氣相色譜法測(cè)定飼料中9種香味劑含量的研究

郭國(guó)賢

（遼寧省檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證中心遼寧省農(nóng)產(chǎn)品及獸藥飼料產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)院，沈陽(yáng) 110000）

香味劑作為飼料添加劑的一種，廣泛應(yīng)用于飼料生產(chǎn)中，可改善飼料適口性，增進(jìn)飼養(yǎng)動(dòng)物進(jìn)食欲，抵抗因換料、高溫、疾病等引起的應(yīng)激反應(yīng)，所以近些年來(lái)食品用香料作為飼料中添加劑被廣泛應(yīng)用于飼料生產(chǎn)中。但隨著香味劑的應(yīng)用，香味劑也存在著一定的危害：高濃度的香味劑本身具有很強(qiáng)的毒性；飼料中的一些成分可與高濃度香味劑發(fā)生反應(yīng)，影響飼料安全；香味劑可掩蓋飼料腐敗變質(zhì)和污染霉變。根據(jù)農(nóng)業(yè)部2045 號(hào)公告《飼料添加劑品種目錄（2013）》及《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760）中食品中香料名單的規(guī)定，食品用香料可以作為飼料添加劑使用，導(dǎo)致飼料中香味劑在一定程度上的濫用。而國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)以及各行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中針對(duì)飼料中香味劑的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)及方法還較少，飼料中香味劑乳酸乙酯、乙基麥芽酚及乙基香蘭素等還沒(méi)有國(guó)際檢測(cè)方法[1]。目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)乙酸異戊酯、乙基麥芽酚、肉桂醛、大茴香腦、γ-壬內(nèi)酯、肉桂酸甲酯、香蘭素、乙基香蘭素、桃醛的添加檢測(cè)方法研究主要針對(duì)食品檢測(cè)領(lǐng)域，僅有少量地方標(biāo)準(zhǔn)有針對(duì)上述香味劑作為飼料添加劑的檢測(cè)方法。本文建立了使用氣相色譜法同時(shí)測(cè)定飼料中乙酸異戊酯、乙基麥芽酚、肉桂醛、大茴香腦、γ-壬內(nèi)酯、肉桂酸甲酯、香蘭素、乙基香蘭素、桃醛等九種香味劑的檢測(cè)方法，該方法具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、設(shè)備要求簡(jiǎn)單、溶劑使用少等優(yōu)點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器

美國(guó)安捷倫公司6890 型氣相色譜儀；DB-5 毛細(xì)管柱，長(zhǎng)60 m，內(nèi)徑0.25 mm，膜厚0.25 μm，或性能類似的色譜柱；Staurt SA 8渦旋混合器；AS系列超聲清洗機(jī)。

1.2 藥品與試劑

對(duì)照品：香蘭素、乙基香蘭素、肉桂醛、桃醛、乙酸異戊酯、γ-壬內(nèi)酯、肉桂酸甲酯、乙基麥芽酚、大茴香腦純度均≥98.5%；無(wú)水乙醇（分析純）；0.45 μm的微孔濾膜。

1.3 提取方法

稱取試樣約1 g（精確至0.1 mg），置于10 mL棕色容量瓶中，加無(wú)水乙醇5 mL，超聲20 min，降至室溫后，用無(wú)水乙醇定容至刻度?；靹蚝箪o置。取上清溶液，溶液過(guò)0.45 μm微孔濾膜，供上機(jī)測(cè)定。

1.4 氣相色譜儀條件

色譜柱：DB-5 毛細(xì)管柱，長(zhǎng)60 m，內(nèi)徑0.25 mm，膜厚0.25 μm，或性能類似的色譜柱；載氣：高純氮?dú)猓?.0 mL·min-1；分流比：10：1；進(jìn)樣口溫度：270 ℃；檢測(cè)器：氫火焰檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度：290 ℃；柱溫箱溫度：起始溫度90 ℃，保持2 min，以15 ℃·min-1升至200 ℃，保持8 min；進(jìn)樣量：1.00 mL。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取方法考察

9 種香味劑均為小分子化合物，一些含有苯環(huán)、共軛鍵，但有一些不含共軛鍵結(jié)構(gòu)，同時(shí)參照9 種香味劑的溶解性數(shù)據(jù)，9 種香味劑均易溶于乙醇或者氯仿中，在水中幾乎不溶，參考實(shí)際提取的回收率以及實(shí)驗(yàn)室常用試劑的毒性大小，選擇使用無(wú)水乙醇作為提取液。分別考查渦旋振蕩、搖床振蕩、恒溫水浴振蕩、超聲分別提取5、10、20、30 min。根據(jù)6 次結(jié)果的平均回收率比較，超聲提取20 與30 min 回收率最好。且超聲20 min 用時(shí)較短。9種香味劑提取回收率對(duì)比見表1。

表1 9種香味劑提取回收率對(duì)比%

2.2 方法線性

用濃度分別為5.00、10.00、20.0、50.0、100.0、200 和500 mg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，每個(gè)濃度連續(xù)進(jìn)樣3次，按平均值，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線線性。試驗(yàn)結(jié)果表明，各種香味劑的濃度范圍在5.00～500 mg·mL-1時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的r≥0.999，有良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表2。

表2 9種香味劑校正曲線

2.3 方法靈敏度

采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在空白樣品中添加9 種香味劑，按“2.1”項(xiàng)下方法處理和檢測(cè)，依據(jù)色譜峰信噪比S/N＞3 為方法檢測(cè)限，S/N＞10 為方法定量限，得出9 種香味劑的檢測(cè)限為20 mg·kg-1，定量限為50 mg·kg-1?？瞻罪暳蠘悠分刑砑?00 mg·kg-19 種香味劑的色譜圖見圖1。

2.4 準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性和方法適用性

選擇空白飼料為測(cè)試對(duì)象，進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)。在1 g 空白飼料中分別加入適宜體積的香蘭素、乙基香蘭素、肉桂醛、桃醛、乙酸異戊酯、γ-壬內(nèi)酯、肉桂酸甲酯、乙基麥芽酚、大茴香腦混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使其添加濃度為20、50、100、200、500 和1 000 mg·kg-1，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，同一濃度做6 次平行實(shí)驗(yàn)。9 種香味劑加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果均值見表3。試驗(yàn)結(jié)果表明，在添加上述6個(gè)不同濃度，其回收率為70.1%～117.5%，重復(fù)性RSD最大的為11.4%。說(shuō)明該方法有較高的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。

圖1 9種香味劑混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

表3 9種香味劑加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn) %

為考查本方法適用性，從市場(chǎng)上收集5 生產(chǎn)廠家的5 種代表性飼料樣品，添加20 和50 mg·kg-1，平行測(cè)定6 次，回收率均在70.6%～99.6%，結(jié)果見表4。由表4 可知，不同的生產(chǎn)廠家、不同成分的飼料均可用該方法檢測(cè)其香味劑含量。以上試驗(yàn)表明該方法適用的范圍為飼料。

表4 不同添加濃度5種代表性飼料樣品的回收率 %

3 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)建立的飼料中香蘭素、乙基香蘭素、肉桂醛、桃醛、乙酸異戊酯、γ-壬內(nèi)酯、肉桂酸甲酯、乙基麥芽酚、大茴香腦測(cè)定氣相譜法，樣品的提取步驟科學(xué)合理，易于掌握，測(cè)試數(shù)據(jù)重復(fù)性好，添加回收率范圍等均可滿足分析試驗(yàn)要求，可很好的滿足飼料中香蘭素、乙基香蘭素、肉桂醛、桃醛、乙酸異戊酯、γ-壬內(nèi)酯、肉桂酸甲酯、乙基麥芽酚、大茴香腦的測(cè)定要求。