PCR快速檢測技術(shù)在肺炎支原體感染中的應(yīng)用研究

閆文芳

MP為臨床常見病原菌,會(huì)引起多種呼吸道感染性疾病,尤其是兒童呼吸道更容易受到感染,MP感染在臨床上有著很多種表現(xiàn),主要表現(xiàn)為呼吸道器官炎性反應(yīng)。患者呼吸道纖毛運(yùn)動(dòng)會(huì)受到破壞,而呼吸道黏膜上皮細(xì)胞也會(huì)受到損害,臨床表現(xiàn)出咳嗽、咳痰、氣促等癥狀［1］。MP并沒有細(xì)胞膜,抗菌藥物不具有殺傷力,治療時(shí)也要區(qū)別與其他細(xì)菌或病毒性疾病。臨床對MP感染的診斷方法較多,臨床多選擇血清學(xué)方法診斷,但是結(jié)果會(huì)受到多種因素影響［2］,例如病情程度或個(gè)體差異等,導(dǎo)致發(fā)病早期確診難度較大?，F(xiàn)代分子生物學(xué)的發(fā)展,將PCR法應(yīng)用在MP臨床檢測中,不會(huì)受到以上因素的影響,而且可以快速完成MP的檢測。本次研究中,取97例疑似MP感染患者分別應(yīng)用MP快速培養(yǎng)法與PCR快速檢測技術(shù)進(jìn)行檢測,以傳統(tǒng)MP分離培養(yǎng)法的檢測結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn),分析PCR快速檢測技術(shù)在MP感染中的應(yīng)用價(jià)值,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年5月～2019年2月本院收治的97例疑似MP感染患者作為研究對象,入選對象臨床均表現(xiàn)出持續(xù)的、劇烈的咳嗽,觀察全身癥狀與胸部體征相比更為明顯,經(jīng)X射線觀察體征明顯,觀察胸片有片狀陰影,且肺門陰影明顯較濃,白細(xì)胞計(jì)數(shù)正?；蚱?血沉多有增快表現(xiàn)［3］,給予大環(huán)內(nèi)酯類藥物可以迅速緩解患者的病情,應(yīng)用一般抗生素和抗病毒藥物無效。排除合并呼吸系統(tǒng)疾病患者,合并心臟病和精神病患者。患者臨床多有咳嗽、氣喘、咽痛和頭痛、發(fā)熱等癥狀表現(xiàn)。97例患者中男50例,女47例；年齡3個(gè)月～18歲,平均年齡(8.2±7.1)歲。

1.2 方法 97例患者住院當(dāng)日均采集咽拭子標(biāo)本,以MP快速培養(yǎng)法、PCR快速檢測技術(shù)進(jìn)行檢測,其中MP快速培養(yǎng)將標(biāo)本放置在培養(yǎng)基瓶內(nèi),經(jīng)過攪動(dòng),將咽拭子取出,經(jīng)過密封,孵箱培養(yǎng)24 h后,對檢測結(jié)果進(jìn)行觀察。而PCR檢測將咽拭子標(biāo)本中加1 ml的無菌生理鹽水進(jìn)行混合,以高速離心處理10 min,離心管中增加120 μl的DNA濃縮液進(jìn)行混合,以高速離心處理10 min,再棄上清,于離心管中增加25 μl的DNA提取液。經(jīng)100℃恒溫處理10 min后,再經(jīng)高速離心處理5 min,取3 μl進(jìn)行檢測。

1.3 觀察指標(biāo) 以傳統(tǒng)MP分離培養(yǎng)法的檢測結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn),比較MP快速培養(yǎng)法、PCR快速檢測技術(shù)的靈敏度、陽性預(yù)測值、假陰性率、診斷符合率、特異度、假陽性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 傳統(tǒng)MP分離培養(yǎng)法檢測結(jié)果 97例疑似患者中,87例確診MP感染陽性,10例MP感染陰性。

2.2 兩種檢測方法的靈敏度、陽性預(yù)測值、假陰性率、診斷符合率比較 MP快速培養(yǎng)法、PCR快速檢測技術(shù)的靈敏度、陽性預(yù)測值、假陰性率、診斷符合率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

2.3 兩種檢測方法的特異度、假陽性率比較 PCR快速檢測技術(shù)的特異度明顯高于MP快速培養(yǎng)法,假陽性率低于MP快速培養(yǎng)法,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表1 兩種檢測方法的靈敏度、陽性預(yù)測值、假陰性率、診斷符合率比較(%)

表2 兩種檢測方法的特異度、假陽性率比較(%)

3 討論

兒童肺炎病原體感染臨床沒有典型的癥狀表現(xiàn),很容易發(fā)生誤診或漏診,所以,一定要及早診斷治療,才能避免患者病情被延誤。MP感染是經(jīng)呼吸道飛沫傳播,尤其是兒童為高發(fā)人群,發(fā)病均由呼吸道感染開始,經(jīng)X線檢測能發(fā)現(xiàn)患兒肺部有多種表現(xiàn),肺紋理增多,選擇痰、鼻或咽拭子培養(yǎng)能獲取標(biāo)本檢測［4-7］。

PCR應(yīng)用于MP檢測具有明顯優(yōu)勢,數(shù)個(gè)標(biāo)本同時(shí)擴(kuò)增,24 h內(nèi)就可以完成。有研究發(fā)現(xiàn),PCR對支原體表現(xiàn)相同擴(kuò)增帶,檢測細(xì)菌擴(kuò)增結(jié)果均呈陰性,經(jīng)呼吸道分離細(xì)菌、其他支原體都沒有發(fā)生預(yù)期擴(kuò)增帶［8-10］。PCR技術(shù)的快速性、高敏感性和高特異度用于MP檢測工作中,無放射性污染和交叉反應(yīng)。臨床實(shí)際應(yīng)用時(shí)PCR技術(shù)會(huì)存在一些困難,例如：樣本處理不當(dāng),診斷敏感性和準(zhǔn)確性都會(huì)受到影響,操作復(fù)雜,這些都會(huì)導(dǎo)致PCR的檢測難度加大［11,12］。

MP快速培養(yǎng)法可以直接檢測病原體,操作簡單,而且速度較快,敏感性較高,短時(shí)間內(nèi)就可以得到檢測結(jié)果,發(fā)病初期就能檢測出MP。但是,其特異度與假陽性率均不及PCR檢測法,這與MP快速培養(yǎng)法培養(yǎng)液有關(guān)［13］,真菌也能生長于培養(yǎng)液中,會(huì)出現(xiàn)假陽性,當(dāng)MP存活時(shí)才能檢出,而PCR快速檢測技術(shù)則不受此因素影響。

本文研究結(jié)果顯示,97例疑似MP感染患者中,87例確診MP感染陽性,10例MP感染陰性。MP快速培養(yǎng)法、PCR快速檢測技術(shù)的靈敏度、陽性預(yù)測值、假陰性率、診斷符合率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。PCR快速檢測技術(shù)的特異度90.00%明顯高于MP快速培養(yǎng)法的40.00%,假陽性率10.00%低于MP快速培養(yǎng)法的60.00%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

綜上所述,PCR快速檢測技術(shù)檢測MP感染的特異度更優(yōu),值得推廣應(yīng)用。