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    非消化寡糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)的影響

    2019-10-15 08:36:38秦翠麗牛明福趙思琪席振軍
    食品與機(jī)械 2019年9期
    關(guān)鍵詞:木糖寡糖半乳糖

    王 輝 秦翠麗 - 宮 強(qiáng) 牛明福 - 趙思琪 - 席振軍 -

    (1. 河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院,河南 洛陽(yáng) 471023;2. 國(guó)家級(jí)食品加工與安全實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心,河南 洛陽(yáng) 471023)

    非消化性寡糖(Non-digestible oigosaccharies, NDOs)是一類具有降低血糖、血脂和血清膽固醇及提高動(dòng)物機(jī)體免疫力、增強(qiáng)造血功能、促進(jìn)礦物質(zhì)元素吸收、改善消化道菌群結(jié)構(gòu)、提高機(jī)體抗氧化等多種生理功能的新型功能性低聚糖[1-5]。研究[6]發(fā)現(xiàn),非消化寡糖的分解能產(chǎn)生一些抗菌類物質(zhì)及下調(diào)腸道pH,從而有效抑制大腸桿菌等有害菌的生長(zhǎng),維持腸道健康。

    目前關(guān)于單一非消化性寡糖的研究報(bào)道較多,而將不同寡糖進(jìn)行組合的研究報(bào)道甚少,僅研究組合情況對(duì)益生菌發(fā)酵的影響[7],而組合情況對(duì)動(dòng)物機(jī)體非特性免疫機(jī)能的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。為探討不同非消化性寡糖組合對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用的影響,試驗(yàn)擬將低聚果糖(Fructo oligosaccharide, FOS)、低聚木糖(Xylo oligosaccharide, XOS)和低聚半乳糖(Galactooligosaccharides, GOS)3種非消化寡糖及其不同組合對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃試驗(yàn),通過(guò)測(cè)定不同免疫指標(biāo),研究其對(duì)小鼠免疫性能的影響,旨在為非消化害糖的綜合應(yīng)用提供理論支持。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物與試劑

    小鼠:體重為18~20 g雌性BALB/c小鼠,河南科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;

    綿羊紅細(xì)胞、豚鼠補(bǔ)體:鄭州百基生物工程有限公司;

    四甲基偶氮唑鹽:北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司;

    刀豆蛋白A:北京索萊寶科技有限公司;

    二硝基氟苯:98%,上海麥克林生化科技有限公司;

    印度墨汁:福州飛凈生物科技有限公司;

    都氏試劑、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚半乳糖:95%,上海源葉生物科技有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    分析天平:JA230T型,渡揚(yáng)精密儀器(上海)有限公司;

    超凈工作臺(tái):SW-CJ-2D型,蘇州凈化設(shè)備公司;

    紫外分光光度計(jì):755B型,上海菁華儀器科技有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 小鼠分組及飼喂 將140只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為7組:空白對(duì)照組,低聚果糖組、低聚木糖組、低聚半乳糖組、低聚木糖與低聚半乳糖(2∶3,質(zhì)量比)復(fù)合組、低聚木糖與低聚果糖(2∶1,質(zhì)量比)復(fù)合組、低聚半乳糖與低聚果糖(2∶1,質(zhì)量比)復(fù)合組。按400 mg/kg(以體重計(jì))的劑量分別進(jìn)行灌胃,每日1次,連續(xù)15 d;對(duì)照組小鼠正常狀態(tài)下飼喂。

    1.3.2 小鼠免疫器官指數(shù)測(cè)定 連續(xù)灌胃15 d后,每組隨機(jī)選取5只小鼠進(jìn)行小鼠免疫器官指數(shù)測(cè)定,按式(1)計(jì)算小鼠免疫器官指數(shù)。

    (1)

    式中:

    c——脾臟或胸腺指數(shù),mg/g;

    m1——脾臟或胸腺質(zhì)量,mg;

    m2——小鼠體重,g。

    1.3.3 小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(Delayed type hypersensitivity, DTH)檢測(cè) 第15 天灌胃2 h后,參考文獻(xiàn)[8-10]方法,每組隨機(jī)取5只小鼠進(jìn)行檢測(cè),按式(2)計(jì)算DTH反應(yīng)程度。

    c=m1-m2,

    (2)

    式中:

    c——DTH反應(yīng)程度,g;

    m1——小鼠右耳質(zhì)量,g;

    m2——小鼠左耳質(zhì)量,g。

    1.3.4 小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力測(cè)定 參考文獻(xiàn)[11-13]方法,每組隨機(jī)選取5只小鼠,按式(3)計(jì)算小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力。

    (3)

    (4)

    式中:

    c——小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力;

    m1——小鼠體重,g;

    m2——肝質(zhì)量,g;

    m3——脾質(zhì)量,g;

    m4——未校正的吞噬指數(shù);

    m5——2 min血樣光密度值的對(duì)數(shù)值;

    m6——10 min血樣光密度值的對(duì)數(shù)值;

    m7——時(shí)間,10 min;

    m8——時(shí)間,2 min。

    1.3.5 小鼠血清溶血素的測(cè)定 參考文獻(xiàn)[14-15]方法,每組隨機(jī)選取5只小鼠,按式(5)計(jì)算小鼠的血清溶血素值(half value of hemolysin,HC50)。

    (5)

    式中:

    c——小鼠的血清溶血素值;

    m1——樣品OD值;

    m2——綿羊紅細(xì)胞半數(shù)溶血OD值;

    m3——稀釋倍數(shù)。

    1.3.6 脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[16-18]方法,取1.3.2無(wú)菌采集的5只小鼠脾臟進(jìn)行試驗(yàn),脾淋巴細(xì)胞增殖情況用刺激值(stimulation index, SI)表示,按式(6)進(jìn)行計(jì)算。

    (6)

    式中:

    c——刺激值,用來(lái)表示脾淋巴細(xì)胞增殖情況;

    m1——試驗(yàn)OD值;

    m2——陰性對(duì)照OD值。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,P<0.05顯著性差異,認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響

    由表1可知,3種非消化寡糖及其組合試驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較均有所提高,單一寡糖試驗(yàn)組脾臟指數(shù)為4.052~4.294,與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),其中低聚木糖組效果最好,脾臟指數(shù)為4.294,與對(duì)照組相比提高了28.92%;復(fù)合寡糖試驗(yàn)組脾臟指數(shù)為4.554~4.814,與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01),其中低聚木糖與低聚半乳糖復(fù)合組效果最好,脾臟指數(shù)為4.814,與對(duì)照組相比提高了37.12%。

    由表1可知,單一寡糖試驗(yàn)組小鼠胸腺指數(shù)為2.200~2.392,與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),其中低聚木糖組效果最好,胸腺指數(shù)為2.392,與對(duì)照組相比提高了17.56%;復(fù)合寡糖灌胃組中小鼠胸腺指數(shù)為2.598~2.704,與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01),其中低聚木糖與低聚半乳糖復(fù)合組效果最好,胸腺指數(shù)為2.704,與對(duì)照組相比提高了27.07%。

    以上數(shù)據(jù)分析表明,非消化性寡糖的攝入能促進(jìn)小鼠脾臟和胸腺的發(fā)育,可在一定程度上提高小鼠的免疫器官指數(shù),說(shuō)明非消化性寡糖的攝入能增強(qiáng)小鼠的免疫能力,且組合寡糖效果優(yōu)于單一寡糖,其中低聚木糖與低聚半乳糖組合效果最好,與王中華等[19]研究結(jié)果類似。

    2.2 對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響

    由圖1可知,單一寡糖試驗(yàn)組DTH反應(yīng)程度為0.005~0.008,單一寡糖組與對(duì)照組相比差異不顯著,在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)明顯差異;復(fù)合寡糖試驗(yàn)組為0.012~0.036,其中低聚木糖與低聚果糖復(fù)合組DTH反應(yīng)程度為0.023,與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),低聚木糖與低聚半乳糖復(fù)合組DTH反應(yīng)程度為0.036,與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01),分別提高了86.95%,91.67%。結(jié)果表明,非消化性寡糖的攝入能提高小鼠機(jī)體細(xì)胞免疫能力,復(fù)合寡糖試驗(yàn)組的效果優(yōu)于單一寡糖試驗(yàn)組,其中低聚木糖與低聚半乳糖復(fù)合組效果最好。

    表1 非消化寡糖對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響?

    ? **表示與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01);*表示與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)。

    **表示與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01);*表示與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)

    圖1 非消化寡糖對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響

    Figure 1 Effect of NDOs on delayed allergic (DTH) in mice

    2.3 對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響

    由圖2可知,單一寡糖試驗(yàn)組小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力為4.674~6.016,其中低聚果糖與對(duì)照組相比不顯著,在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)明顯差異,低聚半乳糖組、低聚木糖組與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),分別提高了22.31%,24.69%;復(fù)合寡糖試驗(yàn)組小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力為6.207~8.284,其中低聚木糖與低聚果糖復(fù)合組與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),低聚半乳糖與低聚果糖復(fù)合組、低聚木糖與低聚半乳糖復(fù)合組與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01),分別提高了28.95%,35.70%,43.58%。

    **表示與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01);*表示與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)

    圖2 非消化寡糖對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響

    Figure 2 Efects of NDOs on phagocytosis of mouse macrophages

    結(jié)果表明,非消化性寡糖的攝入能提高小鼠機(jī)體內(nèi)巨噬細(xì)胞的吞噬能力,增強(qiáng)小鼠的非特異性免疫應(yīng)答能力,且復(fù)合寡糖試驗(yàn)組的效果優(yōu)于單一寡糖試驗(yàn)組,其中低聚木糖與低聚半乳糖組合效果最好。

    2.4 非消化寡糖對(duì)小鼠血清溶血素的影響

    由表2可知,單一寡糖試驗(yàn)組半數(shù)溶血值為45.436~48.676,其中低聚果糖組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)明顯差異,其他單一寡糖試驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),低聚木糖組效果最好,半數(shù)溶血值為48.676,提高了6.65%;復(fù)合寡糖試驗(yàn)組半數(shù)溶血值為51.950~64.576,與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01),其中低聚木糖與低聚半乳糖復(fù)合組效果最好,半數(shù)溶血值為64.576,提高了29.64%。結(jié)果表明,非消化性寡糖的攝入能提高小鼠的體液免疫能力;復(fù)合寡糖試驗(yàn)組的效果優(yōu)于單一寡糖試驗(yàn)組,其中低聚木糖與低聚半乳糖復(fù)合組效果最好,與李梅等[20]研究結(jié)果相似。

    表2 小鼠血清溶血素的測(cè)定結(jié)果?

    ? **表示與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01),*表示與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)。

    2.5 對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖情況的影響

    由圖3可知,單一寡糖試驗(yàn)組SI值為0.994 0~1.214 6,與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),其中低聚木糖組效果最好,SI值為1.214 0,提高了24.99%;復(fù)合寡糖試驗(yàn)組SI值為1.268 0~1.406 0,低聚半乳糖與低聚果糖復(fù)合組、低聚木糖與低聚果糖復(fù)合組與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),低聚木糖與低聚半乳糖復(fù)合組與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01),其中低聚木糖與低聚半乳糖復(fù)合效果最好,SI值為1.406 2,提高了35.23%。結(jié)果表明,非消化性寡糖的攝入能提高小鼠細(xì)胞免疫能力;復(fù)合寡糖試驗(yàn)組效果優(yōu)于單一寡糖試驗(yàn)組,其中低聚木糖與低聚半乳糖復(fù)合組效果最好,與李敬雙等[21]研究結(jié)果類似。

    綜上試驗(yàn)結(jié)果表明,復(fù)合寡糖試驗(yàn)組效果優(yōu)于單一寡糖試驗(yàn)組,可能是在低聚木糖與低聚半乳糖被腸道益生菌代謝過(guò)程中產(chǎn)生了一些能促進(jìn)雙歧桿菌增殖的物質(zhì),改善了小鼠腸道菌群環(huán)境,刺激了小鼠免疫系統(tǒng),進(jìn)而增強(qiáng)了小鼠的免疫機(jī)能。

    **表示與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01);*表示與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)

    圖3 小鼠淋巴細(xì)胞增殖情況

    Figure 3 Lymphocyte proliferation in mice

    3 結(jié)論

    通過(guò)測(cè)定不同免疫指標(biāo),研究了低聚果糖、低聚木糖和低聚半乳糖3種非消化寡糖及其不同組合對(duì)小鼠免疫性能的影響。結(jié)果表明,非消化性寡糖的攝入能提高小鼠機(jī)體非特異性免疫能力;復(fù)合寡糖試驗(yàn)組提高小鼠機(jī)體非特異性免疫的能力優(yōu)于單一寡糖試驗(yàn)組,其中低聚木糖與低聚半乳糖(2∶3,質(zhì)量比)復(fù)合組效果最好。試驗(yàn)尚未對(duì)非消化寡糖的結(jié)構(gòu)以及復(fù)合寡糖的用量對(duì)增強(qiáng)小鼠機(jī)體非特異性免疫能力的原因進(jìn)行深入研究,后續(xù)將側(cè)重點(diǎn)于研究非消化寡糖的結(jié)構(gòu)以及復(fù)合寡糖的用量對(duì)小鼠非特異性免疫能力的影響。

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