)其作用的分子基礎(chǔ),本研究采用Illumina HiSeq2500?PE125 bp測(cè)序技術(shù)對(duì)其混合樣進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和生物信息學(xué)分析。經(jīng)序列拼接獲得36 109條Unigenes,進(jìn)一步與七大公共數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行同源比對(duì),注釋了21?127條Unigenes,其中在Nr數(shù)據(jù)庫(kù)中注釋成功的Unigenes數(shù)目最多,20?948條。Nr數(shù)據(jù)庫(kù)注釋的南亞實(shí)蠅B. tau Unigenes與地中海實(shí)蠅Ceratitis capitata同源性最高,達(dá)59.80%;與模式昆蟲黑腹果蠅Drosophila melanogaster的同源性次之,達(dá)14.86%。將Unigenes與GO數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)發(fā)現(xiàn),14?029條Unigenes根據(jù)功能分為了3個(gè)大類57個(gè)亞類;而與KOG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)結(jié)果為,13?479個(gè)Unigenes基因其功能屬于25個(gè)類別;進(jìn)一步KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)代謝分析表明,6442條Unigenes參與了5大類共152個(gè)代謝通路。基因注釋進(jìn)一步篩選鑒定獲得了嗅覺(jué)相關(guān)基因528個(gè),對(duì)其中氣味結(jié)合蛋白基因氨基酸序列的分析表明,其大多為具有6個(gè)保守的半胱氨酸位點(diǎn)的典型氣味結(jié)合蛋白,且與黑腹果蠅D. melanogaster、地中海實(shí)蠅C. Capicata、瓜實(shí)蠅B. cucuribitae、橘小實(shí)蠅B. dorsalis的氣味結(jié)合蛋白基因具有很高的同源性。這為南亞實(shí)蠅對(duì)副信息素類引誘劑反應(yīng)的相關(guān)功能基因的挖掘及從嗅覺(jué)上尋求科學(xué)的防治措施提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    關(guān)鍵詞 ?南亞實(shí)蠅;轉(zhuǎn)錄組分析;高通量測(cè)序;基因注釋;嗅覺(jué)基因中圖分類號(hào)??S433??????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼??A

    Preliminary Analysis of Transcriptome and Olfaction-related Genes in Bactrocera tauWalker

    DU Yinggang1,2, JI Qinge3, LAI Zhongxiong2*

    1. Facility Horticulture Laboratory of Universities in Shandong, Weifang University of Science and Technology, Shouguang, Shandong 262700, China; 2. Institute of Subtropical Pomology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350002, China; 3. College of Plant Protection, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350002, China

    Abstract ?Bactrocera tau(Walker)?is a major pest to Cucurbitaceous and Solanceous vegetables and many fruits of tropical and subtropical areas. Prevention and control of it is very difficult due to its strong resistance and rapid reproduction. To seek effective?molecular targets for its control and the action mechanism of parapheromone,?transcriptome ofB. tauwas sequenced and related bioinformatics?analyzed using Illumina HiSeq2500?PE125 bp sequencing platform.?The clean reads were then?de novoassembled into?36 109 Unigenes.?Through a similarity search against seven public databases, 21?127 unigenes were annotated. Most unigenes were annotated to Nr database with a success number of 20?948,?and the unigenes ofB. Tauhad?the highest homology to those ofCeratitis capitate in?species distribution of unigenes in Nr database?(59.80%), followed by 14.86% withDrosophila melanogaster. According to GO database, 14?029 Unigenes were classified into 3 categories?and 57 sub-types, while searching KOG database, 13?479 Unigenes were sorted in 25 functional groups. Metabolic analysis based on KEGG found 6442 Unigenes involved in 152 metabolite pathways in 5 classes. By further screening and identification, 528 olfaction-related genes ofB. tauwere obtained. Analysis of odorant binding protein genes ofB. taudemonstrated that most of them were typical with 6 conserved cysteine sites and with high homology to those ofD. melanogaster,C.capicata,B. cucuribita andB. dorsalis. These results?will provid basic information for the research of functional genes related to parapheromone treatment onB. tauas well as the establishment of control measures based on olfactories.

    Keywords ?Bactrocera tau (Walker);?analysis of transcriptome;?high-throughput sequencing;?gene annotation;?olfaction?genes

    DOI10.3969/j.issn.1000-2561.2019.09.018

    南亞實(shí)蠅Bactrocera tau (Walker),屬雙翅目Diptera實(shí)蠅科Tephritidae,果實(shí)蠅屬Bactrocera Macquart[1-3],為害絲瓜、南瓜、苦瓜等13種瓜類,柑桔、芒果等共計(jì)70多種熱帶和亞熱帶瓜果。中國(guó)主要分布于廣東、廣西、海南、福建、云南、貴州、四川、湖北、浙江、江西等地[4]。因其抗逆性強(qiáng),個(gè)體食量大,發(fā)育歷期短,產(chǎn)卵期長(zhǎng),在很多地區(qū)其危害甚至超過(guò)橘小實(shí)蠅B. dorsalis(Hendel)[5]

    目前,對(duì)南亞實(shí)蠅的防治措施主要借鑒橘小實(shí)蠅B. dorsalis和瓜實(shí)蠅B. cucuribitae的4步防控技術(shù)[6-7],其中性誘滅雄技術(shù)[指施用甲基丁香酚(methyl eugenol,簡(jiǎn)稱ME)和誘蠅酮(cuelure,簡(jiǎn)稱CUE)等對(duì)相關(guān)種類實(shí)蠅雄性具有強(qiáng)吸引作用的副信息素進(jìn)行誘殺而降低雄蟲數(shù)量]從實(shí)蠅防治初期就一直發(fā)揮著重要作用[8]。這2種物質(zhì)對(duì)很多種類實(shí)蠅雄性都具有很強(qiáng)的引誘活性,但世界上沒(méi)有一類昆蟲像實(shí)蠅科昆蟲那樣對(duì)副信息素類物質(zhì)的反應(yīng)存在如此大差異[9-10]。就南亞實(shí)蠅而言,對(duì)ME和CUE都有趨性,但ME/CUE對(duì)其引誘活性遠(yuǎn)不如ME對(duì)橘小實(shí)蠅、CUE對(duì)瓜實(shí)蠅那樣強(qiáng)烈,這就導(dǎo)致了性誘滅雄技術(shù)在南亞實(shí)蠅上效果非常不理想,近年來(lái),隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,轉(zhuǎn)錄組分析逐漸成為昆蟲中尋求新的防治措施的有效手段[11]。本研究以HiSeq2500高通量測(cè)序技術(shù),首次對(duì)南亞實(shí)蠅進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序研究,并以該轉(zhuǎn)錄本為依據(jù)對(duì)其嗅覺(jué)基因進(jìn)行了挖掘,對(duì)OBPs進(jìn)行了進(jìn)化分析,為南亞實(shí)蠅嗅覺(jué)機(jī)理的探討和防治方法的尋求提供了重要數(shù)據(jù)。

    1 ?材料與方法

    1.1材料

    1.1.1 ?供試蟲源及飼養(yǎng)方法??室內(nèi)大量飼養(yǎng)蟲源為福建農(nóng)林大學(xué)益蟲研究所2013年建立的室內(nèi)大量飼養(yǎng)種群,初始種群采自漳州為害絲瓜,本實(shí)驗(yàn)用蟲為同地點(diǎn)同類寄主上野生蟲源連續(xù)復(fù)壯3次后的蟲源;輻照蟲源為用95 Gy/100 Gy劑量的60Co輻照的羽化前2 d的蛹,羽化后正常人工飼料飼養(yǎng)的蟲源[12];ME/CUE亞劑量誘導(dǎo)蟲源為取1 mL純的ME/CUE均勻涂抹盛在直徑60 mm培養(yǎng)皿中的人工飼料表面,于羽化后2 d(性成熟前)、5 d(發(fā)育關(guān)鍵日齡)、7 d(交配前)飼喂3次,連續(xù)誘導(dǎo)4代的蟲源。飼養(yǎng)方法參照文獻(xiàn)[13]。

    1.1.2 ?測(cè)序樣本??正常飼養(yǎng)、輻照處理、CUE/ME誘導(dǎo)的南亞實(shí)蠅在1日齡(對(duì)ME有觸角電位反應(yīng),但沒(méi)趨性[6])、5日齡(對(duì)ME/CUE開始有趨性反應(yīng),但性未成熟)、10日齡(性成熟、交配前后)、17日齡(產(chǎn)卵后)、19日齡(部分實(shí)蠅開始出現(xiàn)2次交配)雌雄各取5只,平行取3管,液氮速凍后送至北京百邁客生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序和分析,測(cè)序系統(tǒng)為HiSeq2500PE125測(cè)序儀。

    1.2方法

    1.2.1 ?RNA的提取??樣品充分研磨后用Trizol Reagent提取RNA,用Nanodrop分光光度計(jì)(德國(guó)Implen公司)、Qubit 2.0 熒光定量?jī)x(美國(guó)Life Technologies公司)、Agilent 2100系統(tǒng)(美國(guó)Agilent Technologies公司)方法檢測(cè)RNA樣品的純度、濃度和完整性。

    1.2.2 ?文庫(kù)的構(gòu)建、測(cè)序及數(shù)據(jù)的拼接、組裝??RNA樣品檢測(cè)合格后,按照Preparing Samples for Sequencing of mRNA試劑盒說(shuō)明書(Illumina)構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)。當(dāng)庫(kù)檢合格后,用Illumina?HiSeq?2500?的PE125?bp雙向測(cè)序技術(shù)對(duì)文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序得到堿基質(zhì)量打分能達(dá)到或超過(guò)Q30高質(zhì)量的Raw data進(jìn)行數(shù)據(jù)過(guò)濾,去除其中接頭序列及低質(zhì)量Reads,獲得高質(zhì)量的Clean data。然后利用短reads組裝軟件Trinity將具有重疊區(qū)域的Clean data進(jìn)行序列組裝,獲得Unigene庫(kù)。

    1.2.3 ?Unigene功能注釋 ?使用BLAST軟件將Unigene序列與NR(Non-redundant protein database,非冗余的蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù))、Swiss-Prot(A?manually annotated and reviewed protein sequence database,人工注釋和審查蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù))、GO(Gene ontology,基因本體)、COG(Cluster of orthologous groups,蛋白相鄰類的聚簇)、KOG(Eukaryotic orthologous groups,真核生物同源組)、Pfam(Pfam database,同源蛋白家族數(shù)據(jù)庫(kù))、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,京都基因與基因組百科全書)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),通過(guò)基因的相似性進(jìn)行功能注釋。

    1.2.4 ?嗅覺(jué)相關(guān)基因鑒定分析 ?根據(jù)獲得的南亞實(shí)蠅轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),對(duì)嗅覺(jué)系統(tǒng)相關(guān)基因進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。在NCBI、公共數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索并與已登錄的黑腹果蠅D. melanogaster、地中海實(shí)蠅C. Capicata、瓜實(shí)蠅B. cucuribitae、橘小實(shí)蠅B. dorsalis等昆蟲的嗅覺(jué)相關(guān)基因的氨基酸序列進(jìn)行BLAST比對(duì),其中OBPs、CSPs結(jié)合其特有的結(jié)構(gòu)通式[14-15]進(jìn)行進(jìn)一步鑒定。鑒定出來(lái)的OBPs用MEGA5.0的Neighbor-joining方法構(gòu)建進(jìn)化樹,以Bootstrap=1000檢驗(yàn)進(jìn)化樹的可靠性。

    2 ?結(jié)果與分析

    2.1 ?RNA的提取與檢測(cè)

    總RNA提取完整,OD260/280為2.09,OD260/230為0.91,28S/18S為1.4,濃度分別為2873.4?ng/μL,RNA純度和質(zhì)量符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。

    2.2轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及序列拼接組裝

    對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行產(chǎn)出統(tǒng)計(jì),共得到10.97 Gb Clean Data,Q30比例(測(cè)序錯(cuò)誤率<0.1%)為90.05%(>90%),GC含量為43.58%。說(shuō)明此樣品測(cè)序的數(shù)據(jù)符合要求,可以保證后續(xù)序列拼接組裝質(zhì)量。

    采用Trinity軟件把獲得的高質(zhì)量測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行序列組裝,取每條基因中最長(zhǎng)的轉(zhuǎn)錄本作為Unigene,得到36?109條Unigenes(表1)。其中N50和平均長(zhǎng)度分別為1897和955.14?bp,說(shuō)明此轉(zhuǎn)錄本文庫(kù)的測(cè)序和組裝結(jié)果較好,能夠進(jìn)行后續(xù)生物信息學(xué)分析。

    2.3??Unigenes的功能注釋

    使用BLAST軟件將36?109條Unigenes與NR、Swiss-Prot、GO、COG、KOG、Pfam、KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),獲得Unigene的注釋信息。最終獲得21?127條有注釋信息的Unigenes,占總Uni genes的58.51%,其中在NR數(shù)據(jù)庫(kù)中注釋成功的Unigenes數(shù)目最多,20?948條,占總數(shù)的58.01%;其后依次是Swiss-Prot有14 103條(39.06%),GO有14 029條(38.85%),KOG有13 479條(37.33%),Pfam有12 670條(35.09%),KEGG有6442條(17.84%)和COG有5984條(16.57%)(表2)。Unigene注釋到NR數(shù)據(jù)庫(kù)中的物種分布圖顯示(圖1),地中海實(shí)蠅C. capitata最多為13?526條,其后依次為黑?腹果蠅D.?melanogaster(3112條)、擬果蠅D. simulans(302條)、果蠅D. sechellia(196條)、中華支睪吸蟲Clo nor chis sinensis(192條)、家蠶Bombyx mori(176條)、黑果蠅D. virilis(173條)、非洲果蠅D. yakuba(159條)、羅阿絲蟲Loa loa(154條)、南美熱帶果蠅D. willistoni(153條);其他物種2718條。

    2.4 ?Unigenes的功能分類

    對(duì)南亞實(shí)蠅轉(zhuǎn)錄組的Unigenes進(jìn)行GO分析發(fā)現(xiàn),在GO注釋的14 029條Unigenes中,注釋到生物學(xué)過(guò)程(Biological process)的基因最多(52 151條),其次是分子功能(Molecular functiion)(25 047條),細(xì)胞組分(Cellular component)的最少(18 959條)。在57個(gè)亞類中,以細(xì)胞過(guò)程、單生物過(guò)程、代謝過(guò)程在生物學(xué)過(guò)程中的比例較高,細(xì)胞和細(xì)胞部分在細(xì)胞組分中所占比例較高,蛋白結(jié)合和催化活性在分子功能分類中占有較高比例(圖2)。對(duì)南亞實(shí)蠅的Unigenes基于GO數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行功能分類,可以從宏觀上認(rèn)識(shí)南亞實(shí)蠅基因功能分布特征,為下一步目標(biāo)基因的挖掘提供了便利。

    將組裝得到的Unigenes與KOG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),共有13 479個(gè)Unigenes基因被注釋,占37.33%,分為25個(gè)類別,最多的是一般功能預(yù)測(cè)基因(1681個(gè)),占12.47%;其次,是翻譯、核糖體結(jié)構(gòu)與合成基因(711個(gè)),占5.27%;第三,是復(fù)制、重組和修復(fù)基因(629個(gè)),占4.67%;第四,是翻譯后的修飾、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化、伴侶基因(584個(gè)),占4.33%;最少的是核酸結(jié)構(gòu)基因(2個(gè)),占0.01%,細(xì)胞外結(jié)構(gòu)基因(0個(gè))(圖3),說(shuō)明了南亞實(shí)蠅Unigenes功能分類的總體情況。

    KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)南亞實(shí)蠅的Unigenes可能參與或涉及的代謝途徑進(jìn)行分析表明,6442個(gè)Unigenes參與了細(xì)胞過(guò)程(cellular processing)、環(huán)境信息處理(environmental information processing)、遺傳信息處理(genetic information proce ssing)、代謝(metabolism)和生物系統(tǒng)(organismal systems)5大類共152個(gè)代謝通路,其中注釋基因數(shù)最多的10個(gè)代謝通路依次為:核糖體(276個(gè))、氧化磷酸化(268個(gè))、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白加工(246個(gè))、RNA運(yùn)輸(233個(gè))、嘌呤代謝(181個(gè))、剪接體(174個(gè))、細(xì)胞內(nèi)吞作用(146個(gè))、泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解(143個(gè))、溶酶體(141個(gè))和吞噬體(133個(gè))(表3)。

    2.5嗅覺(jué)相關(guān)基因分析

    通過(guò)對(duì)7大公共數(shù)據(jù)庫(kù)同源比對(duì)和注釋分析,528個(gè)嗅覺(jué)相關(guān)基因在南亞實(shí)蠅轉(zhuǎn)錄組中獲得鑒定。其中包括34個(gè)OBPs、3個(gè)化學(xué)感受蛋白基因[Chemosensory protein (CSP) genes]、20個(gè)嗅覺(jué)受體基因[Olfactory receptor (Or) genes]、43個(gè)離子型受體基因[Ionotropic receptor (IR) genes]、204個(gè)昆蟲觸角G蛋白基因(GTP binding protein genes)、5個(gè)昆蟲感覺(jué)神經(jīng)元膜蛋白[Sensory neuron membrane proteins (SNMPs)]基因和219個(gè)氣味降解酶基因[Odor degrading enzymes (ODE) genes](表4)。對(duì)OBPs的分析發(fā)現(xiàn),28條具有完整的開放閱讀框,進(jìn)一步氨基酸序列分析表明,2條屬于Minus-OBPs,1條為Dimer-OBPs,1條為“Plus-C”O(jiān)BP,24條為典型OBPs;對(duì)30條結(jié)構(gòu)較完整的南亞實(shí)蠅OBPs序列與黑腹果蠅D. melanogaster(58條)、瓜實(shí)蠅B. cucuribitae(34條)、地中海實(shí)蠅C. capitata(28條)、橘小實(shí)蠅B. dorsalis(47條)OBPs序列進(jìn)行進(jìn)化分析表明(圖4),B. tauOBP多數(shù)至少與一種實(shí)蠅OBP同源物聚類在一支,且擁有80%以上的序列一致性,僅有極個(gè)別B.tauOBP與同一支上的實(shí)蠅OBP序列一致性較低,如C29372.graph_c0與BdorOBP(AKM45842.1)序列一致性僅為44%且在進(jìn)化樹中形成一個(gè)獨(dú)立的小分支,表明不同種類的實(shí)蠅OBPs出現(xiàn)了各自的分化。

    3 ?討論

    副信息素類引誘劑從發(fā)現(xiàn)其對(duì)實(shí)蠅相關(guān)種類雄性具有強(qiáng)引誘活性開始,就一直在實(shí)蠅綜合防治和監(jiān)控上發(fā)揮著重要作用[8],在很多地區(qū)甚至是唯一的防治措施。但在施用過(guò)程中發(fā)現(xiàn):相關(guān)實(shí)蠅種類的雄蟲取食少量的引誘劑不但不會(huì)死亡還可大幅度提高其交配競(jìng)爭(zhēng)能力以及對(duì)雌性的吸引力[6, 16];實(shí)蠅經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的ME處理后不但有助于性成熟[17],且其當(dāng)代和后代雄性對(duì)ME的敏感性下降,有些學(xué)者據(jù)此擔(dān)心副信息素類誘劑不合理的使用會(huì)導(dǎo)致田間出現(xiàn)其抗性種群[8];實(shí)蠅輻照成為不育雄蠅后,對(duì)引誘劑的反應(yīng)活性降低且開始反應(yīng)的日齡推遲,飼喂一定量的引誘劑后交配能力得到一定程度的恢復(fù)[18],據(jù)此副信息素類引誘劑被廣泛應(yīng)用到實(shí)蠅SIT項(xiàng)目中[19]。為探討副信息素類引誘劑使用對(duì)南亞實(shí)蠅嗅覺(jué)相關(guān)基因的影響,進(jìn)而指導(dǎo)其在實(shí)蠅監(jiān)測(cè)、防治中的合理應(yīng)用,本研究綜合考慮轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的特點(diǎn)[20]和南亞實(shí)蠅當(dāng)時(shí)的發(fā)育歷期[21-22],對(duì)正常飼養(yǎng)、輻照處理、副信息素類引誘劑誘導(dǎo)下的蟲源在不同日齡進(jìn)行了混合取樣和測(cè)序。

    該樣品通過(guò)組裝共獲得36?109條Unigenes,其中N50長(zhǎng)度為1897?bp,獲得了測(cè)序和組裝結(jié)果較好,能滿足后續(xù)對(duì)功能基因挖掘要求的轉(zhuǎn)錄本文庫(kù)。進(jìn)一步將得到的Unigenes通過(guò)Blast與7大公共數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行同源性搜索獲得21?127條Unigenes(58.51%)的注釋,其中在NR注釋成功的Unigenes數(shù)目最多,20?948條(58.01%),且在NR數(shù)據(jù)庫(kù)中,注釋到地中海實(shí)蠅C. capitata上的Unigenes最多,為12?526條,占在NR數(shù)據(jù)庫(kù)中總注釋Unigenes的58.80%;注釋到黑腹果蠅D. melanogaster上的Unigenes為3112條,占在NR數(shù)據(jù)庫(kù)中總注釋Unigenes的14.86%,這不但說(shuō)明了地中海實(shí)蠅與南亞實(shí)蠅的親緣關(guān)系較近,也進(jìn)一步說(shuō)明了此轉(zhuǎn)錄本文庫(kù)組裝和注釋的正確,還有,這2種昆蟲都有基因組數(shù)據(jù),這為下一步南亞實(shí)蠅功能基因的挖掘和生物信息學(xué)分析提供了便利。同時(shí),利用GO、KOG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)南亞實(shí)蠅Unigenes進(jìn)行了基因功能分類和功能預(yù)測(cè),用KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)南亞實(shí)蠅6442條Unigenes進(jìn)行了代謝通路初步分析,這為下一步挖掘功能基因及開展靶標(biāo)基因的克隆及功能驗(yàn)證提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    嗅覺(jué)在昆蟲寄主定位與選擇、躲避天敵、尋找配偶、產(chǎn)卵行為等生命活動(dòng)中發(fā)揮著感知寄主揮發(fā)物、昆蟲利它素、昆蟲信息素等氣味物質(zhì)的重要作用,昆蟲在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成了一套高度專一、極其靈敏、復(fù)雜的嗅覺(jué)系統(tǒng),系統(tǒng)中涉及OBP、CSP、OR、SNMP、IR、G-Protein和ODE等多種蛋白家族[23]。其中OBP的功能是將外界疏水性的氣味分子運(yùn)載到嗅覺(jué)神經(jīng)樹突膜上的感覺(jué)受體(OR),是昆蟲實(shí)現(xiàn)嗅覺(jué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的第一步,也是目前研究較多、機(jī)理了解最多的一步。在該轉(zhuǎn)錄本中,我們初步篩選出了528個(gè)嗅覺(jué)相關(guān)基因,其中包括34個(gè)OBPs、3個(gè)CSPs、20個(gè)Ors、43個(gè)IRs、204個(gè)G蛋白基因、5個(gè)SNMPs和219個(gè)ODEs。204個(gè)G蛋白基因中包括13個(gè)小G蛋白基因;ODEs包括細(xì)胞色素P450基因150個(gè),谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶基因(Glutathione S-transferase)22個(gè),醛脫氫酶基因(Aldehyde dehydrogenase,ALDHs)25個(gè)、醇脫氫酶基因(Alcohol dehydrogenase,ADHs)22個(gè)。34個(gè)OBPs中有28條具有完整的開放閱讀框,氨基酸序列大多符合Cys-X20-66-Cys-X3-Cys- X21-43- Cys-?X8-14-Cys-X8-Cys、Cys-X15-39-Cys-X3-Cys- X21-44Cys- X7-12-Cys-X8-Cys或X22-68-Cys-X25-68- Cys-X3-?Cys–X31-46-Cys-X8-29-Cys-X8-9-Cys-X5-71典型OB Ps的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)[24-25],與黑腹果蠅D. melanog aster、瓜實(shí)蠅B. cucuribitae、地中海實(shí)蠅C. capi ta ta、橘小實(shí)蠅B. dorsalis在NCBI上已登錄的所有OBPs中至少有一條同源物聚類在同一支,且擁有80%以上的序列一致性,這為下一步借鑒這些實(shí)蠅在基因組方面的研究成果進(jìn)一步挖掘研究南亞實(shí)蠅OBPs及其他功能基因提供了依據(jù),也為下一步以該蛋白為基礎(chǔ),探討南亞實(shí)蠅對(duì)副信息素的引誘機(jī)理并篩選新的引誘成分提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    參考文獻(xiàn)

    [1]?陳海東, 周昌清, 楊平均, 等. 瓜實(shí)蠅、桔小實(shí)蠅、南瓜實(shí)蠅在廣州地區(qū)的種群動(dòng)態(tài)[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào), 1995, 22(4): 348-354.

    [2]?黃??振. 果實(shí)蠅屬重要種的鑒定、人工飼料篩選、適生性預(yù)測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)分析[D]. ??冢?海南大學(xué), 2010.

    [3]?駱米娟, 張賀賀, 陳家驊, 等. 南亞實(shí)蠅成蟲腸道細(xì)菌的分離與鑒定[J]. 福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2016, 45(1): 8-13.

    [4]?馬興莉, 李志紅, 胡學(xué)難, 等. 橘小實(shí)蠅、瓜實(shí)蠅和南亞果實(shí)蠅對(duì)廣東省造成的經(jīng)濟(jì)損失評(píng)估[J]. 植物檢疫, 2013, 27(3): 50-56.

    [5]?周 ?波. 南亞實(shí)蠅生物學(xué)特性及不同食料對(duì)其種群增長(zhǎng)的影響[D]. 重慶: 西南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2005.

    [6]?杜迎剛, 季清娥, 賴鐘雄, 等. 3種實(shí)蠅對(duì)甲基丁香酚和誘蠅酮的觸角電位反應(yīng)[J]. 森林與環(huán)境學(xué)報(bào), 2015, 35(3): 279-283.

    [7]?杜迎剛, 季清娥, 陳家驊, 等. 蛋白質(zhì)對(duì)橘小實(shí)蠅生殖的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2017, 45(4): 73-75.

    [8]?Cunningham R T. Parapheromones[M]//Robinson A S, ??Hooper G.?Fruit flies: Their biology, natural enemies and control. Amsterdam: Elsevier, 1989: 221-230.

    [9]?Koyama J. Mating pheromones: tropical dacines[M]//?Robinson A S,?Hooper G. Fruit flies: Their biology, natural enemies and control. Amsterdam: Elsevier, 1989:165-168.

    [10]?Kubo H. Sex pheromone and mating behavior of dacines[M]//Kawasaki?K, Iwahashi O,?Kaneshiro?K.?Biology and control of fruit flies. Ginowan, Okinawa, Japan:?Proc Int Symp Okinawa?Japan, 1991: 223-232.

    [11]?孟??翔, 胡俊杰, 劉??慧, 等. 荔枝蒂蛀蟲轉(zhuǎn)錄組及嗅覺(jué)相關(guān)基因分析[J]. 昆蟲學(xué)報(bào), 2016, 59(8): 823-830.

    [12]?Du Y, Ji Q, Pan J,et al. Suitability of pumpkin fruit flyBactrocera tau(Walker)(Diptera: Tephritidae) for a sterile insect technique program[J].?Egyptian Journal of Biological Pest Control, 2016(4): 665-669.

    • FAO/IAEA/USDA. Product quality control and shipping procedures for sterile mass-reared Tephritid fruit flies[Z/OL],?

    Version 5.0. Vienna, Austria: International Atomic Energy Agency, 2003.?http://www-naweb.iaea.org/nafa/ipc/public/ ipc-mass-reared-tephritid.html.

    • Xu P X, Zwiebel L J, Smith D P. Identification of a distinct family of genes encoding atypical odorant-binding proteins in the malaria vector mosquito,?Anopheles gambiae[J].?Insect Molecular Biology, 2003, 12: 549-560.
    • Zhou J J, He X L, Pickett J A, et al. Identification of odorant-binding proteins of the yellow fever mosquito Aedes aegypti: genome annotation and comparative analyses[J].?Insect Molecular Biology, 2008, 17: 147-163.
    • Ji Q E, Chen J H, McInnis D O,?et al. The effect of Methyl eugenol exposure on subsequent mating performance of sterile males?Bactrocera dorsalis[J].?Journal of Applied Entomology, 2013, 137: 238-243.
    • Wong T?T?Y, Mcinnis D?O, Nishimoto J?I. Relationship of sexual maturation rate to response of oriental fruit fly strains (Diptera:?Tephritidae) to methyl eugenol[J]. Journal of Chemical Ecology, 1989, 15(4): 1399-1404.
    • 崔守東. 輻照導(dǎo)致橘小實(shí)蠅對(duì)性誘劑趨性變化機(jī)理的研究[D]. 福州: 福建農(nóng)林大學(xué), 2016.
    • Paranhos B J, Papadopoulos N T, Mcinnis D, et al. Field dispersal and survival of sterile Medfly males aromatically treated with ginger root oil[J]. Environmental?Entomology, 2010, 39(2): 570-575.
    • 張棋麟, 袁明龍. 基于新一代測(cè)序技術(shù)的昆蟲轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究進(jìn)展[J]. 昆蟲學(xué)報(bào), 2013, 56(12): 1489-1508.
    • 劉麗紅. 溫度及補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)對(duì)南亞實(shí)蠅Bactrocera tau (Walker)種群增長(zhǎng)的影響[D]. 重慶: 西南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2005.
    • 周昌清, 陳海東, 林佩卿. 光溫濕因子對(duì)三種果實(shí)蠅種群生殖力影響的比較研究[J]. 中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 1995, 34(1): 68-75.
    • 王桂榮, 郭予元, 吳孔明. 昆蟲觸角氣味結(jié)合蛋白的研究進(jìn)展[J]. 昆蟲學(xué)報(bào), 2002, 45(1): 131-137.
    • Hekmat-scafe D?S, Scafe C?R, Mc Kinney A J, et al.?Genome-wide analysis of the odorant-binding protein gene family in?Drosophila melanogaster[J]. Genome Research, 2002, 12(9): 1357-1369.
    • 王??娟. 大草蛉嗅覺(jué)相關(guān)蛋白基因的鑒定及功能研究[D]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 2016.

    猜你喜歡
    引誘劑實(shí)蠅南亞
    桔小實(shí)蠅引誘劑篩選
    南亞磷肥市場(chǎng)需東繼續(xù)提升
    四種草地貪夜蛾測(cè)報(bào)型性引誘劑的誘捕效果對(duì)比
    湖北植保(2021年5期)2021-10-20 02:34:56
    中國(guó)熱科院南亞所 研發(fā)成功菠蘿機(jī)械化種植機(jī)
    F2型和APF-1持久型引誘劑對(duì)松墨天牛的林間誘捕效果比較
    南亞煉油化工市場(chǎng)一覽
    兩種新型松褐天牛引誘劑不同空間位置誘捕效果比較
    瓜實(shí)蠅的發(fā)生與綜合防治
    蔬菜(2016年8期)2016-10-10 06:49:12
    南亞高壓對(duì)西藏夏季降水的影響
    西藏科技(2016年5期)2016-09-26 12:16:41
    實(shí)蠅蟲果悶殺袋
    欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产视频内射| 亚洲国产中文字幕在线视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久久久久久久免费视频了| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 婷婷亚洲欧美| 日本黄大片高清| 亚洲精品在线美女| 成年女人看的毛片在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 精品久久久久久,| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产高清激情床上av| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产一区二区激情短视频| 日韩欧美免费精品| 国产成人影院久久av| 国产日本99.免费观看| 精品国产乱子伦一区二区三区| 女同久久另类99精品国产91| 精品乱码久久久久久99久播| a级毛片在线看网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲精品在线观看二区| 性欧美人与动物交配| 又爽又黄无遮挡网站| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 又黄又粗又硬又大视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 午夜福利在线在线| 午夜影院日韩av| 日本五十路高清| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 亚洲av美国av| 亚洲国产欧美人成| 久久久久久久精品吃奶| 一本一本综合久久| 色视频www国产| av黄色大香蕉| 亚洲国产欧美网| 国产精品1区2区在线观看.| 日韩人妻高清精品专区| 国产私拍福利视频在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲一区二区三区色噜噜| 一进一出好大好爽视频| 亚洲成av人片免费观看| 少妇的逼水好多| 此物有八面人人有两片| 久久香蕉国产精品| 亚洲欧美激情综合另类| 中文字幕高清在线视频| 国产三级在线视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 欧美一级毛片孕妇| 天天一区二区日本电影三级| 99re在线观看精品视频| a在线观看视频网站| 午夜久久久久精精品| 在线a可以看的网站| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 黑人操中国人逼视频| 国产三级中文精品| 午夜亚洲福利在线播放| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 麻豆成人av在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美中文综合在线视频| 女同久久另类99精品国产91| 国产黄a三级三级三级人| 午夜精品久久久久久毛片777| 脱女人内裤的视频| 欧美又色又爽又黄视频| 日韩av在线大香蕉| 国产综合懂色| 又粗又爽又猛毛片免费看| 九九热线精品视视频播放| 精品一区二区三区四区五区乱码| 日韩精品中文字幕看吧| 黄色女人牲交| 欧美色视频一区免费| 窝窝影院91人妻| 成人国产一区最新在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲人成伊人成综合网2020| 网址你懂的国产日韩在线| 草草在线视频免费看| 午夜福利在线观看吧| 国产人伦9x9x在线观看| 好男人电影高清在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品亚洲av一区麻豆| 天天一区二区日本电影三级| 黄片小视频在线播放| 香蕉国产在线看| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 色播亚洲综合网| 级片在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美黑人巨大hd| 午夜久久久久精精品| 欧美日韩黄片免| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 午夜激情福利司机影院| 免费无遮挡裸体视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 少妇的逼水好多| 午夜影院日韩av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 成人18禁在线播放| 国产精品久久久久久久电影 | 亚洲欧美激情综合另类| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美成狂野欧美在线观看| 级片在线观看| 色综合婷婷激情| 日韩欧美国产一区二区入口| 香蕉av资源在线| 偷拍熟女少妇极品色| 岛国在线免费视频观看| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲av免费在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 黄色丝袜av网址大全| 成人精品一区二区免费| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 无遮挡黄片免费观看| 国产精品女同一区二区软件 | 一本综合久久免费| 午夜福利在线在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 黄片大片在线免费观看| 午夜福利成人在线免费观看| 日韩国内少妇激情av| 日本与韩国留学比较| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费人成视频x8x8入口观看| 99久久精品国产亚洲精品| 国产亚洲精品av在线| 亚洲电影在线观看av| av国产免费在线观看| 岛国在线免费视频观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产亚洲精品av在线| 欧美又色又爽又黄视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 又大又爽又粗| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲精品一区av在线观看| avwww免费| 精品久久久久久久毛片微露脸| 久久久色成人| 色尼玛亚洲综合影院| 757午夜福利合集在线观看| 久久人人精品亚洲av| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久久国产成人免费| 国产人伦9x9x在线观看| 精品福利观看| 国产真人三级小视频在线观看| 99国产综合亚洲精品| 日韩有码中文字幕| 看免费av毛片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99热只有精品国产| 十八禁人妻一区二区| 国产成人啪精品午夜网站| 身体一侧抽搐| 免费人成视频x8x8入口观看| 中文字幕高清在线视频| 宅男免费午夜| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品久久久久久精品电影| 一进一出抽搐动态| 免费看光身美女| www日本黄色视频网| 国产亚洲精品久久久com| 在线国产一区二区在线| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 午夜精品在线福利| 曰老女人黄片| 俄罗斯特黄特色一大片| 制服人妻中文乱码| 美女大奶头视频| 一本久久中文字幕| 亚洲最大成人中文| 久久精品影院6| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产极品精品免费视频能看的| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产高清有码在线观看视频| 少妇的逼水好多| 一区福利在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 免费av不卡在线播放| 久久久久久久午夜电影| 真实男女啪啪啪动态图| av欧美777| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| av视频在线观看入口| 亚洲 欧美一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲av五月六月丁香网| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产在线精品亚洲第一网站| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 久久久久性生活片| av在线蜜桃| 69av精品久久久久久| 99热精品在线国产| 色吧在线观看| 久久久国产成人精品二区| 欧美日韩综合久久久久久 | 黄色丝袜av网址大全| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 精品欧美国产一区二区三| 超碰成人久久| 99精品欧美一区二区三区四区| www国产在线视频色| 亚洲一区二区三区色噜噜| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产激情欧美一区二区| 88av欧美| 高清在线国产一区| 美女午夜性视频免费| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 欧美性猛交黑人性爽| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美又色又爽又黄视频| 成人av在线播放网站| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产探花在线观看一区二区| 免费av毛片视频| 国产97色在线日韩免费| 亚洲精品在线美女| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲真实伦在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 超碰成人久久| 亚洲片人在线观看| 亚洲色图av天堂| 欧美高清成人免费视频www| 18禁观看日本| 制服丝袜大香蕉在线| 精品日产1卡2卡| 国产亚洲精品av在线| www日本黄色视频网| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产成人av激情在线播放| av中文乱码字幕在线| 香蕉丝袜av| 色综合欧美亚洲国产小说| 免费av不卡在线播放| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 村上凉子中文字幕在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品av久久久久免费| e午夜精品久久久久久久| 久久久久免费精品人妻一区二区| 美女午夜性视频免费| 最近在线观看免费完整版| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| avwww免费| 欧美色视频一区免费| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲成a人片在线一区二区| 在线观看舔阴道视频| 日韩人妻高清精品专区| 综合色av麻豆| 国内精品久久久久久久电影| 国产亚洲精品一区二区www| 少妇丰满av| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产亚洲精品av在线| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| a在线观看视频网站| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产私拍福利视频在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 国产精品99久久久久久久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲国产精品sss在线观看| www.www免费av| 亚洲中文日韩欧美视频| 美女午夜性视频免费| 午夜精品在线福利| netflix在线观看网站| 久久这里只有精品中国| 欧美成狂野欧美在线观看| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美成狂野欧美在线观看| 麻豆成人av在线观看| 欧美zozozo另类| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲无线在线观看| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 老汉色av国产亚洲站长工具| 中文字幕久久专区| 变态另类丝袜制服| 啦啦啦韩国在线观看视频| 99精品欧美一区二区三区四区| av黄色大香蕉| 丰满人妻一区二区三区视频av | 成人欧美大片| 成年女人永久免费观看视频| 看片在线看免费视频| 天堂√8在线中文| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 亚洲天堂国产精品一区在线| 色吧在线观看| 91老司机精品| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 最新中文字幕久久久久 | av天堂在线播放| 三级毛片av免费| 国产高清视频在线播放一区| bbb黄色大片| 午夜福利高清视频| 亚洲成人久久爱视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 后天国语完整版免费观看| 午夜两性在线视频| 一本一本综合久久| 欧美一区二区精品小视频在线| 精品一区二区三区视频在线 | 国产精品一区二区三区四区久久| 天堂网av新在线| 色吧在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲,欧美精品.| 九色国产91popny在线| 国产精品久久久久久精品电影| svipshipincom国产片| www.自偷自拍.com| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 精品福利观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 老鸭窝网址在线观看| 国产黄片美女视频| www.www免费av| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日本 欧美在线| 黄色成人免费大全| 美女cb高潮喷水在线观看 | 国产视频内射| 丁香欧美五月| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲美女视频黄频| 久久午夜综合久久蜜桃| 天堂√8在线中文| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产午夜精品久久久久久| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品九九99| 国产精品电影一区二区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 黄色成人免费大全| 欧美成狂野欧美在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 一进一出抽搐动态| 久久久国产欧美日韩av| 特大巨黑吊av在线直播| 在线永久观看黄色视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日韩三级视频一区二区三区| 久久精品国产综合久久久| 香蕉丝袜av| 成人高潮视频无遮挡免费网站| cao死你这个sao货| 女同久久另类99精品国产91| 最近在线观看免费完整版| 日韩免费av在线播放| 热99re8久久精品国产| 亚洲精品在线观看二区| 老司机午夜福利在线观看视频| 午夜福利欧美成人| 天堂影院成人在线观看| 免费高清视频大片| 少妇的逼水好多| 亚洲九九香蕉| 亚洲成人久久爱视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 国内精品久久久久久久电影| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 精品日产1卡2卡| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 9191精品国产免费久久| 日本a在线网址| 国产精品一区二区精品视频观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 久久中文看片网| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲国产欧美人成| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美黑人巨大hd| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品欧美国产一区二区三| 久久精品人妻少妇| 国产成人欧美在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 91老司机精品| 舔av片在线| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久精品影院6| av黄色大香蕉| 男人舔女人下体高潮全视频| 午夜免费激情av| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲五月天丁香| 亚洲欧美日韩东京热| 久久中文字幕一级| 少妇的逼水好多| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 九色国产91popny在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 在线a可以看的网站| 久久久国产成人免费| 国产野战对白在线观看| 国产久久久一区二区三区| 日韩高清综合在线| 女同久久另类99精品国产91| 中国美女看黄片| 国产视频一区二区在线看| 丝袜人妻中文字幕| 两人在一起打扑克的视频| 12—13女人毛片做爰片一| 精品欧美国产一区二区三| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲国产精品成人综合色| 日本成人三级电影网站| 在线观看午夜福利视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 热99在线观看视频| 亚洲第一电影网av| 男人舔女人下体高潮全视频| 成熟少妇高潮喷水视频| www日本黄色视频网| 国产成人欧美在线观看| 国产野战对白在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 日本与韩国留学比较| 老司机午夜十八禁免费视频| 色在线成人网| 精品久久久久久久末码| 亚洲国产高清在线一区二区三| 欧美乱妇无乱码| 国产高潮美女av| 免费在线观看成人毛片| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美一级毛片孕妇| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 欧美3d第一页| 色在线成人网| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| or卡值多少钱| 中文资源天堂在线| 偷拍熟女少妇极品色| 国产午夜精品论理片| 中文字幕熟女人妻在线| 中文字幕高清在线视频| 国产三级黄色录像| 丁香六月欧美| 久久久久久大精品| 亚洲午夜理论影院| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲av片天天在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 午夜日韩欧美国产| 舔av片在线| 国产精品亚洲美女久久久| 免费观看人在逋| 欧美日韩瑟瑟在线播放| av视频在线观看入口| 国产黄片美女视频| 久久久久国内视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 婷婷六月久久综合丁香| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 成在线人永久免费视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产成人精品久久二区二区91| 动漫黄色视频在线观看| 少妇的丰满在线观看| 香蕉av资源在线| 亚洲成av人片在线播放无| 在线观看午夜福利视频| 最好的美女福利视频网| 国产高清三级在线| 一夜夜www| 不卡一级毛片| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产成年人精品一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲成a人片在线一区二区| 18禁国产床啪视频网站| 国产伦在线观看视频一区| 嫁个100分男人电影在线观看| 最好的美女福利视频网| 亚洲人成网站高清观看| 久久中文字幕一级| 欧美日韩黄片免| 欧美成人免费av一区二区三区| 变态另类丝袜制服| 精品福利观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 91麻豆精品激情在线观看国产| 99久久99久久久精品蜜桃| a在线观看视频网站| 亚洲自拍偷在线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| av视频在线观看入口| 久久久久久九九精品二区国产| 99热这里只有精品一区 | 国产精品一区二区免费欧美| 国产黄色小视频在线观看| 三级国产精品欧美在线观看 | 中文字幕人妻丝袜一区二区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 在线观看日韩欧美| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 黑人操中国人逼视频| 午夜福利视频1000在线观看| 美女免费视频网站| 啦啦啦韩国在线观看视频| 夜夜爽天天搞| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| av视频在线观看入口| 又粗又爽又猛毛片免费看| 中文字幕最新亚洲高清| 男女之事视频高清在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲第一电影网av| 免费观看人在逋| 老熟妇仑乱视频hdxx| www.熟女人妻精品国产| 我要搜黄色片| 一区二区三区高清视频在线| www.熟女人妻精品国产| 精品国产乱码久久久久久男人| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲国产精品久久男人天堂| av在线天堂中文字幕| av在线蜜桃| 麻豆av在线久日| 午夜影院日韩av| 欧美最黄视频在线播放免费| 精品久久久久久久末码| 无遮挡黄片免费观看| 窝窝影院91人妻| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲国产精品999在线| 看片在线看免费视频| 男插女下体视频免费在线播放| 美女午夜性视频免费| 亚洲av成人一区二区三| av国产免费在线观看| 中文字幕高清在线视频| 日本与韩国留学比较|