新疆果園不同寄主腐爛病菌交互侵染研究

朱宗財(cái),張王斌,2,李亞鵬,嚴(yán)海璘，儀子博

(1.塔里木大學(xué)植物科學(xué)學(xué)院，新疆阿拉爾 843300；2.塔里木大學(xué)南疆農(nóng)業(yè)有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆阿拉爾 843300)

0 引 言

【研究意義】新疆果園主要是以蘋果和庫(kù)爾勒香梨為主。在我國(guó)中西部和西南省區(qū)，均將蘋果產(chǎn)業(yè)列為經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)[1]。新疆蘋果產(chǎn)量在全國(guó)蘋果產(chǎn)量所占比只有2%左右，但新疆蘋果具有明顯的產(chǎn)業(yè)發(fā)展優(yōu)勢(shì)，特別是阿克蘇地區(qū)的冰糖心蘋果[2]。庫(kù)爾勒香梨作為新疆的特色果業(yè)，在我國(guó)的梨產(chǎn)業(yè)中占有重要地位，庫(kù)爾勒香梨的收入已占到農(nóng)民人均收入的1/3[3]。腐爛病是普遍存在的一類重要病害，造成許多木質(zhì)宿主死亡[4]。腐爛病在新疆的發(fā)生逐年加重嚴(yán)重影響了該地區(qū)林果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[5-6]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】蘋果樹腐爛病(ValsamaliMiyabeetYamada)在新疆阿克蘇局部地區(qū)發(fā)生嚴(yán)重，主要原因是當(dāng)年冬季干旱少雪，發(fā)生凍害，導(dǎo)致了腐爛病嚴(yán)重發(fā)生[7]。D.E.Brown-Rytlewski 和 P.S.McManus在美國(guó)威斯康星州首次發(fā)現(xiàn)蘋果腐爛病，并確定為L(zhǎng)eucostoma(Cytospora)引起的[8]。Alan R.Biggs等[9]的研究結(jié)果表明,蘋果腐爛病病原菌的無(wú)性型為蘋果干腐爛殼囊孢菌(CytosporamandshuricaMiura)，屬無(wú)性孢子類殼囊泡屬，有性型為蘋果黑腐皮殼菌(ValsamaliMiyabeetYamada)，屬子囊菌門黑腐皮殼屬。王衛(wèi)雄[10]利用多基因聯(lián)合分析甘肅省蘋果樹腐爛病菌的類群。庫(kù)爾勒香梨樹腐爛病菌為梨幹腐爛殼蕉孢菌 (C.carphospermaFr.)屬于半知菌亞門殼囊孢屬[11-12]。新疆楊樹腐爛病病原有性型為子囊菌亞門的污黑腐皮殼屬(ValsasordidaNit)，其無(wú)性型為金黃殼囊孢菌(Cytosporachrysosperm)。病原菌交互侵染主要發(fā)生于人與動(dòng)物之間，而在植物間也發(fā)現(xiàn)病原菌的交互侵染。呂蕊花等[13]發(fā)現(xiàn)油菜(BrassicanapusL.)和桑葚(FructusMori)的菌核病菌存在交互侵染。朱婕[14]發(fā)現(xiàn)新疆庫(kù)爾勒香梨和楊樹腐爛病的癥狀十分相似，進(jìn)行室內(nèi)枝條接種試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)兩種腐爛病存在交互侵染。交互侵染還存在于禾本科作物之間，研究發(fā)現(xiàn)稻瘟病在雜交稻和糯稻(OryzasativaL.var.GlutinosaMatsum)之間可以進(jìn)行交互侵染[15]。黃萎病作為一種棉花(Gossypiumspp.)的主要病害，研究發(fā)現(xiàn)黃萎病可以在棉花、向日葵(HelianthusannuusL.)、苘麻(AbutilontheophrastiMedicus)、綠豆(Vignaradiata(Linn.)Wilczek)、榆樹(UlmuspumilaL.)、白菜(Brassicarapavar.glabra)和茄子(SolanummelongenaL.)之間交互侵染，所以在棉區(qū)要避免這幾種作物的混種[16]。在瓜類上也存在交互侵染的情況，例如瓜類白粉菌(Erysiphecucurbi-tacearumZhengetchen)可以在甜瓜(Cucumismelo)、黃瓜(CucumissativusL.)、西葫蘆(CucurbitapepoL.)和南瓜(Cucurbitamoschata)上交互侵染[17]。B.K.M.Lakshmi[18]研究了熱帶水果的重要病害炭疽病(ColletotrichumgloeosporioidesPenz)，他將不同寄主來(lái)源的炭疽病(Bacillusanthracis)分別在芒果(MangiferaindicaL.)、酸橙(CitrusaurantiumL.)、番荔枝(AnnonasquamosaLinn)、石榴(PunicagranatumL.)、木瓜(Chaenomelessinensis(Thouin)Koehne)、腰果(AnacardiumoccidentalieLinn)和番石榴(PsidiumguajavaLinn)發(fā)現(xiàn)這七種水果之間存在交互侵染?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】以新疆果園為微生態(tài)環(huán)境，研究不同寄主間腐爛病菌是否存在交互侵染?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】采集新疆阿克蘇地區(qū)五團(tuán)果園蘋果、庫(kù)爾勒香梨和新疆楊的腐爛病病樣，分離純化，通過(guò)科赫氏法則驗(yàn)證后進(jìn)行交互接種。將菌株的β-tubulin和EF-1α基因序列在GenBank查找并下載同源序列，采用鄰結(jié)法(Neighbor-joining，NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，進(jìn)行序列分析。分析新疆果園微生態(tài)環(huán)境下不同寄主間腐爛病菌是否存在交互侵染情況。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試菌株

表1 供試腐爛病菌株信息
Table 1 Information of rot pathogen strains tested

分離株Lsolote寄主Host地點(diǎn)OriginWT-PG-1蘋果(Malus pumila)新疆阿克蘇地區(qū)WT-PG-2蘋果(Malus pumila)新疆阿克蘇地區(qū)WT-PG-3蘋果(Malus pumila)新疆阿克蘇地區(qū)WT-PG-4蘋果(Malus pumila)新疆阿克蘇地區(qū)WT-XJY-1新疆楊(Populus bolleana)新疆阿克蘇地區(qū)WT-XJY-2新疆楊(Populus bolleana)新疆阿克蘇地區(qū)WT-XL香梨(Pyrus sinkiangensis)新疆阿克蘇地區(qū)

1.2 方 法

1.2.1 室內(nèi)交叉接種

將經(jīng)過(guò)科赫氏法則驗(yàn)證的菌株接種于PDA(Potato Dextrose Agar)平板25℃培養(yǎng)3 d，接種方法參考嚴(yán)海璘等[19]略有改進(jìn)。在塔里木大學(xué)校內(nèi)分別采集蘋果、新疆楊和庫(kù)爾勒香梨1～2年生枝條，將采集來(lái)的枝條用枝剪成長(zhǎng)度為10 cm的小枝條。先用純凈水清洗2～3次，再用蒸餾水清洗2～3次，待供試枝條水分干之后，用75%酒精擦拭消毒。將16×2(cm)消毒盤用處理枝條的方法進(jìn)行處理后，在消毒盤上鋪上2層紗布，將其置于無(wú)菌操作臺(tái)用紫外燈滅菌5 min。將5 mm打孔器沾酒精置于酒精燈火焰上進(jìn)行消毒，在處理過(guò)的枝條上進(jìn)行燙傷打孔，將培養(yǎng)3 d的菌株用5 mm打孔器打成菌餅接種于枝條上，置于消毒盤，重復(fù)10次。向消毒盤加入適量的無(wú)菌水，用保鮮膜進(jìn)行封口。將其置于25℃培養(yǎng)箱光照/黑暗(12 h/12 h)培養(yǎng)，每天觀察發(fā)病情況。

1.2.2 菌絲體的培養(yǎng)與收集

將暗培養(yǎng)3 d的菌株用打孔器取5～6個(gè)菌餅放置于含有50 mL PD的150 mL的錐形瓶中，置于25℃搖床160 r/min培養(yǎng)5 d。用無(wú)菌處理的紗布過(guò)濾菌塊，用無(wú)菌水沖洗3次，再用滅菌的濾紙吸干水分，經(jīng)冷凍干燥后，保存于-80℃超低溫冰箱中備用。

1.2.3 菌絲體基因組總DNA的提取

采用改進(jìn)的CTAB法提取菌株基因組總DNA[20-21]。將保存于-80℃超低溫冰箱的菌體拿出，加入液氮研磨成粉，加入提前65℃預(yù)熱的2×CTAB，迅速劇烈震蕩，65℃水浴30 min。加入500 μL氯仿(CHCl3)和500 μL的Tris飽和酚，劇烈震蕩混勻。將其置于4℃冷凍高速離心機(jī)12 000 r/10 min。取上清與新的離心管，加入1 mL氯仿(應(yīng)等于上清體積)，劇烈震蕩混勻。將其置于4℃冷凍高速離心機(jī)12 000 r/10 min(中間白色層基本消失時(shí)可進(jìn)行沉淀)。取上清至新的離心管中，加入1 mL異丙醇(沉淀DNA)和100 μL的乙酸鈉(輔助沉淀)，溫和顛倒混勻。置于-20℃沉淀2 h，之后置于室溫放置5 min，12 000 r/10 min，棄上清。加入1 mL 75%酒精并將沉淀從管底彈起，使其浮與酒精中。12 000 r/10 min，棄上清(超凈工作臺(tái)吹10 min)。加入適量Tris-EDTA緩沖液，-20℃保存。

1.2.4 EF-1α和β-tubulin基因的PCR擴(kuò)增

采用EF-1α的通用引物728F(5'-CATCGAGAAGTTCGAGAAGG-3')和986R(5'-ACTTGAA

GGAACCCTTACC-3')擴(kuò)增EF-1α基因片段[22-23]；采用通用引物Bt2a(5'-GGTAACCAAATCGG

TGCTGCTTTC-3')和Bt2b(5'-ACCCTCCAGTGTAGTGACCCTTGGC-3')擴(kuò)增β-tubulin基因片段。表2

EF-1α反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性4 min；94℃變性30s，55℃退火45s，72℃延伸30s，40個(gè)循環(huán)；最后，72℃延伸10 min，4℃保存；β-tubulin反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性3 min，94℃變性30s，61℃退火30s，72℃延伸 1 min，共38個(gè)循環(huán)，接著72℃延伸10 min，最后并于4℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖進(jìn)行電泳檢測(cè)后，由上海生工科技股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。

表2 PCR擴(kuò)增體系
Table 2 PCR amplification system

反應(yīng)液Reaction Content體積Volume(μL)5'Primer1.03'Primer1.0Taq MasterMix5.0Template1.0ddH2OTotal volume17.025.0

1.2.5 EF-1α和β-tubulin基因的序列對(duì)比和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建

將各個(gè)菌株的EF-1α和β-tubulin基因的序列提交至NCBI中GenBank的BLAST程序與已知序列進(jìn)行對(duì)比并下載同源序列。用DNAMAN中Sequence程序的multiple sequence Alignment進(jìn)行對(duì)比，并用MEGA 7.0.26[24]中的Align DNA分析進(jìn)行人工調(diào)整，刪除兩端不齊的堿基，采用鄰接法(Neighbor-joining，NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，全面分析系統(tǒng)發(fā)育樹的各分支序列。

2 結(jié)果與分析

2.1 枝條交互侵染接種

研究表明，來(lái)源于蘋果、新疆楊和庫(kù)爾勒香梨的腐爛病病菌在進(jìn)行交互侵染時(shí)，均能夠引起發(fā)病。其中寄主為庫(kù)爾勒香梨的腐爛病菌侵染新疆楊枝條發(fā)病最早，在接種第1 d出現(xiàn)病斑，侵染蘋果的在第2 d出現(xiàn)病斑。寄主為新疆楊的腐爛病菌的腐爛病侵染庫(kù)爾勒香梨和蘋果枝條發(fā)病次之，均在第3 d出現(xiàn)病斑。寄主為蘋果的腐爛病菌侵染庫(kù)爾勒香梨枝條發(fā)病較晚，在第4 d出現(xiàn)病斑，侵染新疆楊枝條在第3 d出現(xiàn)病斑。發(fā)病率100%的為蘋果腐爛病菌侵染庫(kù)爾勒香梨枝條(B)、楊樹腐爛病菌侵染庫(kù)爾勒香梨枝條(D)和庫(kù)爾勒香梨腐爛病菌侵染蘋果枝條(F)。發(fā)病率80%的為楊樹腐爛病菌侵染蘋果枝條(C)。發(fā)病率70%的為蘋果腐爛病菌侵染新疆楊枝條(A)。新疆楊枝條接種腐爛病菌后病斑為暗褐色。庫(kù)爾勒香梨枝條接種腐爛病菌后，病斑初期為暗黃色，后期在病斑周圍呈黑色。蘋果枝條接種腐爛病菌后病斑為暗黃色。圖1

注：A：蘋果腐爛病菌侵染新疆楊枝條；B：蘋果腐爛病菌侵染庫(kù)爾勒香梨枝條；C：楊樹腐爛病菌侵染蘋果枝條；D：庫(kù)爾勒香梨腐爛病侵染新疆楊枝條；E：楊樹腐爛病菌侵染庫(kù)爾勒香梨枝條；F：庫(kù)爾勒香梨腐爛病菌侵染蘋果枝條

Note: A: Xinjiang Poplar branch infected by Apple canker; B: Fragrant Pear branch infected by Apple canker; C: Apple infected branch by Xinjiang Poplar canker; D: Xinjiang Poplar branch infected by Fragrant Pear canker; E: Fragrant Pear branch infected by Xinjiang Poplar canker; F: Apple branch infected by Fragrant Pear canker

圖1 室內(nèi)交互侵染結(jié)果
Fig. 1 The result of the indoor interactive infection

2.2 菌株總DNA的提取及檢測(cè)

運(yùn)用改良的CTAB法提取菌株的總DNA結(jié)果表明，經(jīng)1%瓊脂糖進(jìn)行電泳檢測(cè)后，條帶清晰，所提DNA可用于下步實(shí)驗(yàn)。圖2

圖2 DNA提取結(jié)果
Fig. 2 The result of the DNA

2.3 β-tubulin和EF-1α基因的PCR擴(kuò)增

β-tubulin的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖進(jìn)行電泳檢測(cè)后，結(jié)果顯示，條帶清楚，大小約為280 bp。圖3

圖3 供試菌株β-tubulin擴(kuò)增結(jié)果
Fig. 3 The result of the PCR amplification products of β-tubulin sequences

2.4 EF-1α基因的PCR擴(kuò)增

EF-1α的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖進(jìn)行電泳檢測(cè)后，結(jié)果顯示，條帶清楚，大小約為500 bp。圖4

圖4 供試菌株EF-1α擴(kuò)增結(jié)果
Fig. 4 The result of the PCR amplification products of EF-1α sequences

2.5 β-tubulin和EF-1α序列

將各個(gè)菌株的β-tubulin和EF-1α基因的序列提交至NCBI中GenBank的BLAST與已知序列進(jìn)行對(duì)比并下載同源序列。

將下載的同源性較高的16個(gè)β-tubulin序列與分離的7個(gè)菌株的β-tubulin序列，利用MEGA 7.0.26軟件分析。β-tubulin序列分析顯示主要分為三大類并且三大類的延展度大于99。其中來(lái)源于蘋果、新疆楊和庫(kù)爾勒香梨的腐爛病β-tubulin序列與各自同源序列聚為一支。來(lái)源于蘋果和新疆楊的腐爛病菌的病原為Valsamalivar，其中來(lái)源于蘋果的腐爛病菌的病原為Valsamalivar.mail，來(lái)源于新疆楊的腐爛病菌的病原為Valsamalivar.pyil。來(lái)源于庫(kù)爾勒香梨的腐爛病菌的病原為valsasordida。蘋果樹腐爛病菌的8個(gè)同源序列寄主都為蘋果，而新疆楊腐爛病菌的5個(gè)同源序列中寄主有梨和蘋果。庫(kù)爾勒香梨腐爛病菌的3個(gè)同源序列寄主都為楊樹。表3，表4

將下載的同源性較高的10個(gè)EF-1α序列與分離的7個(gè)菌株的EF-1α序列，利用MEGA 7.0.26軟件分析。EF-1α序列分析顯示主要分為三大類并且三大類的延展度大于99。EF-1α序列分析結(jié)果顯示蘋果樹腐爛病菌的5個(gè)同源序列寄主都為蘋果，而新疆楊腐爛病菌的3個(gè)同源序列都為蘋果。庫(kù)爾勒香梨腐爛病菌的2個(gè)同源序列寄主都為楊樹。

表3 供試菌株β-tubulin序列的同源序列
Table 3 Homologous sequence of the β-tubulin sequence of tested strains

分離株Isolate同源序列Homologous sequence相似度SimilarityWT-PG-1,WT-PG-2, WT-PG-3,WT-PG-4JQ900342、JQ900344、JQ900348、JQ900349JQ900352、JQ900355、JQ900357、KT934371超過(guò) 98%WT-XJY-1,WT-XJY-2 JQ900358、JQ900364、JQ900366、KT934372、KT93436999%WT-XLKT590410、KT934375、KT934376超過(guò) 96%

表4 供試菌株EF-1α序列的同源序列
Table 4 Homologous sequence of the EF-1α sequence of each isolate

分離株Isolate同源序列Homologous sequence相似度SimilarityWT-PG-1,WT-PG-2, WT-PG-3,WT-PG-4JQ900314、JQ900317、JQ900319、JQ900320JQ900323超過(guò)97%WT-XJY-1,WT-XJY-2KX273798、KX273819、KX27381099%WT-XLJX438549、TX438550超過(guò) 96%

在基于β-tubulin序列和EF-1α序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹中，7株不同寄主來(lái)源的菌株主要分為兩大支分別是Valsamalivar和valsasordida，其中蘋果的腐爛病菌為Valsamalivar.mail，寄主為新疆楊的為Valsamalivar.pyil。其中寄主為蘋果和新疆楊的腐爛病菌同屬一大支，相較于寄主為庫(kù)爾勒香梨的腐爛病病菌親緣關(guān)系近。圖5，圖6

圖5 β-tubulin序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹 (NJ)
Fig. 5 Phylogram using β-tubulin equences data

圖6 EF-1α序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹 (NJ)
Fig. 6 Phylogram (NJ) constructed by EF-1 α sequence data

3 討 論

研究以新疆蘋果園為微生態(tài)環(huán)境，研究不同寄主間腐爛病菌是否存在交互侵染。在新疆獨(dú)特的綠洲農(nóng)業(yè)中形成了多種林木共存的特點(diǎn)，在一定程度上增加了不同寄主間腐爛病交互侵染的頻率。在對(duì)采集來(lái)的蘋果、新疆楊和庫(kù)爾勒香梨樹腐爛病病樣進(jìn)行分離純化后，經(jīng)過(guò)科赫氏法則驗(yàn)證，進(jìn)行交互接種，發(fā)現(xiàn)均可成功侵染。除了室內(nèi)接種分析外，還利用腐爛病菌株的β-tubulin基因和 EF-1α基因序列在NCBI下載同源序列，利用鄰結(jié)法進(jìn)行建樹對(duì)腐爛病菌進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，寄主為蘋果的腐爛病菌的同源序列寄主為蘋果，但寄主為新疆楊的同源序列的寄主有蘋果和梨，寄主為庫(kù)爾勒香梨的同源序列寄主為楊樹，結(jié)合交互侵染實(shí)驗(yàn)可以證明這腐爛病菌在蘋果、新疆楊和庫(kù)爾勒香梨之間可交互侵染。有研究表明不同寄主來(lái)源的腐爛病菌在不同的寄主之間存在交互侵染[25-26]。唐俊煜等[11]研究了棗園不同林木腐爛病之間的親緣關(guān)系，結(jié)果顯示不同寄主的腐爛病可能存在交互侵染。與研究結(jié)果一致。交互侵染不僅存在于林果腐爛病之間，在其他作物間也有發(fā)生。有研究表明，馬鈴薯和向日葵的大麗輪枝菌也存在交互侵染[27]。引起小麥、玉米、水稻、谷子和高粱等作物紋枯病這5種禾谷類作物均可交互侵染[28]。西瓜與棉花的枯萎病菌、小麥與水稻的霜霉病、玉米與高粱的絲黑穗菌之間存在交互侵染[29-31]。Phoulivong S W等[32]從辣椒、咖啡、龍眼、芒果、木瓜和辣椒的果實(shí)中分離出炭疽菌菌株，進(jìn)行了交互侵染，結(jié)果發(fā)現(xiàn)均能夠進(jìn)行交互感染。O.M.Olanya等[33]在馬鈴薯種植地的毛龍葵(Solanumsarrachoides)上發(fā)現(xiàn)了馬鈴薯晚疫病(Phytophthorainfestans(Mont.)deBary)，研究發(fā)現(xiàn)馬鈴薯晚疫病在毛龍葵與馬鈴薯上存在交互侵染。Mark L.Farman[34]研究發(fā)現(xiàn)馬唐、水稻或狗尾草的灰斑病分離株不會(huì)引起黑麥草(Loliumperenne)灰斑病流行，引起黑麥草灰斑病是由P.grisea種群引起的。

這些存在交互侵染的作物首先在地理位置上來(lái)說(shuō)相鄰種植，而且在遺傳距離上來(lái)說(shuō)也較近。進(jìn)而造成這些作物在發(fā)生一些病害時(shí)會(huì)存在交互侵染。在新疆南疆地區(qū)果園栽培模式下，尤其在阿克蘇地區(qū)，蘋果果園、庫(kù)爾勒香梨園和紅棗園臨近種植的現(xiàn)象十分普遍，個(gè)別果園甚至存在多個(gè)樹種共存的現(xiàn)象，而楊樹作為行道樹和果園農(nóng)田防護(hù)林隨處可見(jiàn)。由于新疆楊耐旱成活率高的特點(diǎn)，進(jìn)而果園大都以新疆楊為防護(hù)林。所以在一定程度上增加了林果樹木腐爛病的交互侵染。研究發(fā)現(xiàn)腐爛病菌在蘋果、新疆楊和庫(kù)爾勒香梨之間存在交互侵染，因此，發(fā)生腐爛病的果園可通過(guò)周邊防護(hù)林向未發(fā)生的腐爛病果園傳播。在進(jìn)行果園腐爛病防治時(shí)，應(yīng)該充分考慮存在交互侵染的現(xiàn)象，把果園周圍防護(hù)林也納入防治范圍。當(dāng)周圍果園腐爛病嚴(yán)重時(shí)，要加強(qiáng)防范意識(shí)，提前做好預(yù)防措施。新建果園時(shí)應(yīng)該更加關(guān)注病害之間的交互侵染的問(wèn)題，使果園潛在病害發(fā)生率降到最低，以達(dá)到增產(chǎn)增收的目的。研究在室內(nèi)條件下，研究了林果樹腐爛病菌在蘋果、新疆楊和庫(kù)爾勒香梨可交互侵染，但是其在田間的侵染行為尚需驗(yàn)證和其流行規(guī)律也需要進(jìn)一步深入研究。

4 結(jié) 論

4.1 室內(nèi)利用枝條接種交互侵染發(fā)現(xiàn)來(lái)源于蘋果、庫(kù)爾勒香梨和新疆楊的腐爛病病菌均能夠互相侵染成功。其中寄主為庫(kù)爾勒香梨的腐爛病菌侵染新疆楊枝條發(fā)病最早、寄主為新疆楊的腐爛病菌的腐爛病侵染庫(kù)爾勒香梨和蘋果枝條發(fā)病次之、寄主為蘋果的腐爛病菌侵染庫(kù)爾勒香梨枝條發(fā)病較晚。進(jìn)行室內(nèi)枝條接種還發(fā)現(xiàn)有4組發(fā)病率為100%，其余兩組均在70%以上。

4.2 寄主為蘋果的腐爛病菌的同源序列寄主為蘋果，但寄主為新疆楊的同源序列的寄主有蘋果和梨，寄主為庫(kù)爾勒香梨的同源序列寄主為楊樹。而且這7株不同寄主來(lái)源的菌株主要分為兩大支分別是Valsamalivar和valsasordida，其中寄主為蘋果和新疆楊的腐爛病菌同屬一大支，相較于寄主為庫(kù)爾勒香梨的腐爛病病菌親緣關(guān)系近。

4.3 室內(nèi)條件下林果樹木腐爛病菌在蘋果、新疆楊和庫(kù)爾勒香梨之間存在交互侵染。