UPLC-MS/MS法測(cè)定蜂蜜中4種喹諾酮類(lèi)藥物殘留

譚順中 程燕 譚美齡

摘 要：本研究旨在建立UPLC-MS/MS法測(cè)定蜂蜜中4種喹諾酮類(lèi)藥物殘留。方法：蜂蜜樣品用80%甲醇水溶解，經(jīng)Prime HLP固相萃取柱凈化，超高效液相電噴霧串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)，外標(biāo)法定量。結(jié)果：本方法在10、25、50 ng/mL添加水平的回收率為為72.48%～103.22%，RSD均不大于10.00%。結(jié)論：在最佳色譜條件下，本研究建立的UPLC-MS/MS法具有較好的線性、回收率和精密度，可用于測(cè)定蜂蜜中4種喹諾酮類(lèi)藥物殘留。

關(guān)鍵詞：Prime HLP;喹諾酮類(lèi);UPLC-MS/MS

蜂蜜是蜜蜂從開(kāi)花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中經(jīng)過(guò)充分釀造而成的天然甜物質(zhì)，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和較高的藥用價(jià)值。喹諾酮類(lèi)藥物為人工合成的一類(lèi)廣譜抗菌藥，具有抗菌譜廣、價(jià)格低、無(wú)交叉耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，不僅在臨床有著極其廣泛的應(yīng)用，還被廣泛應(yīng)用在獸藥領(lǐng)域。由于喹諾酮類(lèi)藥物在預(yù)防和治療過(guò)程中的不規(guī)范使用，許多動(dòng)物源性食品常存在該類(lèi)藥物的殘留[1]。我國(guó)農(nóng)業(yè)部為保障動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量安全和公共衛(wèi)生安全也于2015年決定在食品動(dòng)物中停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種原料藥的各種鹽、酯及其各種制劑。

本研究擬通過(guò)建立UPLC-MS/MS法對(duì)50批蜂蜜中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種喹諾酮類(lèi)藥物殘留進(jìn)行測(cè)定，對(duì)我國(guó)在食品動(dòng)物中停止使用這4種藥物以來(lái)，蜂蜜中這四種藥物的殘留情況進(jìn)行小范圍的調(diào)查研究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Thermo TSQ Quantum Access Max超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、IKA? MS 3 digital渦旋振蕩器，Biotage Tulbovap ? LV 氮吹濃縮儀。

洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（均為100 μg/mL），諾氟沙星-D5對(duì)照品（10μg/mL）;甲醇（色譜純）、乙酸銨（優(yōu)級(jí)純）、超純水。

1.2 方法

1.2.1 液相色譜和質(zhì)譜條件

Waters BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7μm）。流動(dòng)相：A.5 mmol/L乙酸銨溶液（含0.1%甲酸水溶液），B.甲醇。梯度洗脫：0～2.0 min，流動(dòng)相A為90%并保持，2.0～3.5 min，流動(dòng)相A從90%線性變至10%，并保持至4.5 min。6.5～6.6 min，流動(dòng)相B從90%線性回至10%，并保持至10 min。流速：0.20 mL/min。進(jìn)樣量：5 μL。柱溫：40 ℃。質(zhì)譜條件見(jiàn)表1。

1.2.2 樣品采樣

蜂蜜樣品來(lái)至重慶市3個(gè)區(qū)縣（萬(wàn)州、云陽(yáng)、開(kāi)州），采樣環(huán)節(jié)主要為超市、小賣(mài)店、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)等流通環(huán)節(jié)以及蜜蜂養(yǎng)殖戶等生產(chǎn)環(huán)節(jié)，主要品種為洋槐蜜、油菜花、椴樹(shù)、棗花蜜等10種蜂蜜，共計(jì)50份樣品。

1.2.3 工作曲線的繪制

準(zhǔn)確移取適量的喹諾酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用甲醇稀釋并配制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1μg/mL）。用空白樣品基質(zhì)溶液配制濃度為1.0、5.0、10、20、50 ng/mL 的基質(zhì)工作曲線，其中諾氟沙星D5內(nèi)標(biāo)濃度為20 ng/mL，均以內(nèi)標(biāo)法定量。

1.2.4 樣品處理

稱取2.0 g蜂蜜樣品于50 mL離心管中，加入 200 μL 1.0 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液（諾氟沙星D5），加入10 mL 80%甲醇水溶解，振蕩混勻，過(guò)prime HLB柱凈化，流出液在40 ℃氮吹濃縮至近干。用1 mL 初始流動(dòng)相復(fù)溶，渦旋過(guò)0.22 μm濾膜，待測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 固相萃取柱的選擇

查閱相關(guān)文獻(xiàn)，本研究選擇了MCX

陽(yáng)離子交換固相萃取小柱、HLB、PRiME HLB三種固相萃取柱進(jìn)行凈化，通過(guò)加標(biāo)回收比較[2]。從回收率來(lái)看，HLB固相萃取柱和PRiME HLB萃取柱的回收率差不多，而MCX陽(yáng)離子交換柱的回收率偏低。從過(guò)柱過(guò)程來(lái)看，HLB固相萃取柱和MCX陽(yáng)離子交換柱均存在易堵塞凈化柱，速度慢，需經(jīng)過(guò)活化-淋洗-洗脫等步驟，耗時(shí)較長(zhǎng)，重現(xiàn)性不理想等問(wèn)題。而Oasis PRiME HLB 固相小柱是在Oasis HLB 固相小柱技術(shù)基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的新一代反相固相萃取柱，屬于過(guò)濾性除去雜質(zhì)固相小柱，可以有效地吸附樣品中蛋白質(zhì)和磷脂類(lèi)物質(zhì)，較以往HLB固相萃取柱具有更簡(jiǎn)單、更快速優(yōu)勢(shì)[3]。

因此本研究前處理采用PRiME HLB一步法提取和凈化蜂蜜樣品，前處理簡(jiǎn)單，并且基質(zhì)干擾較小、靈敏度較高，能得到較為滿意的效果。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 線性范圍、定量限和檢出限

以峰面積對(duì)對(duì)照品濃度（ng/mL）進(jìn)行回歸分析，在濃度范圍為

1.0 ng/mL～50 ng/mL，4種化合物曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.996～0.999。按S/N=3計(jì)算檢出限，檢出限均為：

1.0 μg/kg。

2.2.2 回收率和精密度

在經(jīng)測(cè)定不含洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種喹諾酮類(lèi)藥

物陰性樣品中進(jìn)行回收率和精密度試驗(yàn)。在陰性樣品中添加低中高3個(gè)水

平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按本方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，回收率范圍為72.48%～103.22%，RSD均不大于10.0%。

2.3 實(shí)際樣品的測(cè)定

應(yīng)用本方法對(duì)50批蜂蜜進(jìn)行了分析測(cè)定，樣品種類(lèi)洋槐蜜、油菜花、椴樹(shù)、棗花蜜等10種蜂蜜。50批樣品中均未檢出洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種喹諾酮類(lèi)藥物[4]。

3 結(jié)論

本文建立了UPLC-MS/MS法測(cè)定蜂蜜中4種喹諾酮類(lèi)藥物殘留，蜂蜜樣品用80%甲醇水溶解，經(jīng)PrimeHLB固相萃取柱凈化，超高效液相電噴霧串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法前處理簡(jiǎn)單，且基質(zhì)干擾較小、靈敏度較高，能得到較為滿意的結(jié)果。50批蜂蜜樣品測(cè)定結(jié)果表明洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種喹諾酮類(lèi)藥物在本次抽檢的區(qū)域控制情況良好。

參考文獻(xiàn)

[1]闞廣磊，王小娟，魏洪濤，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)蜂蜜中15 種喹諾酮類(lèi)和17 種磺胺類(lèi)藥物殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2017，9（8）：3571-3578.

[2]張婧，潘娟，嚴(yán)鳳，等.基于PRiME HLB 前處理技術(shù)的雞蛋中四環(huán)素類(lèi)藥物的快速篩選方法研究[J].中國(guó)獸藥雜志，2018，52（3）：52-57.

[3]李磊，周貽兵，張權(quán)，等.QuEChERS 凈化超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定雞蛋中13 種喹諾酮類(lèi)抗生素[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2018，45（24）.

[4]候美玲，周純潔，黃思瑜，等.固相萃取-超高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)檢測(cè)雞蛋中的10 種喹諾酮類(lèi)藥物殘留[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2018，34（6）：795-800.

作者簡(jiǎn)介：譚順中（1990—），男，漢族，重慶人，本科，工程師。研究方向：食品與藥品檢測(cè)與分析。