Xpert MTB/RIF檢測結(jié)核分枝桿菌的應(yīng)用價值

孫菱　郭桂英　楊建科　歐陽慧　王燕玲　姚莉　成莉

【摘 要】目的：探討Xpert MTB/RIF檢測結(jié)核分枝桿菌在結(jié)核感染診斷中的臨床應(yīng)用價值。方法：回顧分析2019年6月至8月我院151例臨床患者標(biāo)本，所有樣本均同時采用抗酸染色法、Xpert MTB/RIF試驗進(jìn)行檢測，并對檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：Xpert MTB/RIF檢測的總陽性率明顯高于抗酸染色法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。采用Xpert MTB/RIF法檢測不同類型樣本的陽性率依次為：痰樣本陽性率56.3%、灌洗液陽性率40.0%、胸水陽性率5.2%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：Xpert MTB/RIF技術(shù)檢測MTB具有簡單、快速、敏感性高等優(yōu)點，在結(jié)核分枝桿菌及其對利福平耐藥的快速檢測方面有良好的應(yīng)用

前景。

【關(guān)鍵詞】結(jié)核分枝桿菌;Xpert 結(jié)核分枝桿菌/利福平試驗;抗酸染色

【中圖分類號】R52 【文獻(xiàn)識別碼】B 【文章編號】1002-8714（2019）11-0011-02

【Abstract】Objective：To investigate the clinical application value of Xpert Mycobacterium tuberculosis（MTB）/rifampicin（RIF）assay in the diagnosis of tuberculosis. Methods A total of 151 patients were determined by XpertMTB/RIF assayand acid-fast stain，respectively. The results were compared.Results The positive rates of Xpert MTB/RIF assay for all types of samples were higher than those of acid-fast stain，and the difference is statistically significant（P<0.05）.Conclusions? Compared with acid-fast stain， Xpert MTB/RIF assayis simple， rapid and sensitive，and has a good application prospect.

【Key words】Mycobacterium tuberculosis;Xpert MTB/RIF assay;acid-fast stain

我國一直是世界上結(jié)核疫情較嚴(yán)重的國家之一，目前用于診斷結(jié)核病的方法有抗酸桿菌染色和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)，但在臨床使用的過程中，前者陽性率低，后者周期長，可能延誤診斷及治療[1]。近幾年來，新的分子檢測方法Xpert MTB/RIF逐步發(fā)展，可在2h同時對MTB和RIF耐藥進(jìn)行檢測[2]。我們對Xpert MTB/RIF與抗酸染色法以及Xpert MTB/RIF技術(shù)檢測情況進(jìn)行了比較，初步探討Xpert MTB/RIF技術(shù)的臨床應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本來源

收集樂山市人民醫(yī)院2019年6月至8月同時進(jìn)行了抗酸涂片檢查和Xpert MTB/RIF的151例患者樣本，樣本包括痰80例、支氣管肺泡灌洗液35例、胸水19例，以及腹水、腦脊液、尿、膿液等非呼吸道標(biāo)本17例。

1.1.2 儀器和試劑

抗酸桿菌染色液購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司;Xpert MTB/RIF 檢測試劑盒購自美國 Cepheid 公司。

1.2 方法

對所有標(biāo)本同時進(jìn)行 Xpert MTB/RIF 檢測、抗酸染色法檢測。

1.2.1 抗酸染色法 按照《結(jié)核病實驗室標(biāo)準(zhǔn)化操作與網(wǎng)絡(luò)建設(shè)》進(jìn)行操作。

1.2.2 Xpert MTB/RIF核酸擴(kuò)增檢測

按試劑說明書對各類標(biāo)本分別進(jìn)行前處理，然后渦旋振蕩15s，靜置15min，取2mL處理后的樣本加入反應(yīng)盒，然后將反應(yīng)盒放入檢測模塊，儀器開始進(jìn)行自動化檢測。反應(yīng)結(jié)束后對MTB及RIF結(jié)果進(jìn)行判讀。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，抗酸染色和Xpert MTB/RIF陽性率的比較采用McNemar檢驗;三種不同樣本陽性率之間的比較采用Pearson檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

Xpert MTB/RIF試驗陽性率41.7%（63/151）高于抗酸染色法27.2%（41/151），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.00）。

Xpert MTB/RIF技術(shù)檢測呼吸道不同類型樣本陽性檢出率比較，其陽性率由高到低依次為痰[56.3%（45/80）]>灌洗液[40.0%（14/35）]>胸水[5.2%（1/19）]。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=16.58，P=0.00）。

3 討論

結(jié)核感染是目前世界公共衛(wèi)生面臨的最為嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)之一。目前國內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院對結(jié)核分枝桿菌的檢測還是依賴于抗酸染色涂片鏡檢，鏡檢方法簡單快速，但是靈敏度不高，容易導(dǎo)致漏診。培養(yǎng)方法分離出結(jié)核分枝桿菌是診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)，但結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)對實驗室生物安全級別要求高，在國內(nèi)大多醫(yī)院還未開展，且培養(yǎng)周期長不利于結(jié)核病的早期診斷。

XpertMTB/RIF是一種能在2小時內(nèi)完成結(jié)核分枝桿菌和利福平耐藥性快速檢測的方法。Xpert MTB/RIF為全自動一體化熒光定量PCR儀，其最低檢測限值低于TB-DNA，且手工時間僅需約20min。這種新型的診斷方法是由美國Cepheid公司開發(fā)的，Xpert MTB/RIF 基于全自動半巢式實時熒光定量 PCR 原理，將樣本的準(zhǔn)備、擴(kuò)增、檢測集于一體，對結(jié)核分枝桿菌特有的序列rpo B基因進(jìn)行檢測。Xpert MTB/RIF 有5條分子信標(biāo)探針，覆蓋目標(biāo)基因，第6條探針用于質(zhì)量控制。與傳統(tǒng)的結(jié)核檢測方法相比，XpertMTB/RIF更加簡便、快捷、安全、準(zhǔn)確，其對硬件設(shè)備和人員的要求比較低，成本也在可接受的范圍內(nèi)，且在診斷結(jié)核分枝桿菌感染的同時對利福平耐藥一并進(jìn)行了檢測，在結(jié)核病診治中具有非常重要的作用。

本研究通過比較Xpert MTB/RIF與痰涂片抗酸染色鏡檢的陽性率，初步探討其在診斷結(jié)核感染方面的價值，結(jié)果表明，其陽性率明顯高于痰涂片抗酸染色鏡檢法，提示可以通過 Xpert MTB/RIF聯(lián)合痰涂片抗酸染色鏡提高診斷結(jié)核感染的敏感度，降低漏檢率。另外，通過比較Xpert MTB/RIF檢測不同標(biāo)本陽性率，發(fā)現(xiàn)其診斷價值受到標(biāo)本類型的影響。但由于本次研究采用的標(biāo)本量較少，結(jié)果存在一定局限性，接下來應(yīng)收集更多標(biāo)本以彌補(bǔ)此不足，且增加培養(yǎng)結(jié)果?？傊瓽ene Xpert系統(tǒng)具有簡便快速、安全、敏感性高等優(yōu)點，XpertMTB/RIF在結(jié)核病診斷以及利福平耐藥檢測等方面必將具有廣闊的應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn)

[1] Bates M，Ogrady J，Maeurer M，et al. Assessment of the xpert MTB / RIF assay for diagnosis of tuberculosis with gastric lavage as-pirates in children in sub-Saharan Africa：a prospective descriptive study[J].Lancet Infect Dis，2013，13（1） ： 36-42.

[2] Lawn SD，Nicol MP.Xpert MTB/ RIF assay： development，evaluation and implementation of a new rapid molecular diagnostic for tuberculosis and rifampicin resistance[J].Future Microbiol，2011，6（9）：1067-1082.