高效液相色譜在中藥研究中的應(yīng)用

莫愁

摘要：高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是在本世紀60年代末期，在經(jīng)典液相色譜法和氣相色譜法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新型分離分析技術(shù)，它具有快速、高效、靈敏、準確等優(yōu)點，在醫(yī)藥衛(wèi)生、食品、環(huán)保等各個領(lǐng)域已得到了廣泛的應(yīng)用。本文主要分析探討了高效液相色譜在中藥研究中的應(yīng)用情況，以供參閱。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜;中藥;應(yīng)用

引言

高效液相色譜技術(shù)是一種重要的分離分析方法，于20世紀60年代末在經(jīng)典液相柱色譜的基礎(chǔ)上引進氣相色譜的理論與技術(shù)，采用高壓輸液泵、高效固定相和高靈敏度的檢測器并加以改進而發(fā)展形成。HPLC可分析高沸點、難揮發(fā)和對熱不穩(wěn)定的化合物，離子型化合物和高聚物乃至生物大分子等物質(zhì)。HPLC具有分離效能高、分析速度快、靈敏度高、色柱可反復(fù)使用、流動相可選擇范圍寬、流出組易收集、操作自動化、適用范圍廣和安全的優(yōu)點。

1高效液相色譜在中藥研究中的應(yīng)用

1.1在中藥含量測定方面的應(yīng)用

中藥材及中成藥的成分十分復(fù)雜，其有效成分不一，對不同藥物，其活性成分可能是單一的，也可能有多種成分共同作用，這就對控制藥品質(zhì)量提出了較高的要求。傳統(tǒng)的薄層色譜分析方法在精密度，準確度和重現(xiàn)性方面都不能滿足中藥現(xiàn)代化的需求。高效液相色譜法以其建立含量測定方法簡便易行、結(jié)果準確可靠、重現(xiàn)性好、便于對各類藥物進行質(zhì)量控制等眾多優(yōu)點，逐漸成為中藥材及各類制劑含量測定的首選方法。段啟等采用高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地梔子中藏紅花素的含量所建立的方法，為中藥梔子的質(zhì)量評價提供了科學(xué)依據(jù)。在中成藥制劑方面，黃權(quán)芳等建立的壯藥清熱顆粒中木犀草素的含量測定方法，加樣回收率較高，重現(xiàn)性好，為其質(zhì)量控制標準化提供了參考資料。阮桂平等建立的HPLC可同時測定珠黃吹喉散中兩種有效成分兒茶素和鹽酸小檗堿的含量，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1.2在中藥指紋圖譜中的應(yīng)用

利用I-WLe技術(shù)進行中藥的標準化，建立藥材或中成藥特征的色譜或光譜的圖譜是一種有效的方法。如在對中藥山茱萸藥材的括紋圖譜的研究中，采用相關(guān)系數(shù)法計算不同樣品指紋圖譜之問相似度，結(jié)果表明指紋圖譜相似度大小與藥材品質(zhì)有關(guān)。

1.3在中藥炮制中的應(yīng)用

用化學(xué)分析方法來研究中藥炮制機理是中藥炮制研究的主要手段。近幾年來，HPLC法在中藥炮制研究中的應(yīng)用也有很大發(fā)展。賈天柱等采用高效液相法對肉豆蔻及其炮制品揮發(fā)油中肉豆蔻醚、黃樟醚進行了測定。此法快速、準確地證明肉豆蔻醚在炮制后有不同程度的降低，從而使毒性降低，闡明了炮制機理。趙淑杰等用HPLC法測定梔子產(chǎn)地加工炮制品酶解前后梔子甙含量，證明梔子經(jīng)蒸氣或沸水燙后，基本上起到了殺酶保甙的作用。王靜竹等，用HPLC法測定黃芪炮制品中黃芪甲甙含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，炮制對黃芪中黃芪甲甙含量的影響較大，從0.272mg/g～0.842mg/g不等，但總體上炮制品均比生品中黃芪甲甙的含量低。中醫(yī)認為黃芪不同炮制品種，主治有所不同，可能的黃芪不同炮制過程中不同成分之間的消長及新成分的生成有關(guān)，這些還有待于進一步研究。傅梅紅等用HPLC法測定關(guān)白附生品及不同炮制品中次烏頭堿含量，結(jié)果表明姜礬煮、豆腐煮后次烏頭堿下降率為98%，而蒸4h后次烏頭堿下降率為100%，說明了炮制解毒的機理是使主要毒性成分含量下降，此測定也給炮制工藝改進工作打下了基礎(chǔ)。此外，楊江豐等采用柱切換高效液相色譜法測定了五加皮酒中橙皮甙及齊墩果酸的含量，該方法通過對不同性能的色譜柱或不同流動相的選擇，能有效地把復(fù)雜制劑中的有效成分得到良好的分離，也可用前柱的富集作用測定中藥中微量活性物質(zhì)或選擇性地測定某個有效成分，為中藥研究提供了一個很好的實驗方法。

1.4在中藥藥物動力學(xué)中的應(yīng)用

趙淑紅等采用HPLC測定血漿藥物濃度，采用SHIM-PACKVPODS色譜柱，流動相為甲醇乙腈水（5：10：85），檢測波長為271nm，流速1.0Ml/min，用DAS軟件計算藥物動力學(xué)參數(shù)。通過此方法，研究了秦艽中龍膽苦苷在家兔體內(nèi)的藥代動力學(xué)規(guī)律并建立了家兔血漿中龍膽苦苷的HPLC檢測方法。賈巍等用HPLC測大鼠血漿中紅景天苷的濃度，色譜柱AlltimaC18柱（150mm×4.6mm，5m），流動相為甲醇水（20：80），柱溫室溫，流速1.0mL/min，檢測波長275nm，應(yīng)用WinNolin藥物動力學(xué)軟件處理實驗數(shù)據(jù)，并探討在大鼠體內(nèi)紅景天苷的藥物動力學(xué)過程，研究為紅景天的新藥設(shè)計、劑型評價及臨床應(yīng)用提供了科學(xué)的依據(jù)。

2高效液相色譜在中藥分析中的應(yīng)用前景

中藥研究的大趨勢是全成分分析，通過對從單味藥到復(fù)方的不同配伍、煎煮時間等的研究，才能發(fā)現(xiàn)中藥中化學(xué)成分的變化規(guī)律，找到中藥機理之間的有機聯(lián)系。中藥成分繁多，且各種成分的性質(zhì)遍布所有極性段、酸堿范圍。實現(xiàn)多成分分析的最簡單途徑即在一根足夠長的色譜柱上，采用溫和的流動相，在足夠久的時間內(nèi)洗脫。但這與現(xiàn)代分析要求的簡便快速相違。通過大量的應(yīng)用研究表明，高效毛細管電泳在分析中藥成分，尤其在分析高極性化學(xué)成分方面有較大優(yōu)勢，在分析大量的復(fù)方制劑方面顯示了較高的能力。由于毛細管幾乎不會出現(xiàn)高效液相色譜分析中常出現(xiàn)的柱床污染現(xiàn)象，而且用過的毛細管柱只需很短的時間進行沖洗后，即可以進行第二個樣品的分析，快速高效且分辨率很高。新興的毛細管電色譜是集高效液相色譜和毛細管電泳優(yōu)勢于一身的一種新型電分離微柱液相色譜技術(shù)，它是將高效液相色譜的多種填料微粒移到毛細管中，以樣品與固定相間的相互作用作為分離機制，以電滲流為流動相驅(qū)動力的色譜過程。最近，一些先進的檢測儀器成功的用在了高效液相色譜分析法上，使得高效液相色譜的應(yīng)用更廣泛，并充分利用高效快速、選擇性好、靈敏度高等優(yōu)點，建立更加系統(tǒng)的成分分析方法。通過與質(zhì)譜聯(lián)用、梯度洗脫、柱切換技術(shù)、配合先進的檢測技術(shù)，以及與分子生物學(xué)、現(xiàn)代分子藥理學(xué)相結(jié)合，必將在中藥分析中發(fā)揮很大作用。

結(jié)束語

總而言之，HPLC是一種新興的技術(shù)手段，與許多傳統(tǒng)分析方法相比具有多方面的優(yōu)勢。目前，很多學(xué)者正致力于其在天然藥物方面更為廣泛的應(yīng)用研究。相信隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，HPLC必將藥物研究領(lǐng)域展現(xiàn)更好的應(yīng)用前景，日后也會有更多先進、快捷的分析方法不斷涌現(xiàn)及更新。