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    5種市售釀造醬油風(fēng)味物質(zhì)及氨基酸含量分析

    2019-10-16 10:37:02范霞陳榮順
    中國調(diào)味品 2019年10期
    關(guān)鍵詞:草菇老抽電子鼻

    范霞,陳榮順

    (1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科技學(xué)院,南京 210095;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 理學(xué)院,南京 210095)

    醬油是中國傳統(tǒng)的調(diào)味品,滋味鮮美,有助于促進(jìn)食欲,已經(jīng)成為人們飲食中不可缺少的一種調(diào)味品[1]。由于釀造醬油生產(chǎn)成本高,在利益的驅(qū)使下,以配制醬油冒充釀造醬油的現(xiàn)象較為普遍。釀造醬油的揮發(fā)性成分種類較多,主要包括醇類、醛類、酮類、酚類、酯類和含硫化合物等。配制醬油的風(fēng)味物質(zhì)遠(yuǎn)比釀造醬油少,因而醬油中的揮發(fā)性風(fēng)味組分在一定程度上能反映其品質(zhì)的高低。

    HS-SPME/GC-MS作為一種高效的萃取、分離檢測方法,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于醬油香氣成分分析領(lǐng)域[2-6]。氣味是體現(xiàn)食品質(zhì)量品質(zhì)的重要指標(biāo)之一[7],電子鼻能快速識別不同等級、不同品牌的醬油[8-10]。醬油組成成分復(fù)雜,除食鹽、糖類、有機(jī)酸、色素及香料等成分外,還包含多種氨基酸,根據(jù)各氨基酸的含量可以識別不同等級的醬油[11,12]。

    本研究首次利用HS-SPME/GC-MS和電子鼻技術(shù)并結(jié)合氨基酸組成分析對醬油中的風(fēng)味物質(zhì)和游離氨基酸進(jìn)行研究,為醬油的品質(zhì)評價提供了一種快速、有效的檢測方法。

    1 材料與儀器

    1.1 材料與試劑

    5種市售高鹽稀態(tài)釀造醬油:1號海天特級草菇老抽;2號海天特級金標(biāo)生抽;3號海天一級草菇老抽;4號海天三級鮮味生抽;5號海天特級味極鮮,均購于南京當(dāng)?shù)爻?。氨基酸?biāo)準(zhǔn)品:濃度為2.5 μmol/mL,日本日立公司;緩沖液B1、B2、B3、B4、B5,茚三酮顯色液:日本日立公司。

    1.2 儀器

    GC 7890A-5975C MSD氣質(zhì)聯(lián)用儀 美國Agilent公司;65 μm PDMS/DVB手動SPME進(jìn)樣器 美國Supelco公司;PEN3便攜式電子鼻 德國Airsense公司;L-8900全自動氨基酸分析儀 日本日立公司;分析天平 美國梅特勒-托利多公司;磁力攪拌器 精鑿科技(上海)有限公司。

    2 實驗方法

    2.1 HS-SPME/GC-MS法對醬油香氣成分分析

    準(zhǔn)確稱取醬油8.00 g,放入20 mL的頂空瓶中,加入氯化鈉固體1.50 g,在50 ℃下攪拌20 min,使醬油香氣充分揮發(fā)。將250 ℃下預(yù)先老化5 min的固相微萃取頭插入頂空瓶內(nèi)樣品上方,固定好SPME手柄,推出纖維頭吸附60 min后取出,立即插入GC-MS儀器進(jìn)樣口,在250 ℃條件下解吸附5 min。

    氣相色譜條件:色譜柱為HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);進(jìn)樣口溫度250 ℃;程序升溫:初始溫度40 ℃,保持5 min,先以4 ℃/min升溫至120 ℃,保持2 min,再以10 ℃/min升溫至220 ℃,保持6 min;載氣為99.999%的高純氦氣,流量為1.0 mL/min;采用不分流模式進(jìn)樣。

    質(zhì)譜檢測條件:電子轟擊(EI)電離源,電子能量70 eV,離子源溫度250 ℃;四級桿溫度150 ℃;輔助加熱溫度250 ℃。

    利用NIST08質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫并結(jié)合人工解析,選擇匹配度不小于80(最大值是100)的峰對醬油的香氣物質(zhì)進(jìn)行定性分析,各色譜峰的峰面積與總峰面積的比值為各香氣成分的相對含量。

    2.2 電子鼻對醬油主成分分析

    準(zhǔn)確稱取8.00 g醬油,置于100 mL的燒杯中,用保鮮膜封口,靜置30 min后開始用電子鼻檢測,每個樣品重復(fù)5次。

    電子鼻測定條件:傳感器清洗時間為100 s;傳感器歸零時間為10 s;樣品準(zhǔn)備時間為5 s;分析采樣時間為120 s,內(nèi)部流量為400 mL/min,進(jìn)樣流量為400 mL/min。

    2.3 5種醬油游離氨基酸含量比較

    稱取醬油樣品2.00 mL,用1 mL 10%的磺基水楊酸沉淀蛋白,最后用水定容至25.00 mL的容量瓶中。取5 mL搖勻的醬油溶液,在轉(zhuǎn)速為10000 r/min的條件下,離心10 min。然后吸取1 mL,用水稀釋至25.00 mL的容量瓶中,最后吸取1 mL過濾膜進(jìn)樣。每種醬油重復(fù)3次,取平均值。

    L-8900全自動氨基酸分析儀測定條件:日立鈉離子交接樹脂4.6 mm×60 mm;泵1流速0.4 mL/min,泵2流速0.35 mL/min,進(jìn)樣體積20 μL;柱溫57 ℃,反應(yīng)溫度135 ℃;檢測波長570 nm和440 nm。

    2.4 數(shù)據(jù)處理

    采用SPSS 18.0(IBM)和Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,采用電子鼻設(shè)備自帶Win muster分析軟件對115 s處G/G0值進(jìn)行PCA分析。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 HS-SPME/GC-MS檢測醬油中的風(fēng)味物質(zhì)

    利用HS-SPME/GC-MS技術(shù)檢測醬油中的風(fēng)味物質(zhì),5種醬油共檢測出63種香氣物質(zhì),相對百分含量結(jié)果見表1。1號特級草菇老抽的主體香氣成分是2-乙酰基吡咯、糠醇、苯乙醛、5-甲基-2-呋喃甲醇,相對含量共計79.75%。3號一級草菇老抽的主體揮發(fā)性香氣物質(zhì)是2-乙?;量?、糠醇、苯乙醛、2-乙?;秽?-甲基糠醛,相對含量達(dá)81.11%。2-乙?;秽?、5-甲基糠醛是3號醬油特有的風(fēng)味物質(zhì)。2號金標(biāo)生抽、4號鮮味生抽、5號味極鮮的主體香氣物質(zhì)是乙醇和苯乙醇,相對含量分別是86.24%、70.04%、78.97%。Lee等[13]利用SPME結(jié)合GC-MS對發(fā)酵醬油和酸水解醬油揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)進(jìn)行了對比分析,得知醇類和酯類是發(fā)酵醬油中的主要物質(zhì),雜環(huán)類和酸類是酸水解醬油中的主要物質(zhì)。趙謀明等[14]通過頂空-固相微萃取(HS-SPME)的方法萃取醬油的風(fēng)味物質(zhì),并采用氣相色譜-質(zhì)譜/嗅聞技術(shù)(GC-MS和GC-O)聯(lián)用的方法分離鑒定出11種揮發(fā)性香氣化合物,其中醇類相對百分含量達(dá)75.82%。5種醬油共同含有的香氣成分有10種,包括醇類1種,苯乙醇;雜環(huán)化合物5種,糠醇、2-乙基-6-甲基吡嗪、2-乙酰基吡咯、3-苯基呋喃、氰化芐;酚類1種,愈創(chuàng)木酚;醛類3種,苯乙醛、壬醛、癸醛。

    表1 醬油中的香氣成分及相對含量Table 1 Aroma components and relative content in soy sauce

    續(xù) 表

    續(xù) 表

    注:“-”表示未檢測到或不存在。

    醬油中的香氣物質(zhì)根據(jù)官能團(tuán)種類主要分為醇類、酚類、醛酮類、酯類、酸類、雜環(huán)化合物、含硫化合物及其他。1號特級草菇老抽、2號金標(biāo)醬油、3號一級草菇醬油、4號鮮味生抽、5號味極鮮分別檢測出31,29,27,32,34種揮發(fā)性香氣物質(zhì),結(jié)果見表2。

    表2 醬油中所含香氣物質(zhì)分類Table 2 Classification of aroma substances in soy sauce

    醇類是醬油在生產(chǎn)過程中由酵母酒精發(fā)酵和氨基酸降解產(chǎn)生的一種常見的香味物質(zhì)。其中乙醇能產(chǎn)生令人愉快的酒香味,苯乙醇是酵母菌乙醇發(fā)酵降解苯丙氨酸的產(chǎn)物,具有花草和水果的香氣[15]。本研究中,醇類物質(zhì)是各醬油中種類數(shù)較少且含量相差較大的一類風(fēng)味物質(zhì)。1,3號醬油醇類化合物相對含量較少;2,4,5號醬油,乙醇和苯乙醇作為主體成分,相對百分含量高達(dá)70.04%~86.24%。酚類物質(zhì)主要是來自小麥的原料經(jīng)米曲霉作用后再經(jīng)酵母發(fā)酵而成的,具有香氣特征明顯、活性強(qiáng)的特征,對醬油風(fēng)味有較大的貢獻(xiàn)。其中,4-乙基愈創(chuàng)木酚是提高醬油香氣的關(guān)鍵,為醬油帶來類似丁香和煙熏的香味[16]。2,4,5號醬油中4-乙基愈創(chuàng)木酚相對含量分別是0.35%、6.23%、0.48%。酯類物質(zhì)香味清淡,散逸快,是醬油中種類最復(fù)雜的揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì),主要由各種有機(jī)酸和醇類發(fā)生酯化反應(yīng)而形成。5種醬油酯類化合物相對含量差距較大,在0.24%~9.36%之間。醛酮類是醬油中種類較為豐富的一類物質(zhì),醛類呈辛辣刺激性氣味,在醬油香氣中起調(diào)和作用[17]。苯乙醛是5種醬油共有的醛類化合物,具有風(fēng)信子、紫丁香樣的香氣,苯甲醛是4號鮮味醬油特有的香氣成分,有似于杏仁的芳香氣味。酸類物質(zhì)在醬油中含量很少,有刺激性氣味。本研究僅在4號醬油中檢出3.34%的苯甲酸。雜環(huán)類化合物共檢測出21種,包括呋喃類、吡咯類、吡嗪類化合物及氰化芐。2-乙?;量┦?,3號醬油的主要香氣成分,含量分別達(dá)50.76%、44.23%。2-乙?;量лp微香豆素的香氣,還有茶味香味,味甜。含硫類物質(zhì)可能與某些氨基酸的降解作用有關(guān),共檢出3種。

    3.2 電子鼻對5種釀造醬油的氣味分析

    利用電子鼻PCA方法對5種醬油的氣味進(jìn)行分析,見圖1。

    圖1 不同種類醬油的PCA分析圖Fig.1 PCA analysis diagram of different kinds of soy sauce

    由圖1可知,主成分PC1和PC2的貢獻(xiàn)率分別為97.42%和1.32%,總貢獻(xiàn)率達(dá)98.74%,說明可以代表醬油的整體信息。2號、4號和5號醬油之間完全沒有重疊,說明這3種醬油差異較大,相互之間很容易區(qū)分。1號特級草菇老抽和3號一級草菇老抽醬油之間有小部分重疊,說明這兩種醬油差異較小,其氣味有一定的相似性,不易區(qū)分。結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用分析結(jié)果可知,1號和3號醬油中的揮發(fā)性物質(zhì)成分較為相似。

    3.3 全自動氨基酸分析儀對5種醬油游離氨基酸含量比較

    采用全自動氨基酸分析儀對5種醬油中的17種氨基酸含量進(jìn)行測定分析。由于質(zhì)量和級別不同,醬油中的氨基酸含量也不盡相同,測定結(jié)果見表3。

    表3 不同醬油中游離氨基酸的含量 Table 3 The content of free amino acids in different kinds of soy sauce g/dL

    注:“-”表示未檢測到或不存在;“*”表示必需氨基酸。

    谷氨酸作為特征氨基酸,根據(jù)其占總氨基酸的比例可以初步判斷是否添加了鮮味劑。釀造醬油中的谷氨酸占總氨基酸的比例一般在18%~25%左右,如果超過這個比例,則認(rèn)為可能是添加了谷氨酸鈉作為增鮮劑。5種醬油谷氨酸含量占總氨基酸的比例分別是51.59%、61.77%、27.02%、67.59%和60.76%,釀造醬油中的谷氨酸占總氨基酸的比例一般在18%~25%左右,因此可以判斷5種醬油均添加了谷氨酸鈉作為增鮮劑,與其配料表一致。

    在排除谷氨酸的干擾下,5種醬油氨基酸占氨基酸總量的比值見圖2。

    不計谷氨酸含量,5種釀造醬油各氨基酸含量相對分布均勻。其中,天冬氨酸、亮氨酸、纈氨酸含量最高,占9%~13%;絲氨酸、丙氨酸、脯氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸含量較均勻,占7%~9%;甘氨酸、蘇氨酸、酪氨酸占氨基酸總量的4%~7%;蛋氨酸、組氨酸、精氨酸含量較低,比例約在1%~4%之間。不含谷氨酸,5種醬油樣品中必需氨基酸占氨基酸總量分別為24.66%、19.61%、36.75%、16.34%、20.95%。理想蛋白質(zhì)中必需氨基酸與氨基酸總量的比值為40%左右,因此,3號醬油中的氨基酸組成相對較好。

    圖2 5種醬油游離氨基酸含量占氨基酸 總量的比值(不含谷氨酸)Fig.2 Ratio of free amino acids content to total amino acids content in five kinds of soy sauce (excluding glutamic acid)

    4 結(jié)論

    利用頂空固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對5種市售釀造醬油的香氣成分進(jìn)行鑒定,共檢測出63種香氣物質(zhì),不同醬油的香氣成分種類及含量存在一定的差異。1號特級草菇老抽和3號一級草菇醬油的主體風(fēng)味物質(zhì)是有堅果香和果香的2-乙?;量?號金標(biāo)醬油、4號鮮味生抽、5號味極鮮的主體風(fēng)味物質(zhì)是有特殊香氣的乙醇。根據(jù)PCA分析結(jié)果可知,5種醬油存在一定的差異,采用電子鼻可以對其進(jìn)行很好地區(qū)分。采用全自動氨基酸分析儀對醬油中氨基酸的含量和組成進(jìn)行分析,谷氨酸作為醬油中最主要的鮮味氨基酸,根據(jù)其含量范圍可以初步判定5種釀造醬油都添加了增鮮劑。不計谷氨酸,5種醬油各氨基酸含量相對分布均勻。其中,3號醬油中的氨基酸組成相對最好。本研究表明HS-SPME/GC-MS、電子鼻可以綜合評價醬油中的揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì),結(jié)合氨基酸分析儀可以更全面、快速地評價醬油的品質(zhì)。

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