慢性乙型肝炎化學(xué)發(fā)光HBsAg定量與HBV-DNA相關(guān)性研究

李寧俠 王海東 李潔

在世界范圍內(nèi)都有乙型病毒性肝炎流行，且在各型肝炎中其危害最重，世界范圍內(nèi)約有3.5億HBV感染者，其中15%～25%患者隨病情發(fā)展最終將死于相關(guān)的肝損傷、肝硬化和肝細(xì)胞癌[1]，對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成極大威脅。醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)已經(jīng)開(kāi)展了很多相關(guān)檢查，理解不同方法學(xué)優(yōu)缺點(diǎn)和相互揚(yáng)長(zhǎng)補(bǔ)短組合，對(duì)于慢性乙型肝炎診治有重要意義。本研究對(duì)126例慢性乙型肝炎患者兩對(duì)半模式、HBsAg定量與HBV-DNA進(jìn)行回顧統(tǒng)計(jì)分析，以期為臨床和檢驗(yàn)工作者提供參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料隨機(jī)選取2016年6月～2017年1月在我院PCR儀檢測(cè)HBV-DNA的患者，結(jié)合病史，嚴(yán)格按照2015年中華醫(yī)學(xué)會(huì)發(fā)布的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，并排除其他疾病。篩選126例為研究對(duì)象，其中男64例，女62例，年齡19～83歲，平均48歲。在本研究HBV-DNA載量分組中，HBV-DNA水平＜1.0E+3IU/ml為低值；HBVDNA水平＜1.0E+7IU/ml且≥1.0E+3IU/ml為中值；HBV-DNA水平≥1.0E+7IU/ml為高值。

1.2 檢測(cè)方法使用乙肝五項(xiàng)酶免試劑盒，檢測(cè)乙肝兩對(duì)半模式；使用乙型肝炎病毒表面抗原測(cè)定試劑盒（化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法），檢測(cè)HBsAg含量，試劑有效線性范圍0.05～250IU/ml；使用乙肝病毒核酸定量試劑盒在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)HBV-DNA水平，最低檢測(cè)下限1.0E+2IU/ml。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料統(tǒng)計(jì)描述及交叉表，完成指標(biāo)分布及多指標(biāo)率的統(tǒng)計(jì)，使用非參數(shù)相關(guān)系數(shù)統(tǒng)計(jì)相變量之間相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 126例慢性乙肝HBsAg定量分布HBsAg定量最小值0.05IU/ml有5例（4.0%），HBsAg定量0.05～250.00IU/ml有38例（約30.0%），最大值≥250.00 IU/ml有83例，說(shuō)明標(biāo)本未稀釋?zhuān)s66.0%患者的實(shí)測(cè)值未完全測(cè)定出來(lái)，只是給出半定量結(jié)果。

2.2 126例慢性乙肝HBV-DNA水平分布在126例慢性乙肝患者中，有56例（44.4%）患者HBVDNA病毒載量低或處于低復(fù)制，有17例（13.5%）患者HBV-DNA病毒載量高或處于高復(fù)制，還有53例（42.1%）患者HBV-DNA病毒載量和復(fù)制水平處于中等水平，總體在慢性乙肝患者中，有乙肝病毒HBV-DNA復(fù)制的患者占比高達(dá)55.6%。

2.3 HBsAg定量與HBV-DNA的相關(guān)性HBsAg定量與HBV-DNA之間相關(guān)系數(shù)-0.063，P值0.486（P＞0.05），說(shuō)明HBsAg定量與HBV-DNA之間無(wú)相關(guān)性。

2.4 兩對(duì)半模式與HBV-DNA的關(guān)系在不同兩對(duì)半模式中，HBV-DNA復(fù)制水平見(jiàn)表1，兩對(duì)半模式與它的乙肝病毒HBV-DNA有一定關(guān)系，在1.3.5乙肝模式中，HBV-DNA復(fù)制率可以達(dá)到71.4%，在1.4.5模式和1.5模式中分別為51.1%和50.0%。

表1 126例不同模式慢性乙型肝炎HBV-DNA復(fù)制率

3 討論

乙型肝炎病毒感染的一般病史分為4個(gè)階段：免疫耐受期和清除期、低復(fù)制期及再活躍期[3]。實(shí)驗(yàn)室通常使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的方法檢測(cè)乙型肝炎病毒，且相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)期，將乙肝表面抗原（HBsAg）檢測(cè)作為初診或大規(guī)模流行病學(xué)篩查的首選方法；HBV-DNA水平檢測(cè)，常用于判斷傳染性的強(qiáng)弱及抗病毒治療效果，此指標(biāo)在臨床得到廣泛應(yīng)用，近年來(lái)，隨著HBsAg定量檢測(cè)技術(shù)發(fā)展，該方法臨床應(yīng)用價(jià)值日益受到關(guān)注。本研究隨機(jī)選取某一時(shí)間段，收集在實(shí)時(shí)熒光定量?jī)x上檢測(cè)過(guò)HBVDNA的標(biāo)本為原始樣本，同時(shí)結(jié)合病史，按照慢性乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，篩選126例為研究對(duì)象，是逆著以往乙肝診斷程序，常規(guī)實(shí)驗(yàn)室乙肝診斷順序是先篩查乙肝表面抗原或者兩對(duì)半及肝功能，依據(jù)以上初檢項(xiàng)目，然后選做HBV-DNA檢測(cè)，因此本次研究采用化學(xué)發(fā)光HBsAg定量與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）兩對(duì)半模式檢測(cè)的方法之間優(yōu)劣沒(méi)有可比性，有研究在低濃度HBsAg檢測(cè)方法中，化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA）靈敏度優(yōu)于電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA）、國(guó)產(chǎn)發(fā)光方法及ELISA法，對(duì)低濃度HBsAg的檢出靈敏度、特異性，ECLIA法與CMIA法一致性較好[4]。本研究中，HBsAg定量與HBV-DNA之間無(wú)相關(guān)性，在其他研究中顯示患者血清中HBV-DNA水平與HBsAg及HBeAg滴度呈正相關(guān)，而且在高濃度HBV-DNA水平中，兩者的一致性更好[5]。本次研究中使用萬(wàn)泰Caris-200化學(xué)發(fā)光儀，有效線性范圍0.05～250IU/ml，126例中，≥250 IU/ml樣本有83例，占比66.0%超線性范圍，沒(méi)有測(cè)出指標(biāo)真值，即使與另一個(gè)定量指標(biāo)統(tǒng)計(jì)相關(guān)系數(shù)-0.063，所顯示“無(wú)相關(guān)性”是沒(méi)有意義。經(jīng)研究者文獻(xiàn)匯總分析，一致認(rèn)為血清HBsAg水平受諸多因素影響，比如HBV變異株、初次感染時(shí)間、年齡、性別、人種、檢測(cè)方法、治療策略等，但還認(rèn)為血清HBsAg定量水平在慢性HBV感染病程中和抗病毒治療過(guò)程中均有一定的動(dòng)態(tài)變化。血清HBsAg的動(dòng)態(tài)變化為臨床醫(yī)師判斷是否選擇抗病毒治療提供了一定的依據(jù)，其具體的變化規(guī)律不明確，與HBV-DNA等指標(biāo)的相關(guān)性尚存在爭(zhēng)議[6]。在乙肝兩對(duì)半中，抗原持續(xù)存在或消失是由HBV疾病譜和自然史決定的，而抗體是否出現(xiàn)是由人體免疫應(yīng)答狀態(tài)決定，兩者相對(duì)獨(dú)立。慢性乙型肝炎HBV-DNA病毒量與它的兩對(duì)半模式有一定關(guān)系，在1.3.5兩對(duì)半模式中，HBV-DNA復(fù)制率可以達(dá)到71.4%，與536例血清HBeAg陽(yáng)性的乙型肝炎患者中HBV-DNA陽(yáng)性檢出率為72.9%的研究結(jié)果一致[7]；在1.4.5模式和1.5模式中HBV-DNA復(fù)制率分別為51.1%和50.0%，三種兩對(duì)半模式HBVDNA復(fù)制率均高于50.0%，在HBeAg陰性CHB患者，血清HBV-DNA及HBsAg和HBV cccDNA的相關(guān)性研究中，血清HBV-DNA是反映肝纖維化及肝細(xì)胞炎癥的指標(biāo)，預(yù)示著HBeAg陰性的CHB患者轉(zhuǎn)變?yōu)樵倩顒?dòng)期[8]。

本研究顯示，在HBsAg定量指標(biāo)方法選擇方面，盡可能選擇線性范圍寬的方法和試劑，否則HBsAg定量結(jié)果只能用于乙型肝炎感染患者的篩查，不能在抗病毒及遠(yuǎn)期療效判斷方面發(fā)揮作用，所以，HBsAg定量檢測(cè)線性范圍過(guò)小，不能完全說(shuō)明HBsAg定量與HBV-DNA之間無(wú)相關(guān)性，慢性乙型肝炎患者，無(wú)論是哪種兩對(duì)半模式，血清中經(jīng)常監(jiān)測(cè)HBV-DNA復(fù)制水平是必需的。