雞大腸桿菌病病原的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

荊麗珍

摘 要 本試驗(yàn)?zāi)康氖遣捎?種常用抗菌藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，再篩選出敏感藥物，為預(yù)防和治療大腸桿菌病提供理論依據(jù)并指導(dǎo)臨床用藥。方法是對(duì)送檢的病死雞和瀕死雞進(jìn)行了剖檢、病理學(xué)診斷和病原檢測(cè)，無(wú)菌采取的病死雞組織進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定，并通過(guò)藥敏紙片法對(duì)其純化培養(yǎng)物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

關(guān)鍵詞 大腸桿菌；分離與鑒定；藥敏試驗(yàn)

雞大腸桿菌病是由某些致病性血清型大腸埃希菌引起的雞的不同類型疾病的總稱。大腸桿菌致病性菌株的致病因子是由侵襲力、感染力和致病性這三個(gè)主要特征決定。大腸桿菌主要有菌體抗原、莢膜抗原、鞭毛抗原三個(gè)病原類型，這三種抗原形成了眾多的血清型。該菌對(duì)外界抵抗力比較弱，一般高壓蒸汽滅菌鍋121℃30min便可將其殺死，對(duì)一般消毒藥的抵抗力也很弱，常用的消毒藥水均能將其殺死。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)海陽(yáng)六合雞場(chǎng)送檢的瀕臨死亡的雞只和病死雞進(jìn)行了解剖檢查，并且進(jìn)行了病理學(xué)診斷和病原檢測(cè)，確診該海陽(yáng)雞場(chǎng)發(fā)生了大腸桿菌病。通過(guò)做藥敏試驗(yàn)，選擇出幾種藥物，而這些藥物通常是對(duì)此致病菌比較敏感的，然后進(jìn)行藥物治療，以此達(dá)到控制疫情效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

所有病料來(lái)自海陽(yáng)六合養(yǎng)殖場(chǎng)送檢的疑似大腸桿菌病的病雞、瀕臨死亡雞40只，已經(jīng)死亡雞只的死亡時(shí)間不超過(guò)18h。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為：20只健康小白鼠和20只7日齡健康雛雞。

1.1.2 儀器與設(shè)備

恒溫箱，光學(xué)顯微鏡，全自動(dòng)高壓滅菌器，超凈工作臺(tái)，美國(guó)微量移液器、剪刀、試管等。

1.1.3 培養(yǎng)基與試劑

伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、普通肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。

卡那霉素、新霉素、慶大霉素、青霉素、鏈霉素和四環(huán)素等藥敏片，硝酸鹽還原劑、氧化酶試劑、微量生化試驗(yàn)管。

1.2 方法

1.2.1 外部觀察和病理剖檢

根據(jù)大腸桿菌病的流行病學(xué)特點(diǎn)，表現(xiàn)出來(lái)臨床癥狀，以及對(duì)送檢的40只病死雞和瀕臨死亡的雞只進(jìn)行的病理臨床剖檢及相關(guān)病理癥狀觀察，根據(jù)表現(xiàn)出來(lái)的相關(guān)剖檢特征， 可以對(duì)大腸桿菌病作出初步診斷。

1.2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)

在無(wú)菌條件下采集瀕臨死亡雞只的肝臟、腎臟、脾臟、心血等組織器官，分別接種在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、伊紅美蘭瓊脂平板及普通營(yíng)養(yǎng)肉湯，放于恒溫箱中37℃，24h后觀察培養(yǎng)基的變化。

1.2.3 染色鏡檢

用接種環(huán)分別挑取具有代表性的麥康凱瓊脂、伊紅美蘭瓊脂和普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)24h的菌落進(jìn)行涂片，將涂片在火焰上方15-20cm處進(jìn)行順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)固定，在火焰中穿過(guò)三次，等待涂片冷卻后進(jìn)行革蘭氏染色。顯微鏡下觀察并記錄菌體形態(tài)。

1.2.4 生化試驗(yàn)

a. 糖發(fā)酵試驗(yàn)：用滅菌接種環(huán)取疑似菌，依次將其接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和蔗糖發(fā)酵管內(nèi)，置于溫箱內(nèi)37℃，24h，然后對(duì)觀察到的現(xiàn)象進(jìn)行記錄。

b. MR試驗(yàn)和VP試驗(yàn)：用滅菌接種環(huán)取疑似菌，接種于葡萄糖蛋白胨水，置于溫箱內(nèi)37℃，24h之后分別加入MR和VP指示劑，然后觀察并記錄結(jié)果。

c. 吲哚試驗(yàn)：取蛋白胨水培養(yǎng)管，先往培養(yǎng)管內(nèi)加入少量的乙醚，然后把橡膠塞密切塞上，來(lái)回?fù)u動(dòng)試管，充分混勻乙醚和培養(yǎng)液，最后在試管架上靜置片刻，等到乙醚浮在液面上層的時(shí)候，沿著管壁加入2-3滴吲哚試劑，并觀察其顏色變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 外部觀察及剖檢結(jié)果

患病雞只多精神狀態(tài)差，羽毛松亂，不想進(jìn)食，腹部膨大，糞便呈灰綠色或黃色。有的病雞肛門下方羽毛潮濕、污穢粘連，關(guān)節(jié)腫脹、跛行，眼睛顏色呈灰白色，角膜污濁不清；剖檢病雞肝臟腫大、質(zhì)脆，有纖維素性壞死灶；脾臟出現(xiàn)腫大，肺臟有充血、淤血的現(xiàn)象；腎腫大，有尿酸鹽附著；十二指腸有出血變化。

2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果

將接種細(xì)菌的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)20h，可見上面出現(xiàn)大小均等偏中間，高于瓊脂板圓形，表面呈現(xiàn)光滑濕潤(rùn)的菌落，半透明狀，偏灰色的菌落。在麥康凱瓊脂平板上，表面呈中等大小，光滑濕潤(rùn)的粉紅色菌落。在伊紅美蘭瓊脂上長(zhǎng)出黑色帶金屬光澤的菌落。在普通肉湯中平均散在其中呈濁狀，在試管的最下面可見灰白色物質(zhì)，用手扇一下聞到糞臭味。

2.3 細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果

病死雞只的肝臟、腎臟、脾臟等組織器官培養(yǎng)物經(jīng)過(guò)涂片染色，顯微鏡下鏡檢，都可出現(xiàn)兩端鈍圓，多數(shù)呈散在排列，有的有2-3個(gè)連在一起的革蘭氏陰性短桿菌，沒有芽孢。

2.4 生化試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果詳見表1.

3 討論與小結(jié)

本次試驗(yàn)是主要從可疑病雞及病死雞體內(nèi)分離得到的可疑菌，通過(guò)鏡下及培養(yǎng)條件觀察、生理生化試驗(yàn)分析鑒定，鑒定的結(jié)果為雞大腸桿菌的感染。通過(guò)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果，得出卡那霉素、新霉素、慶大霉素等藥物對(duì)大腸桿菌敏感度高，四環(huán)素藥物為中度敏感的藥物，青霉素、鏈霉素等藥物具有耐藥性。根據(jù)大腸桿菌抗原鑒定和擴(kuò)增結(jié)果，由此更加斷定我所分離得到的待測(cè)菌為大腸桿菌。由于不同菌株對(duì)藥物的敏感性存在明顯差異，一般在使用藥物治療病原菌時(shí)，應(yīng)該增加對(duì)病原菌的耐藥性檢測(cè)，從而選擇出對(duì)病原菌敏感的藥物，為臨床合理用藥做出指導(dǎo)，用以減緩細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，疫苗免疫，合理選藥、提高療效。

參考文獻(xiàn)：

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