豬附紅細胞體病實驗室診斷

張志慶

摘要：依照山東省菏澤市牡丹區(qū)某養(yǎng)殖場生豬養(yǎng)殖現(xiàn)狀，整合養(yǎng)殖場豬群發(fā)病死亡的主要原因，通過無菌采集方式獲取發(fā)病豬血液作為檢驗病料，應(yīng)用血涂片、細菌分離培養(yǎng)、病毒核酸檢驗等方式進行實驗室應(yīng)用診斷。從結(jié)果中獲取結(jié)論，其中細菌分離培養(yǎng)以及病毒核酸檢驗結(jié)果大多都表現(xiàn)為陰性，通過血涂片操作顯示出大多數(shù)紅細胞邊緣整齊度較差，存有不同不規(guī)則形狀，能適應(yīng)紅細胞體基本感染特征，其養(yǎng)殖場此例豬群發(fā)病重要原因是附紅細胞體感染。

關(guān)鍵詞：豬;附紅細胞體病;實驗室診斷

中圖分類號：S858.28? 文獻標識碼：B???? doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.14.052

0引言

附紅細胞體病主要是由附紅細胞體誘發(fā)疾病，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、溶血性貧血、黃疸等人畜共患傳染病，該病病原體屬于支原體科，此病大多發(fā)生在夏秋時節(jié)，容易產(chǎn)生流行性，加上病害寄主范圍較廣，在目前多種動物養(yǎng)殖中都會產(chǎn)生。

1實驗室診斷材料與方法

在檢測病科中主要通過無菌采集方式獲取5頭病豬血液，在試劑選用中主要是應(yīng)用革蘭氏染色液、RNA快速抽提試劑盒、基因組DNA提取試劑盒。豬圓環(huán)病毒2型、繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、乙型腦炎病毒等。在細菌分離培養(yǎng)中，在潔凈度較高的工作臺中，通過滅菌接種環(huán)提取相應(yīng)的抽檢血液樣本，將其在鮮血以及常見的瓊脂培養(yǎng)基中均勻性涂抹，成功接種后在培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)箱環(huán)境中倒置培養(yǎng)16?24 h，實驗人員要對菌落具體變化現(xiàn)狀進行分析。在病毒核酸提取中，通過RNA抽提試劑盒對總RNA快速提取。之后做好cDNA以及PCR擴增操作，對PCR產(chǎn)物凝膠電泳現(xiàn)狀進行分析，在1.2%瓊脂糖凝膠上將獲取的PCR進行電泳，再將凝膠塊能放人到凝膠成像儀器中，對其結(jié)果進行分析。在血涂片檢查中，要應(yīng)用革蘭氏染色鏡進行檢驗，對血涂片革蘭氏進行染色操作，實驗人員要通過顯微鏡進行觀察檢查。在姬姆薩染色鏡檢操作中，選取常用方法對血涂片進行合理制備，等到血膜全部干后，應(yīng)用甲醇進行固定。在染色架中放置血涂片，及時滴加稀釋成功的姬姆薩染色液，使其能在完整的血膜中進行覆蓋，在正常室溫狀態(tài)下將其染色15?30 min。實驗人員選取適量蒸餾水從玻片端進行沖洗，玻片風(fēng)干后及時進行鏡檢^[1]。

2結(jié)果與分析

對患有紅細胞體病的病死豬進行剖檢能得出，生豬脂肪層、內(nèi)臟器官等處都受到不同程度感染，泛發(fā)性黃疸表現(xiàn)突出。生豬全身肌肉群開始變色黯淡，血液大多都是表現(xiàn)為水樣狀態(tài)，凝固性較差。全身淋巴結(jié)腫大問題較為嚴重，切面呈現(xiàn)出外翻現(xiàn)象，潮紅突出，有諸多液體滲出。肝臟腫大問題嚴重，質(zhì)地脆弱，細胞大多是表現(xiàn)為脂肪變性問題，主要是為黃棕色以及土黃色。膽囊腫大突出，并且膽汁濃稠度較高，脾臟位置腫大明顯，質(zhì)地脆弱。在膀胱粘膜中布有不同程度血點，心肌松軟蒼白，腦部位置存有嚴重積液問題。

將鮮血營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與普通瓊脂培養(yǎng)基通過接種血液后，37℃環(huán)境中通過16 h培養(yǎng)，并未能發(fā)現(xiàn)菌落存在生長現(xiàn)狀。在病毒核算檢驗中，選取各類特異引物對核酸樣本采取PCR擴增措施，將獲取的產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中進行電泳，未能出現(xiàn)預(yù)期擴增條帶，各個病毒在檢測過程中主要表現(xiàn)為陰性。在血涂片檢查結(jié)果分析中能得出，技術(shù)人員對血涂片革蘭氏染色鏡檢并未發(fā)現(xiàn)細菌存在。從姬姆薩染色鏡檢現(xiàn)狀中能得出，在可見范圍內(nèi)諸多紅細胞開始發(fā)生明顯變形問題，其原有的光滑形態(tài)開始逐步喪失，邊緣處平整度較差，開始展示出層次不齊的不規(guī)則形狀。在紅細胞表層中大量附著的病原體會被染成不規(guī)則性顆粒，技術(shù)人員基于油鏡進行觀察，其外部不規(guī)則現(xiàn)象突出，中間位置明亮度較高，將其判定為附紅細胞體。

在試驗開展中主要對5個發(fā)病豬血液樣本進行細菌分離培養(yǎng)操作，對血涂片進行全面檢查，做好病毒核酸規(guī)范化檢測，對附紅細胞體感染問題進行確診。附紅細胞體屬于嗜血支原體科，該病一年四季在生豬養(yǎng)殖中均會發(fā)生，其中夏秋季節(jié)高發(fā)，可以基于垂直以及水平方式進行傳播，大量昆蟲等會對此類病害進行傳播。在生豬長期養(yǎng)殖中養(yǎng)殖環(huán)境較差，管理措施不合理，養(yǎng)殖環(huán)境溫度變化較快等都會導(dǎo)致病情全面擴大，帶來較為嚴重的經(jīng)濟損失。目前針對附紅細胞體病在診斷中可選取的診斷應(yīng)用措施較多，如應(yīng)用較多的血涂片檢查診斷方式，但是此類方式僅是作為實驗輔助性方式，因為其會產(chǎn)生假陽性結(jié)果，誘發(fā)誤判問題。在實驗診斷中應(yīng)用速率較快的是酶聯(lián)免疫吸附試驗，但是此類方法在具體應(yīng)用中受到檢測抗原純度影響會產(chǎn)生諸多假陰性結(jié)果，目前都是在各類流行病學(xué)檢查中應(yīng)用。在診斷方法應(yīng)用中分子生物學(xué)診斷技術(shù)應(yīng)用重要性較強，在臨床中應(yīng)用較多的是PCR技術(shù)，其敏感性與特異性突出。雖然針對此類疾病可以選取多種診斷方式，但是由于生豬患病后各項表現(xiàn)不明顯，對疾病診斷工作開展具有較大限制作用^[2]。

3預(yù)防與治療措施

在生豬現(xiàn)代化規(guī)模養(yǎng)殖中要對養(yǎng)殖飼養(yǎng)各個環(huán)節(jié)進行規(guī)范化管理，在養(yǎng)殖活動中投入充足高營養(yǎng)含量的全價飼料，確保豬群能健康生長。要對養(yǎng)殖環(huán)境溫度情況進行控制，做好養(yǎng)殖區(qū)域通風(fēng)以及溫度控制工作。對飼養(yǎng)中存有的各類應(yīng)激因素進行控制。在豬附紅細胞體病高發(fā)階段，要及時采取針對性措施對吸血昆蟲進行殺滅。技術(shù)人員要定期對針頭、注射器等進行全面消毒處理，在疫苗接種及治療注射中，1頭生豬使用1個針頭^[3]。在母豬接產(chǎn)中要及時選取針對性消毒控制措施。養(yǎng)殖中技術(shù)人員要強化養(yǎng)殖環(huán)境消毒處理，定期對豬舍環(huán)境進行清理，對生豬排泄物進行清除，做好衛(wèi)生消毒工作與驅(qū)動管理操作。最大程度降低生豬養(yǎng)殖中病害發(fā)生幾率。在日常投喂飼料中補充適量金霉素、四環(huán)素、土霉素、阿散酸等，對豬附紅細胞體病具有良好預(yù)防應(yīng)用成效。

如在每噸飼料中要補充48 g金霉素或是在每升飲水中添加50 mg金霉素，連續(xù)應(yīng)用1周時間，能對豬附紅細胞體病發(fā)生情況進行控制。在母豬分娩前要依照其體重大小，以11 mg/kg體重為標準注射土霉素，能有效防控母豬發(fā)病，針對1日齡仔豬每頭注射50 mg土霉素，能對仔豬發(fā)病情況進行控制。在藥物防治過程中，針對每千克體重通過靜脈注射10?15 mg新胂凡納明，再應(yīng)用相同方式注射葡萄糖注射液與維生素C，連續(xù)注射3d。在每噸飼料中投入600?800 g土霉素，設(shè)定2?3個療程，相關(guān)技術(shù)人員依照3 mg/kg體重注射相應(yīng)的四環(huán)素。對于患病仔豬，在治療中應(yīng)用磺胺-5-甲氧嘧啶注射液進行肌肉注射，連續(xù)施加1次，連續(xù)應(yīng)用3d。在豬附紅細胞體病患病初期，可應(yīng)用三氮脒進行防治，但是針對于病重豬效果不佳。生豬每千克體重注入5?7 g三氮脒，通過深度肌肉注射，間隔48 h注射1次。在阿散酸施加中，每噸飼料投入180 g，連續(xù)施加1周。

4結(jié)束語

通過一例豬附紅細胞體病的實驗室診斷得出，該類疾病在診斷中可應(yīng)用的方法較多。要結(jié)合一例豬附紅細胞體病發(fā)病具體現(xiàn)狀采取針對性預(yù)防控制措施，降低豬附紅細胞體病發(fā)病幾率，提升豬養(yǎng)殖成效。

參考文獻

[1]張喜懿，溫貴蘭，張升波，等.一例豬附紅細胞體病的實驗室診斷[J].貴州畜牧獸醫(yī)，2019，43（2）：27-30.

[2]鄢長慶，楊明.一例豬附紅細胞體病的診斷與治療[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2018（7）：96-97.

[3]張垂調(diào).一例豬附紅細胞體病的診治[J].福建畜牧獸醫(yī)，2016（1）：43.