不同濃度交泰丸及其組成藥物對小鼠鎮(zhèn)靜作用的比較

倪小芬，林思思，陳錢，袁拯忠

（1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 中醫(yī)科，浙江 溫州 325015；2.溫州醫(yī)科大學(xué)，浙江 溫州 325035）

交泰丸，名見清代《四科簡效方》，出自明代《韓氏醫(yī)通》，由黃連、肉桂組成，兩藥組方比例為10:1。本方藥味簡潔，配伍獨(dú)特，二藥寒熱相伍，清溫并用，以清為主，功能清心除煩，引火歸元，交通心腎，對心腎不交之失眠療效顯著，為后世廣泛推崇。臨床對交泰丸鎮(zhèn)靜助眠作用研究較廣泛，季旭明等[1]統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)失眠證方180余方中黃連出現(xiàn)的方劑占26%，應(yīng)用肉桂的方劑占17%，黃連與肉桂同時(shí)出現(xiàn)的方劑為16首，且大多出現(xiàn)在交泰丸問世之后。王秋等[2]驗(yàn)證了交泰丸中黃連用量十倍于肉桂時(shí)抑制小鼠自發(fā)活動(dòng)的效果最佳。汪文萊等[3]研究發(fā)現(xiàn)氨基酸是黃連配伍肉桂前后起作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，但影響氨基酸煎出量的因素并不是簡單的成分加合作用。這些研究都驗(yàn)證了其治療鎮(zhèn)靜助眠的功效。配伍是中藥臨床應(yīng)用的關(guān)鍵，本實(shí)驗(yàn)旨在研究不同濃度的交泰丸及其拆方黃連、肉桂對小鼠的鎮(zhèn)靜作用，以驗(yàn)證交泰丸的鎮(zhèn)靜作用和主要藥效組分，為其治療鎮(zhèn)靜失眠的機(jī)制研究和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)C57/BL6 小鼠72 只，上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)SCXK（滬）2013-0016，雄性，體質(zhì)量（20±2）g，6周齡，飼養(yǎng)在恒溫、恒濕、隔音、靜電屏蔽、12 h/12 h明暗光照環(huán)境下，光照度≈100 lux。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)器材：動(dòng)物行為學(xué)視頻系統(tǒng)和DigBehv動(dòng)物行為分析系統(tǒng)（上海吉量軟件科技公司），申勝R502B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海科興儀器有限公司）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)藥材：黃連（杭州華東中藥飲片有限公司，批號(hào)171009），肉桂（浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片有限公司，批號(hào)170801），滅菌注射用水（安徽雙鶴藥業(yè)，批號(hào)1704126A）。酒石酸唑吡坦片（賽諾菲制藥，國藥準(zhǔn)字J20140021）10 mg/片，研缽研細(xì)，用滅菌注射用水制成濃度0.200 mg/mL的溶液。黃連和肉桂10:1混勻，粉碎，加適量蒸餾水浸泡20 min、煎煮30 min，過濾、濃縮、精濾，制成交泰丸高濃度（0.220 g/mL）、交泰丸中濃度（0.110 g/mL）、交泰丸低濃度（0.055 g/mL），分別取黃連、肉桂，制成黃連高濃度（0.200 g/mL），黃連中濃度（0.100 g/mL），黃連低濃度（0.050 g/mL），肉桂高濃度（0.030 g/mL），均置于容量瓶中4 ℃冷藏備用。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥：72只小鼠分為9組，每組各8只，以上述配置好的溶液灌胃。每只小鼠灌胃量1次按照0.300 mL計(jì)算（1次不超過0.500 mL）?？瞻讓φ战M給予等量的注射用水。

1.2.2 檢測方法及時(shí)間：每天19：00給藥。每組檢測前進(jìn)隔音箱適應(yīng)1 d。從第1 次給藥后開始檢測，用動(dòng)物行為學(xué)視頻分析系統(tǒng)連續(xù)記錄給藥后第1、第3、第5、第7天給藥后15 min、30 min、1 h、3 h、12 h、24 h及停藥后第1天數(shù)據(jù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。計(jì)量資料用表示，多時(shí)間點(diǎn)自主活動(dòng)次數(shù)比較采用重復(fù)測量資料的方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠給藥后15 min自主活動(dòng)次數(shù) 與空白對照組比較，第3、第5、第7天給藥后15 min，黃連高濃度組和黃連中濃度組自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其余各給藥組自主活動(dòng)次數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；停藥后第1天各給藥組自主活動(dòng)次數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 各組小鼠給藥后30 min自主活動(dòng)次數(shù) 與空白對照組比較，第1、第3、第5、第7天給藥后30 min，交泰丸高濃度組、唑吡坦組自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；停藥后第1天交泰丸高濃度組自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表1 各組小鼠給藥后15 min自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×102）

表1 各組小鼠給藥后15 min自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×102）

與空白對照組比：aP ＜0.05

2.3 各組小鼠給藥后1 h自主活動(dòng)次數(shù) 與空白對照組比較，第1、第3、第5、第7天給藥后1 h，交泰丸高濃度組、唑吡坦組自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；第3、第5、第7天給藥后1 h，交泰丸中濃度組、黃連高濃度組、黃連中濃度組自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；第7天給藥后1 h，交泰丸低濃度組自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；停藥后第1天，交泰丸高濃度組自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表2 各組小鼠給藥后30 min自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×103）

表2 各組小鼠給藥后30 min自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×103）

與空白對照組比：aP ＜0.05

表3 各組小鼠給藥后1 h自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×103）

表3 各組小鼠給藥后1 h自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×103）

與空白對照組比：aP ＜0.05

2.4 各組小鼠給藥后3 h自主活動(dòng)次數(shù) 與空白對照組比較，第1、第3、第5、第7天給藥后3 h，交泰丸高濃度組、唑吡坦組自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；第7天給藥后3 h，黃連高濃度組自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；停藥后第1天交泰丸高濃度組自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 各組小鼠給藥后3 h自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×103）

表4 各組小鼠給藥后3 h自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×103）

與空白對照組比：aP ＜0.05

2.5 各組小鼠給藥后12 h自主活動(dòng)次數(shù) 與空白對照組比較，給藥第1、第3、第5、第7天，交泰丸高濃度組、唑吡坦組給藥后12 h自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；給藥第7天，黃連高濃度組給藥后12 h自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；停藥后第1天，交泰丸高濃度組給藥后12 h自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表5。

表5 各組小鼠給藥后12 h自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×104）

表5 各組小鼠給藥后12 h自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×104）

與空白對照組比：aP ＜0.05

2.6 各組小鼠給藥后24 h自主活動(dòng)次數(shù) 與空白對照組比較，給藥第1、第3、第5、第7天交泰丸高濃度組、唑吡坦組24 h自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；給藥第7天，黃連高濃度組24 h自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；停藥第1天，交泰丸高濃度組24 h自主活動(dòng)次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表6。

3 討論

中醫(yī)理論認(rèn)為睡眠和清醒是人體寐（睡）與寤（醒）之間陰陽動(dòng)靜對立統(tǒng)一的功能狀態(tài)，并運(yùn)用陰陽變化、營衛(wèi)運(yùn)行、心神活動(dòng)來解釋睡眠過程，可以指導(dǎo)睡眠相關(guān)疾病的治療。通過國內(nèi)外數(shù)據(jù)庫檢索和分析[4]，結(jié)合承擔(dān)的失眠多中心臨床研究結(jié)果[5]，陰虛火旺是失眠的主要證型。交泰丸以黃連大寒大苦，清泄亢盛之心火，肉桂辛甘大熱，助陽補(bǔ)火，引火歸源，二者交通心腎，成為歷代醫(yī)家治療心腎不交型失眠的經(jīng)典方劑。方中黃連和肉桂均不屬于安神藥，卻都有鎮(zhèn)靜作用。黃連的活性成分為生物堿，其中主要的小檗堿和黃連堿可能通過增加PCPA失眠小鼠下丘腦中5-HT和NE含量，發(fā)揮鎮(zhèn)靜、催眠的作用[6]。肉桂的活性成分是揮發(fā)油，其中以肉桂醛為主，含少量桂皮酸等，肉桂醛對小鼠有明顯的鎮(zhèn)靜作用，桂皮醛有中樞抑制和興奮作用，可能是其與中樞神經(jīng)內(nèi)單胺能神經(jīng)元相互作用的結(jié)果。

表6 各組小鼠給藥后24 h自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×104）

表6 各組小鼠給藥后24 h自主活動(dòng)次數(shù)（每組8只，±s，×104）

與空白對照組比：aP ＜0.05

黃連和肉桂均無安神之功，合用卻有助眠之效。目前藥代動(dòng)力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)交泰丸組方配伍改變可影響其生物利用率，盛亞男等[7]用高效液相色譜分析法發(fā)現(xiàn)交泰丸所含鹽酸小檗堿、肉桂酸和桂皮醛的含量與藥效呈正相關(guān)，三者可能主導(dǎo)交泰丸鎮(zhèn)靜催眠作用。白妮等[8]研究發(fā)現(xiàn)交泰丸黃連、肉桂配伍中，肉桂能提高黃連小檗堿的的生物利用度。朱雪梅等[9]研究發(fā)現(xiàn)交泰丸復(fù)方煎劑與黃連單煎劑總生物堿提取率存在差異，且隨肉桂比例提高，總生物堿煎出率降低。陳廣等[10]研究發(fā)現(xiàn)交泰丸水煎劑黃連對肉桂醛的溶出有抑制作用。HE等[11]對5種原小檗堿類生物堿藥代動(dòng)力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)交泰丸在PCPA失眠癥大鼠體內(nèi)生物利用度較正常大鼠高，可充分發(fā)揮其治療作用，并且多次給藥有助于提高藥物吸收率和生物利用度。由此可見，合理的給藥和合理的黃連和肉桂配伍通過影響彼此的藥物代謝發(fā)揮較好的鎮(zhèn)靜催眠效果。ZOU等[12]發(fā)現(xiàn)交泰丸通過調(diào)節(jié)生物節(jié)律和調(diào)節(jié)炎癥因子改善胰島素耐受和炎癥引起的慢性失眠。劉光輝等[13]研究認(rèn)為交泰丸改善PCPA導(dǎo)致的代謝紊亂，下調(diào)苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸、多巴胺、谷氨酸谷氨酰胺代謝等通路。有研究[14-16]發(fā)現(xiàn)交泰丸通過下丘腦5-HT、NE、覺醒肽Orexin A調(diào)節(jié)HPA軸改善大鼠失眠。

本研究結(jié)果表明高劑量交泰丸在給藥后30 min已經(jīng)發(fā)揮鎮(zhèn)靜作用，表明交泰丸起效比較迅速。給藥后，藥效維持12 h，而且整個(gè)給藥期間，高劑量的交泰丸保持良好的鎮(zhèn)靜效果，即使在停藥后24 h仍然可以維持這樣的效果，體現(xiàn)中藥藥效的穩(wěn)定性和持續(xù)性特點(diǎn)。與中低劑量交泰丸組比較，高劑量的交泰丸的鎮(zhèn)靜作用更加顯著，因此認(rèn)為交泰丸存在劑量依賴性的鎮(zhèn)靜效果。高劑量黃連單藥連續(xù)給藥7 d后可以表現(xiàn)出鎮(zhèn)靜作用，其鎮(zhèn)靜作用也是集中在給藥后12 h。高劑量黃連單藥在第3、第5、第7天給藥后15 min、1 h及第7天給藥后3、12、24 h的自主活動(dòng)次數(shù)減少，而停藥后自主活動(dòng)恢復(fù)，表明黃連單藥的鎮(zhèn)靜作用起效較快，但是藥效缺乏穩(wěn)定性和持續(xù)性。與之相反，高劑量的肉桂在整個(gè)給藥期間均沒有表現(xiàn)出良好的鎮(zhèn)靜作用，該藥可能沒有直接的鎮(zhèn)靜作用，但是可以協(xié)同黃連，使其具有更加穩(wěn)定和持續(xù)的鎮(zhèn)靜效果。綜上所述，交泰丸的鎮(zhèn)靜作用與藥物劑量相關(guān)，并表現(xiàn)出中醫(yī)藥復(fù)方療效的持續(xù)性和穩(wěn)定性優(yōu)勢。交泰丸有鎮(zhèn)靜藥效，其中黃連發(fā)揮主要作用。