• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    外源硝普鈉與EDTA強化黑麥草耐鎘性及鎘積累

    2019-10-16 03:04:48陳為峰董元杰
    植物營養(yǎng)與肥料學報 2019年9期
    關鍵詞:黑麥草脯氨酸二者

    張 倩,陳為峰,董元杰

    (山東農(nóng)業(yè)大學資源與環(huán)境學院/土肥資源高效利用國家工程實驗室,山東泰安 271018)

    隨著工業(yè)的發(fā)展以及城市的快速擴張,我國土壤重金屬污染日益嚴重,其中鎘因在土壤中含量較高(0.05~0.38 mg/kg)[1]且對人類健康威脅較大而被確定為優(yōu)先控制的重金屬[2]。鎘易被植物吸收積累,從而影響其生長發(fā)育,最終導致作物減產(chǎn)[1,3]。作物中的鎘通過食物鏈進入人體,還會對人體重要器官造成損害,并可能導致癌癥和其他致命的健康危害[4]。因此,尋找有效的修復方法以減輕土壤鎘污染的社會需求十分迫切。

    植物修復是一種簡便有效且環(huán)境友好的土壤污染修復方法,但目前發(fā)現(xiàn)的超富集植物普遍具有生物量小、生長周期長等問題[5-7]。黑麥草(Lolium perenneL.)是我國北方草坪的常用草,它對鎘的富集能力強、適應性廣、覆蓋面積大、生長速度快且產(chǎn)量高[8-9]。通過對黑麥草重復修剪收割,可以逐漸減少土壤中重金屬離子的含量[10]。

    一氧化氮(nitric oxide,NO)是一種植物體內普遍存在的氣體信號分子,在植物抵抗逆境脅迫過程中起重要作用[11-12]。研究表明,NO參與了植物對重金屬脅迫的反應調控[13]。硝普鈉(sodium nitroprusside,SNP)是一種廣泛應用的金屬-NO配合物,在水溶液中溶解時能夠釋放NO,因此普遍用作外源NO供體[14]。研究表明,外源添加SNP能夠有效緩解鎘對黑麥草的毒害作用[15-16]。乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetra acetic acid,EDTA)是一種人工合成的螯合劑,研究表明EDTA能夠活化土壤中的重金屬,促進重金屬向植株地上部運輸,進而提高植物對重金屬的修復作用[17]。Han等[18]研究認為,EDTA處理提高了喜鹽鳶尾地上與地下部Pb、Cd的積累量。還有研究表明,施用EDTA能夠提高黑麥草中Pb、Cd、Zn的積累[19-20]。到目前為止,已有部分關于植物生長調節(jié)劑與重金屬螯合劑聯(lián)用強化植物修復效率的報道,但有關SNP與EDTA聯(lián)合施用對重金屬污染土壤植物修復影響的研究尚未見報道。

    因此,本研究以黑麥草為研究對象,研究鎘脅迫下外源添加SNP與EDTA對黑麥草生理特性及鎘積累的影響,以期明確SNP與EDTA強化黑麥草修復土壤鎘污染的效應與機制,為SNP與EDTA在強化植物修復土壤重金屬方面的應用提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    試驗于2018年3月在山東農(nóng)業(yè)大學資源與環(huán)境學院植物營養(yǎng)學實驗室進行。選取大小均勻、無病蟲害的黑麥草(紳士)種子,經(jīng)0.1%的HgCl2消毒處理后,置于SPX-2501C型人工智能氣候箱中25℃下恒溫培養(yǎng)。待種子露白后,播于洗凈的蛭石中,萌發(fā)后用1/2 Hoagland營養(yǎng)液澆灌,1周后每盆移苗25株,完全營養(yǎng)液培養(yǎng),營養(yǎng)液調pH至6.5~6.8,幼苗生長條件的室內晝/夜溫度為25/18℃,光強為100 μmol/(m2·s),光照時間 14 h/d。

    1.2 試驗設計

    試驗共設8個處理,其中4個為非Cd脅迫處理,包括Hoagland營養(yǎng)液處理(CK)及在營養(yǎng)液中加入 0.5 mmol/L EDTA(EDTA)、100 μmol/L SNP(SNP)、0.25 mmol/L EDTA 和 50 μmol/L SNP(EDTA + SNP);另外, 4個Cd脅迫處理為以上4個處理中添加100 μmol/L CdCl2,分別記為Cd、Cd +EDTA、Cd + SNP、和Cd + EDTA + SNP,每個處理重復三次,每盆每次用250 mL配制的混合液進行處理。每2 d換一次營養(yǎng)液,處理18 d后進行各項指標的測定。

    1.3 測定項目及方法

    株高、鮮重和干重采用常規(guī)直尺測量和天平稱量方法。光合色素含量采用乙醇提取、紫外分光光度法測定。

    電解質滲出率采用DDS-307A電導儀測定初電導值S1,封口沸水浴20分鐘后冷卻并測定終電導值S2。相對電導值(%)= S1/S2× 100;電解質滲出率(%)=(樣品相對電導值-對照相對電導值)/(100%-對照相對電導值)× 100。產(chǎn)生速率采用羥胺氧化反應法測定,H2O2含量測定參照Patterson等[21]的方法,超氧化物歧化酶(SOD)活性測定采用氮藍四唑(NBT)法,過氧化物酶(POD)活性測定采用愈創(chuàng)木酚法,過氧化氫酶(CAT)、抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性測定采用紫外分光光度法[22]。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    采用Microsoft Office Excel 2010 軟件處理數(shù)據(jù)和繪表,采用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析,采用Duncan法(P<0.05)進行差異顯著性檢驗。

    2 結果與分析

    2.1 不同處理對Cd脅迫下黑麥草生長的影響

    由表1可知,非鎘脅迫下外源添加SNP和EDTA顯著降低黑麥草株高和根長,與單獨添加相比,二者復合添加有一定緩解作用但差異不顯著。Cd處理顯著抑制了黑麥草生長,與CK相比,Cd處理下黑麥草株高、根長分別降低28.3%和27.5%,鮮重和干重分別顯著降低37.1%和38.0%。添加SNP能夠緩解鎘對黑麥草的脅迫作用,二者復合處理同樣緩解了鎘對黑麥草的生長抑制。其中Cd +EDTA + SNP處理的株高、根長較Cd處理分別增加了68.8%和59.6%,鮮重和干重分別顯著增加了62.6%和60.0%。

    表1 外源SNP與EDTA對黑麥草生長及根系活力的影響Table1 Effects of extraneous SNP and EDTA on growth and root activity of ryegrass under Cd stress

    根系活力反映了植物根系的生長狀況與生命力強弱。由表1可知,非鎘脅迫下,外源添加EDTA、SNP及二者復合處理顯著抑制了黑麥草的根系活力,較CK處理分別降低了17.5%、8.93%和4.62%;而與單獨添加相比,二者復合添加顯著提升其根系活力。與CK相比,Cd處理顯著降低了黑麥草的根系活力。鎘脅迫下,單獨添加SNP與EDTA處理的黑麥草根系活力較Cd處理分別提高了34.4%和71.0%,二者復合處理下其根系活力較Cd處理提高了107%,差異顯著。說明SNP與EDTA均可提高黑麥草在鎘脅迫下的根系活力以促進其生長,其中二者復合施用效果更加明顯。

    由表2可知,非鎘脅迫下,SNP和EDTA單獨添加或者同時添加均顯著降低了黑麥草葉中葉綠素和胡蘿卜素的含量,尤以EDTA的負作用最大。鎘脅迫顯著降低了黑麥草光合色素的含量。與CK相比,Cd處理的黑麥草葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素的含量分別降低32.2%、23.9%、22.7%。鎘脅迫下,添加SNP顯著提高了黑麥草Chl a、Chl b和類胡蘿卜素的含量,添加EDTA沒有顯著作用,同時添加EDTA + SNP提高色素含量的效果顯著大于SNP和EDTA單獨施用。EDTA + SNP處理的葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素的含量比Cd處理分別提高了82.5%、55.6%和82.4%,甚至顯著高于CK。由此說明SNP與EDTA復合處理能夠明顯緩解黑麥草鎘脅迫,提高其耐鎘性。

    表2 外源SNP與EDTA下黑麥草光合色素含量(mg/g,F(xiàn)W)Table2 Chlorophyll contents of ryegrass affected by extraneous SNP and EDTA

    2.2 不同處理對Cd脅迫下黑麥草活性氧產(chǎn)生的影響

    如圖1所示,非鎘脅迫下,SNP和EDTA單獨添加或者同時添加均顯著提高了黑麥草的產(chǎn)生速率和H2O2含量,其中單獨添加EDTA作用最明顯。Cd處理顯著提高了黑麥草的產(chǎn)生速率和H2O2含量。與CK相比,Cd處理下黑麥草地上和地下部產(chǎn)生速率分別提高了48.1%、64.0%,地上部和地下部H2O2含量分別提高了78.6%、103%,說明鎘脅迫引起了黑麥草的過氧化作用。外源添加SNP與EDTA均可降低其產(chǎn)生速率和H2O2含量,其中二者復合施用效果最明顯。與Cd處理相比,Cd + SNP +EDTA處理葉片和根系中的產(chǎn)生速率分別降低了29.0%和26.1%,H2O2含量分別減少了42.5%和40.2%,且均差異顯著。

    圖1 添加SNP和EDTA黑麥草葉和根中超氧陰離子產(chǎn)生速率(A)及過氧化氫含量(B)Fig.1 generation rate(A)and H2O2 content(B)in leaf and root of ryegrass affected by extraneous SNP and EDTA

    由圖2A可見,非鎘脅迫下,SNP和EDTA單獨添加或者同時添加均顯著提高了黑麥草丙二醛(MDA)含量。Cd脅迫下黑麥草葉片和根系丙二醛含量均顯著增加,從而促使脂膜過氧化,對黑麥草產(chǎn)生傷害。與CK相比,Cd處理下黑麥草葉片和根系的MDA含量分別提高了104%和42.5%。添加SNP與EDTA均能減少MDA積累,其中二者復合施用效果更明顯。與Cd處理相比,Cd + SNP +EDTA處理中葉片和根系MDA含量分別降低了30.4%、21.8%,且差異性顯著,說明其對提高黑麥草耐鎘性有較好的效果。

    圖2 添加外源SNP與EDTA黑麥草丙二醛含量(MDA)及電解質滲出率Fig.2 MDA content and electrolyte leakage of ryegrass affected extraneous SNP and EDTA under Cd stress

    鎘脅迫下黑麥草電解質滲出率顯著增加(圖2B)。與CK相比,Cd處理下黑麥草電解質滲出率增加了61.7%。而添加SNP與EDTA可降低其電解質滲出率,其中SNP單獨施用和二者復合處理均與Cd處理差異顯著。與Cd處理相比,Cd + SNP + EDTA處理下黑麥草電解質滲出率降低了31.3%,表現(xiàn)出較好的緩解作用。

    2.3 不同處理對Cd脅迫下黑麥草抗氧化酶活性的影響

    非鎘脅迫下,單獨添加EDTA顯著抑制黑麥草地上與地下部超氧化物歧化酶(SOD)活性(圖3A),與CK相比分別降低了3.03%和10.1%。鎘脅迫同樣顯著抑制黑麥草SOD活性,與CK相比,Cd處理下黑麥草地上部和地下部SOD活性分別降低了26.5%、40.3%。SNP和EDTA的單獨與復合施用均可顯著緩解這一現(xiàn)象。其中,復合處理對黑麥草地下部SOD活性的提高效果最為明顯,與Cd處理相比,Cd +SNP + EDTA處理下黑麥草地上與地下部SOD活性分別提高了32.5%、67.6%。

    過氧化物酶(POD)和抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性變化趨勢與SOD活性變化趨勢基本相似(圖3-B、D)。與CK相比,Cd處理下二者均顯著降低,其中葉片與根系中的POD活性分別降低了42.3%、17.0%,APX活性分別降低了62.9%、52.6%。但添加SNP和EDTA及二者復合處理后,POD與APX活性均有提高。與Cd處理相比,Cd + SNP + EDTA處理下黑麥草地上與地下部POD活性分別提高了49.8%、67.6%,APX酶活性分別提高了134%、102%,均具有顯著的差異性。

    為適應鎘脅迫,Cd處理下黑麥草葉片中過氧化氫酶(CAT)活性較CK有所提高,但差異不顯著(圖3C)。而與CK相比,Cd處理下黑麥草根系中CAT活性顯著降低了42.1%。SNP與EDTA的復合施用明顯提高了黑麥草根系內CAT活性,與Cd相比,Cd + SNP + EDTA處理下黑麥草CAT活性提高了45.4%,且差異顯著。

    2.4 不同處理對Cd脅迫下黑麥草脯氨酸和可溶性蛋白含量的影響

    逆境條件下植物體內脯氨酸會大量積累以增強其抗逆性。由圖4A可見,在鎘脅迫下黑麥草葉片和根系中脯氨酸含量均顯著提高。與CK相比,Cd處理下黑麥草葉片和根系中脯氨酸含量分別增加了75.0%、115%。鎘脅迫下,單獨添加EDTA降低了脯氨酸含量,但單獨添加SNP或二者復合施用均顯著提高了黑麥草脯氨酸含量,且復合施用效果更明顯。與Cd處理相比,Cd + SNP + EDTA處理下黑麥草葉片與根系脯氨酸含量分別提高了8.52%、7.43%。

    圖3 外源SNP與EDTA復合施用對鎘迫下黑麥草SOD、POD、CAT及APX酶活性的影響Fig.3 Effects of extraneous SNP and EDTA on SOD, POD, CAT and APX activities of ryegrass under Cd stress

    圖4 外源SNP與EDTA復合施用對鎘迫下黑麥草脯氨酸及可溶性蛋白含量的影響Fig.4 Effects of extraneous SNP and EDTA on proline and solution protein contents of ryegrass under Cd stress

    黑麥草可溶性蛋白含量在鎘脅迫下顯著降低(圖4B)。與CK相比,Cd處理使黑麥草葉片和根系的可溶性蛋白含量分別減少了47.9%和51.8%。單獨添加SNP與EDTA能夠提高其可溶性蛋白含量,但復合施用效果更明顯。與Cd處理相比,Cd + SNP +EDTA處理下黑麥草葉片與根系可溶性蛋白分別提高89.8%、89.1%,且差異顯著。

    2.5 不同處理對Cd脅迫下黑麥草鎘含量的影響

    由圖5可見,單獨添加SNP能夠降低黑麥草葉片中的鎘含量,同時增加其根系中鎘含量。而單獨添加EDTA或SNP和EDTA復合施用均可顯著提高黑麥草地上和地下部黑麥草鎘含量。與Cd處理相比,Cd + SNP + EDTA處理下黑麥草地上與地下部鎘含量分別提高了89.7%和30.2%,且差異顯著,表明其能夠明顯提高黑麥草地上部對鎘的吸收積累。

    圖5 外源SNP與EDTA復合施用對鎘迫下黑麥草鎘含量的影響Fig.5 Effects of extraneous SNP and EDTA on Cd content of ryegrass under Cd stress

    3 討論

    3.1 外源SNP與EDTA復合施用對鎘脅迫下黑麥草生長的影響

    本研究發(fā)現(xiàn),非鎘脅迫下單獨或復合添加EDTA與SNP均顯著抑制黑麥草生長(表1)。這可能是由于EDTA的添加增強了金屬的溶解性,破壞了礦質元素平衡,從而導致生物膜結構破壞,細胞代謝紊亂,植株光合色素含量減少,光合作用受到抑制,最終影響植株生長發(fā)育[23]。He等[19]研究表明,非鉛脅迫下外源添加EDTA能夠顯著抑制黑麥草的生長,這與本實驗結果一致。同時,有研究表明過量的NO能夠抑制光合色素合成,破壞電子傳遞鏈,造成DNA損傷,抑制植物生長發(fā)育[24],本試驗采用的SNP濃度為鎘脅迫下緩解黑麥草生長抑制的適宜濃度[15],因此在非脅迫條件下,添加該濃度的SNP可能對黑麥草生長產(chǎn)生一定的抑制作用。

    Cd脅迫會抑制植物生長、促使葉片失綠、根系活力下降和生物量下降,嚴重時甚至導致植物死亡[25]。本研究中,添加100 μmol/L的CdCl2顯著抑制了黑麥草的株高、根長、干鮮重及根系活力。鎘脅迫下單獨添加EDTA降低了黑麥草的株高根長和葉綠素含量,這可能是由于高濃度EDTA本身對植物也存在一定的脅迫作用。但添加SNP可有效緩解鎘脅迫作用,且二者復合施用效果更佳。添加SNP與EDTA可以通過提高其根系活力促進其對礦物質的吸收,同時增加光合色素的合成,能夠促進其光合作用,從而提高其耐鎘性。已有研究表明,SNP能夠在植株體內釋放NO,并通過NO調控修復鎘對黑麥草生長及葉綠素合成的抑制作用[15],這與本試驗結果(表2)一致。同時,相關研究證明SNP能夠通過提高Δ1-吡咯-5-羧酸合成酶(P5CS)活性、降低脯氨酸脫氫酶(ProDH)活性,促進脯氨酸在植物體內的合成與積累[26]。而脯氨酸可以清除ROS,提高抗氧化能力,穩(wěn)定生物大分子的結構[27]。本研究中游離脯氨酸在鎘脅迫下能夠在植物體內大量積累(圖4),而外源添加SNP與EDTA能夠進一步提高黑麥草地上、地下部游離脯氨酸含量,這與前人研究結果一致[28-29]。此外,有研究證明,豆科植物最初的葉子中60%~70%的Pb以Pb-EDTA形式存在[30]。因此,二者聯(lián)合施用對其脅迫作用緩解效果更好可能是由于黑麥草中的Cd大多以螯合態(tài)Cd-EDTA形式存在,使之積累在葉肉細胞的液泡內或柵欄組織的細胞內和細胞間隙,從而將有毒的鎘離子隔離在原生質外[31],同時添加SNP能夠緩解EDTA本身對黑麥草的生長抑制(表1),二者通過促進脯氨酸的合成,提高黑麥草的滲透調節(jié)能力,增強其耐鎘性以此維持黑麥草的正常生長。

    3.2 外源SNP與EDTA復合施用對鎘脅迫下黑麥草脂質過氧化作用的影響

    本研究發(fā)現(xiàn),非鎘脅迫下外源添加EDTA顯著抑制黑麥草抗氧化酶活性(圖3),這可能是由于EDTA能夠破壞礦質元素平衡致使細胞質膜受損、代謝紊亂[23],從而嚴重抑制了植株抗氧化酶活性,導致活性氧簇(ROS)大量積累,影響植株正常生長。Cd脅迫下,和H2O2在植物體內大量積累,同時高濃度的Cd能夠抑制植物體內抗氧化酶的活性。研究表明,ROS的積累會抑制植物的光合作用,破壞植物細胞膜結構,從而對植物的生長發(fā)育造成脅迫[32]。本研究中,Cd處理明顯提高了產(chǎn)生速率、H2O2含量(圖1)、MDA含量以及電解質滲出率,同時抑制了黑麥草中SOD、POD和APX活性(圖3),這與前人研究結果一致[15]。而外源添加SNP或二者復合施用均能緩解這一抑制作用。Fan等[33]研究表明,SNP處理下百慕大草中MDA含量明顯低于無SNP的處理,這與本試驗結果一致。Cd能夠增加細胞膜透性,而添加外源SNP能夠通過降低和H2O2的積累來減緩脅迫條件下植物的膜脂過氧化作用[34]。Dong等[35]研究表明,外源添加SNP能夠有效提高鎘脅迫下花生中抗氧化酶活性。而EDTA能夠與Cd2+形成螯合物,緩解Cd2+取代植物體內酶中心原子造成的酶失活現(xiàn)象,提高鎘脅迫下抗氧化酶活性。同時添加SNP能夠緩解EDTA本身對抗氧化酶活性的抑制作用,因此,二者復合作用效果最佳。外源添加SNP和EDTA可能是通過二者共同作用提高黑麥草體內抗氧化酶活性,清除過量積累的ROS,并修復受損細胞,從而達到緩解對黑麥草的氧化脅迫,提高其耐鎘性。

    3.3 外源 SNP與EDTA復合施用對鎘脅迫下黑麥草鎘含量的影響

    鎘進入植物地上部可能通過質外體途徑經(jīng)由細胞間隙進行遷移,也可能通過共質體途徑由原生質體通道向地上部遷移[36]。然而,研究發(fā)現(xiàn)Cd脅迫會加速細胞成熟,促進根部凱氏帶的形成,從而使Cd不易通過質外體途徑向地上部移動[37]。Qiu等[38]認為,Cd主要通過消耗能量的共質體途徑在植物體內進行轉運,質外體途徑只占較少部分。但根系細胞內液泡的區(qū)室化作用易將共質體吸收的Cd滯留在根部[39],因此一般植物地上部鎘積累量較低。本試驗結果表明,單獨添加EDTA與復合施用SNP和EDTA均顯著提高黑麥草地上部鎘含量(圖5)。有研究認為,EDTA能夠與重金屬螯合增加土壤溶液中的重金屬含量,螯合態(tài)重金屬呈中性,能夠減少根表吸附而直接進入植物根系[40]。且在金屬螯合物作用下,能夠破壞植物根系內皮層的凱氏帶[41],使重金屬更易進入根部組織并向地上部轉運。

    4 結論

    非鎘脅迫下,添加100 μmol/L SNP與0.5 mmol/L EDTA顯著抑制黑麥草生長。而鎘脅迫下添加外源SNP與EDTA緩解了黑麥草的脂質過氧化作用,提高其滲透調節(jié)能力,從而減輕了鎘對黑麥草生長的抑制作用。同時,EDTA的添加促進了黑麥草對鎘的吸收,顯著提高了黑麥草地上部的鎘積累量。本試驗各處理中,同時添加EDTA和硝普鈉的處理可提高黑麥草鎘積累,并有效增強黑麥草的耐鎘性,其效果最為明顯。

    猜你喜歡
    黑麥草脯氨酸二者
    國家藥監(jiān)局批準脯氨酸恒格列凈片上市
    中老年保健(2022年3期)2022-11-21 09:40:36
    認識草,也是一門學問
    不同行內生草影響葡萄果實品質
    Sweden's Icehotel went all out for its 30th anniversary
    黑麥草的種植、青貯及應用
    搖曳
    植物體內脯氨酸的代謝與調控
    種苗根熒光反應在多年生黑麥草與一年生黑麥草兩個種測定中可靠性驗證
    反式-4-羥基-L-脯氨酸的研究進展
    干旱脅迫對馬尾松苗木脯氨酸及游離氨基酸含量的影響
    麻豆成人av在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲国产精品999在线| 国产99白浆流出| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久香蕉激情| 亚洲国产欧美一区二区综合| 日韩欧美免费精品| 免费在线观看完整版高清| 男人舔女人的私密视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产av一区在线观看免费| 香蕉国产在线看| 日本 欧美在线| 亚洲七黄色美女视频| 90打野战视频偷拍视频| 在线永久观看黄色视频| 啦啦啦免费观看视频1| 999久久久国产精品视频| 身体一侧抽搐| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 身体一侧抽搐| 亚洲色图av天堂| 亚洲专区字幕在线| 中文资源天堂在线| 91九色精品人成在线观看| 国产片内射在线| 老司机福利观看| 精品无人区乱码1区二区| 91国产中文字幕| 真人一进一出gif抽搐免费| 十八禁人妻一区二区| 成年人黄色毛片网站| 亚洲精华国产精华精| 欧美黑人巨大hd| 男女床上黄色一级片免费看| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲国产精品sss在线观看| 波多野结衣高清无吗| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美激情久久久久久爽电影| 91九色精品人成在线观看| 国内精品久久久久精免费| 国产v大片淫在线免费观看| 国产亚洲欧美98| 亚洲人与动物交配视频| 久久久久九九精品影院| 香蕉丝袜av| 舔av片在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久精品成人免费网站| 亚洲精品久久国产高清桃花| 久久久久九九精品影院| 日本一二三区视频观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 午夜影院日韩av| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一本综合久久免费| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 999久久久精品免费观看国产| 在线观看www视频免费| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | www.精华液| √禁漫天堂资源中文www| 天堂影院成人在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产成人欧美在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 性欧美人与动物交配| 老司机午夜福利在线观看视频| www.精华液| 欧美久久黑人一区二区| 在线观看午夜福利视频| 欧美黑人巨大hd| 午夜福利视频1000在线观看| 国产单亲对白刺激| 国产99久久九九免费精品| 精品高清国产在线一区| 国产成人精品久久二区二区免费| 看免费av毛片| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美日本视频| 9191精品国产免费久久| 国产精品亚洲美女久久久| 搞女人的毛片| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 一级黄色大片毛片| 身体一侧抽搐| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美在线黄色| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 香蕉av资源在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产伦人伦偷精品视频| 久久久精品欧美日韩精品| 两个人视频免费观看高清| 毛片女人毛片| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 搡老岳熟女国产| 婷婷六月久久综合丁香| 色综合亚洲欧美另类图片| 草草在线视频免费看| 欧美黄色片欧美黄色片| 天堂√8在线中文| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲中文av在线| 日本免费a在线| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产激情欧美一区二区| 丁香六月欧美| 亚洲国产精品合色在线| 成人特级黄色片久久久久久久| 男人舔女人的私密视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 婷婷六月久久综合丁香| 十八禁网站免费在线| 黄频高清免费视频| 午夜福利在线观看吧| 后天国语完整版免费观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产av一区在线观看免费| 正在播放国产对白刺激| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品久久久久久久久久免费视频| 色综合婷婷激情| 久热爱精品视频在线9| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲全国av大片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国内揄拍国产精品人妻在线| www.999成人在线观看| 18禁美女被吸乳视频| 麻豆av在线久日| 欧美日韩一级在线毛片| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲在线自拍视频| 中文字幕高清在线视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 小说图片视频综合网站| 成人国产一区最新在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 宅男免费午夜| videosex国产| 亚洲av第一区精品v没综合| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 性欧美人与动物交配| 亚洲国产中文字幕在线视频| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲av五月六月丁香网| 大型黄色视频在线免费观看| www日本黄色视频网| 久久香蕉国产精品| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲成av人片免费观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美中文综合在线视频| 国产精品一区二区免费欧美| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 99久久综合精品五月天人人| 久久久久精品国产欧美久久久| 中文字幕久久专区| 日本熟妇午夜| 人妻夜夜爽99麻豆av| 午夜福利在线在线| 国产精品久久久久久精品电影| 国产午夜精品久久久久久| 久久精品国产亚洲av高清一级| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲avbb在线观看| 99国产精品99久久久久| 国产精品影院久久| 国产成人系列免费观看| 亚洲精品色激情综合| 欧美性猛交黑人性爽| 国产精品久久视频播放| 国产成人av教育| 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 精品电影一区二区在线| 一区福利在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产熟女午夜一区二区三区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲av电影在线进入| 亚洲五月天丁香| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲 欧美一区二区三区| 免费无遮挡裸体视频| 91字幕亚洲| 国产精品av视频在线免费观看| 中文字幕熟女人妻在线| 午夜精品久久久久久毛片777| 成人国语在线视频| 一级毛片精品| 国产精品免费视频内射| 神马国产精品三级电影在线观看 | 狂野欧美激情性xxxx| 一级毛片精品| 国产精品一区二区精品视频观看| 999久久久国产精品视频| 日本 av在线| 舔av片在线| 久99久视频精品免费| 国产精品久久电影中文字幕| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲电影在线观看av| 丁香欧美五月| 九色成人免费人妻av| 日韩大码丰满熟妇| 中出人妻视频一区二区| 脱女人内裤的视频| 亚洲国产精品合色在线| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产私拍福利视频在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 免费在线观看亚洲国产| 日本一本二区三区精品| 国产精品乱码一区二三区的特点| av中文乱码字幕在线| 亚洲成人国产一区在线观看| 香蕉丝袜av| 黄色片一级片一级黄色片| 中文字幕最新亚洲高清| 757午夜福利合集在线观看| 久久人人精品亚洲av| 十八禁网站免费在线| 嫁个100分男人电影在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 成人国产综合亚洲| 黄色 视频免费看| av在线播放免费不卡| 亚洲人成77777在线视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 两人在一起打扑克的视频| 中文在线观看免费www的网站 | 丝袜美腿诱惑在线| 很黄的视频免费| 精品国产乱子伦一区二区三区| av免费在线观看网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 变态另类丝袜制服| 久久精品成人免费网站| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 午夜福利欧美成人| 狠狠狠狠99中文字幕| e午夜精品久久久久久久| 国产精品亚洲美女久久久| 国产三级中文精品| 亚洲人成77777在线视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产午夜福利久久久久久| 精品国产美女av久久久久小说| 日本a在线网址| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产av在哪里看| 亚洲无线在线观看| 久久久久国内视频| 成人18禁在线播放| 国产视频一区二区在线看| 他把我摸到了高潮在线观看| 毛片女人毛片| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产99白浆流出| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲人成电影免费在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 在线观看免费视频日本深夜| 91麻豆精品激情在线观看国产| 在线观看午夜福利视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美日韩一级在线毛片| 中文字幕高清在线视频| ponron亚洲| 最近视频中文字幕2019在线8| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲午夜理论影院| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久99久视频精品免费| 在线观看舔阴道视频| 国产男靠女视频免费网站| 99国产综合亚洲精品| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 在线看三级毛片| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久欧美精品欧美久久欧美| 九九热线精品视视频播放| 桃色一区二区三区在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| 午夜福利成人在线免费观看| 岛国在线观看网站| av欧美777| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产av一区在线观看免费| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美午夜高清在线| 成年人黄色毛片网站| 国产1区2区3区精品| 国产三级中文精品| 黄色视频,在线免费观看| 久久草成人影院| 又黄又粗又硬又大视频| 国产不卡一卡二| 亚洲精品久久国产高清桃花| 男女那种视频在线观看| 精品国产亚洲在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 99久久精品热视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久热在线av| 日本免费一区二区三区高清不卡| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 真人一进一出gif抽搐免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲熟妇熟女久久| 午夜老司机福利片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国内揄拍国产精品人妻在线| 午夜精品在线福利| 久久 成人 亚洲| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| bbb黄色大片| 欧美精品啪啪一区二区三区| 免费av毛片视频| 99riav亚洲国产免费| 国产99久久九九免费精品| av天堂在线播放| 免费看美女性在线毛片视频| 色尼玛亚洲综合影院| 国产视频一区二区在线看| 在线永久观看黄色视频| 久久香蕉激情| 成人精品一区二区免费| 精华霜和精华液先用哪个| a在线观看视频网站| 真人做人爱边吃奶动态| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 午夜免费成人在线视频| 国产成人精品无人区| 久久久精品大字幕| 久久久久亚洲av毛片大全| 18禁美女被吸乳视频| 91大片在线观看| 日本五十路高清| 欧美黑人巨大hd| 国产探花在线观看一区二区| 精华霜和精华液先用哪个| 精品欧美国产一区二区三| 一区二区三区国产精品乱码| 搡老岳熟女国产| 午夜福利在线观看吧| 啦啦啦韩国在线观看视频| 波多野结衣高清无吗| 黄频高清免费视频| 制服人妻中文乱码| 久久久久久免费高清国产稀缺| 视频区欧美日本亚洲| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲电影在线观看av| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 精品欧美一区二区三区在线| 全区人妻精品视频| 床上黄色一级片| 精品日产1卡2卡| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 视频区欧美日本亚洲| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影 | 精品第一国产精品| 久久欧美精品欧美久久欧美| 99国产精品一区二区蜜桃av| 精品国内亚洲2022精品成人| 欧美日本亚洲视频在线播放| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲av成人精品一区久久| ponron亚洲| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久久精品大字幕| 亚洲美女黄片视频| 日韩高清综合在线| 亚洲成av人片在线播放无| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 最近在线观看免费完整版| 无限看片的www在线观看| 岛国视频午夜一区免费看| 免费在线观看亚洲国产| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久久久大精品| 成人18禁在线播放| 免费看a级黄色片| 国产成人影院久久av| 韩国av一区二区三区四区| 国产av一区二区精品久久| 午夜精品在线福利| 国产免费男女视频| 免费av毛片视频| 亚洲精华国产精华精| 日韩大尺度精品在线看网址| 999久久久国产精品视频| 亚洲av美国av| 日本a在线网址| a在线观看视频网站| 国产成人影院久久av| 久9热在线精品视频| 久久草成人影院| 观看免费一级毛片| 不卡av一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美色视频一区免费| 曰老女人黄片| 九色成人免费人妻av| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美乱色亚洲激情| ponron亚洲| 成人午夜高清在线视频| 啦啦啦免费观看视频1| 天堂动漫精品| 久久草成人影院| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 色播亚洲综合网| 国产精品野战在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 99在线视频只有这里精品首页| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产一区二区激情短视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久久久久人人人人人| 久久中文字幕人妻熟女| 正在播放国产对白刺激| 人人妻人人澡欧美一区二区| 母亲3免费完整高清在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产不卡一卡二| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久 成人 亚洲| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产av麻豆久久久久久久| 美女午夜性视频免费| x7x7x7水蜜桃| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 一个人免费在线观看电影 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲真实伦在线观看| 香蕉国产在线看| 国内精品一区二区在线观看| 国产三级黄色录像| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久欧美精品欧美久久欧美| a在线观看视频网站| 婷婷亚洲欧美| 久久久久久国产a免费观看| 日本三级黄在线观看| 精品电影一区二区在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲精品美女久久av网站| 成熟少妇高潮喷水视频| 精品国产亚洲在线| 欧美日韩乱码在线| 亚洲午夜理论影院| 变态另类丝袜制服| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲人与动物交配视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 日本 欧美在线| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品野战在线观看| 黄色女人牲交| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 狠狠狠狠99中文字幕| 看黄色毛片网站| 免费在线观看完整版高清| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲美女黄片视频| 十八禁人妻一区二区| 久久 成人 亚洲| 久久香蕉国产精品| 久久久久久久久免费视频了| 他把我摸到了高潮在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产在线观看jvid| 欧美色欧美亚洲另类二区| 欧美日韩黄片免| www.www免费av| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| cao死你这个sao货| 久久久久免费精品人妻一区二区| 色综合站精品国产| 一级毛片精品| 亚洲精品美女久久av网站| 久久午夜综合久久蜜桃| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产视频内射| 午夜免费成人在线视频| 成人av在线播放网站| 久久久久久免费高清国产稀缺| 日韩大码丰满熟妇| 国产精品亚洲一级av第二区| 听说在线观看完整版免费高清| 高潮久久久久久久久久久不卡| 香蕉av资源在线| 国产高清videossex| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美极品一区二区三区四区| 久久人人精品亚洲av| 国产日本99.免费观看| 男人舔奶头视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 日本免费一区二区三区高清不卡| 后天国语完整版免费观看| 妹子高潮喷水视频| 日本一二三区视频观看| 麻豆成人av在线观看| 欧美黑人巨大hd| 国产黄片美女视频| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品国产高清国产av| 欧美成人性av电影在线观看| 日韩国内少妇激情av| 18禁美女被吸乳视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产精品国产高清国产av| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 久久久水蜜桃国产精品网| 免费观看精品视频网站| 日韩三级视频一区二区三区| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲av电影在线进入| 亚洲国产欧美网| 丝袜美腿诱惑在线| 超碰成人久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 成年版毛片免费区| 在线观看午夜福利视频| 久久香蕉精品热| 两性夫妻黄色片| 悠悠久久av| 日本一区二区免费在线视频| 国产av在哪里看| www国产在线视频色| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产av一区在线观看免费| 久久中文看片网| 看免费av毛片| 久久久国产精品麻豆| 99久久99久久久精品蜜桃| 叶爱在线成人免费视频播放| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美zozozo另类| 久热爱精品视频在线9| 久久九九热精品免费| 我的老师免费观看完整版| 亚洲成人久久爱视频| av中文乱码字幕在线| 免费看日本二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 伦理电影免费视频| 波多野结衣高清作品| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲无线在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲五月天丁香| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 99久久精品国产亚洲精品| 色在线成人网| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲av熟女| 日韩欧美在线乱码| 日本a在线网址| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 男插女下体视频免费在线播放| 免费在线观看影片大全网站| 久久久久性生活片| 亚洲片人在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看|