解肌寧嗽口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究

袁珍珍，戰(zhàn)偉，孔祥攀，劉靜

(上海醫(yī)藥集團(tuán)青島國風(fēng)藥業(yè)股份有限公司，山東 青島 266510)

解肌寧嗽口服液是由紫蘇葉、前胡、葛根、半夏(制)、桔梗、杏仁水等14味藥組成的中藥復(fù)方制劑，具有宣肺、化痰止咳的功效。臨床上主要用于治療小兒頭痛身熱、咳嗽痰盛、氣促、咽喉疼痛[1]。在解肌寧嗽口服液藥理研究中顯示，解肌寧嗽口服液對由2,4-二硝基酚大鼠發(fā)熱模型有顯著的解熱作用，對由蛋清所致的大鼠足腫脹有明顯的抗炎作用，對氨水引起的小鼠咳嗽有顯著的鎮(zhèn)咳作用，能顯著增加小鼠器官的酚紅排出量，有祛痰作用，對由醋酸引起的小鼠扭體有抑制作用，長毒試驗(yàn)未見異常病理改變[2]。解肌寧嗽口服液組方中葛根中主要成分為異黃酮類,包括葛根素、大豆苷等[3-5]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)葛根素具有調(diào)控炎癥因子表達(dá)[6]、抗骨質(zhì)疏松[7]、降糖[8]、抗癌[9]等多種作用。葛根在此方中具有解肌退熱、透診、生津止渴、升陽止瀉的重要作用[10-11]。

目前文獻(xiàn)報(bào)道解肌寧嗽口服液成分復(fù)雜，對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的文章較少，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用的方法操作步驟煩瑣。本文創(chuàng)新性建立了解肌寧嗽口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，采用高效液相色譜(HPLC)法測定制劑中葛根的主要成分葛根素的含量，該方法操作簡便，能更有效地控制制劑質(zhì)量。

1 材料

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀，包括G7114A檢測器、G7129A自動(dòng)進(jìn)樣器、G7116A柱溫箱。

1.2 試藥 葛根素對照品(批號：110752-201615，純度：95.4%，中國食品藥品檢定研究院)；解肌寧嗽口服液3批(上海醫(yī)藥集團(tuán)青島國風(fēng)藥業(yè)股份有限公司，批號：170501、170701、170702)；檸檬酸為分析純，甲醇為色譜甲醇，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性[12]色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse plus C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)為甲醇-0.1%檸檬酸溶液(25∶75，V/V)，檢測波長為250 nm，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為30 ℃。理論塔板數(shù)按葛根素峰計(jì)算不低于4 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取葛根素對照品適量，加溶劑甲醇-0.1%檸檬酸溶液(25∶75)制成每1 mL含葛根素0.921 mg的對照品貯備溶液。精密吸取上述對照品貯備溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇-0.1%檸檬酸溶液(25∶75)稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為18.42 μg·mL-1的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 精密量取樣品2 mL至50 mL容量瓶中，加甲醇-0.1%檸檬酸溶液(25∶75)稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按處方制備不含葛根的陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制得陰性溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)[5,13]分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示供試品色譜圖中葛根素與對照品色譜峰保留時(shí)間一致，其他成分對葛根素測定無干擾，詳見圖1。

A.對照品;B.樣品;C.陰性對照品 1.葛根素圖1 HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對照品溶液2、5、10、15、20 μL分別注入高效液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，測定峰面積積分值，以葛根素的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=4 469.7X+0.151 2，R2=1。結(jié)果表明，葛根素進(jìn)樣量在0.036 8～0.368 4 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下葛根素對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積積分值，計(jì)算峰面積RSD為0.3%(n=5)，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取按“2.2.2”項(xiàng)下制備的同一供試品溶液(批號：170501)，分別在0、2、4、8、12、24 h精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積積分值，計(jì)算峰面積RSD為0.2%(n=6)，結(jié)果表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能夠滿足測定需要。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取穩(wěn)定性考察樣品(批號：170501)，按“2.2.2”項(xiàng)下平行制備5份供試品溶液，分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積積分值，計(jì)算葛根素的平均含量為0.860 mg·mL-1，峰面積RSD為0.4%，結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取1 mL已知含量為0.860 mg·mL-1的樣品(批號：170501)平行樣品6份，分別精密加入“2.2.1”項(xiàng)下對照品貯備液1 mL(每1 mL含葛根素0.921 mg)，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備成加樣供試品溶液，精密吸取10 μL注入液相色譜儀，測定含量并計(jì)算回收率，結(jié)果葛根素平均回收率為 100.0%，RSD為0.8% ，表明本方法準(zhǔn)確可靠，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測定 取3批解肌寧嗽口服液穩(wěn)定性考察樣品(批號：170501、170701、170702)，分別按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，在上述條件下測定并計(jì)算葛根素含量，結(jié)果見表2。

研究結(jié)果表明，本方法簡單、準(zhǔn)確，適用于解肌寧嗽口服液中葛根素含量的檢測。

表2 樣品含量結(jié)果

3 討論

3.1 方法建立的必要性 解肌寧嗽口服液中葛根素含量測定現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為中華人民共和國原衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)WS3-083-(Z-27)-95(Z)。根據(jù)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)，需要依次通過柱色譜法、薄層色譜法、紫外分光光度法3種試驗(yàn)方法的使用才能完成葛根素含量測定。樣品處理過程復(fù)雜煩瑣，影響結(jié)果準(zhǔn)確性及重現(xiàn)性。建立對HPLC法測定葛根素含量是非常必要的。

3.2 流動(dòng)相的選擇 本試驗(yàn)過程中分別采用甲醇-水(25∶75)[14]，甲醇-0.1%磷酸(25∶75)[15]，甲醇-0.1%檸檬酸(25∶75)[16]作為流動(dòng)相進(jìn)行考察，結(jié)果使用前兩種流動(dòng)相均出現(xiàn)色譜峰前沿現(xiàn)象。最終采用甲醇-0.1%檸檬酸(25∶75)作為流動(dòng)相。

3.3 溶劑的選擇 何海雁等[16]研究HPLC 法同時(shí)測定小兒解表顆粒中葛根素的含量中，采用超聲甲醇相關(guān)比例溶解，制備供試品。朱日然等[17]對HPLC法同時(shí)測定柴銀口服液中葛根素含量的研究中，供試品的制備采用50%的甲醇溶解。有資料顯示葛根素在甲醇中溶解，在乙醇中略溶，在水中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。根據(jù)溶解度程度選擇甲醇、乙醇、水或混合溶劑作為備選溶劑，加不同溶劑稀釋。本試驗(yàn)選擇葛根素易溶溶劑甲醇、乙醇及相關(guān)不同比例溶劑稀釋樣品，結(jié)果顯示30%甲醇、50%甲醇、30%乙醇、50%乙醇和70%乙醇外觀澄清，將初步篩選的五種溶劑 量取樣品2 mL 5份分別至50 mL容量瓶中，分別加入上述初步篩選的5種溶劑稀釋，按照上述色譜條件，吸取10 μL進(jìn)樣分析，均出現(xiàn)色譜峰前沿現(xiàn)象?！吨袊幍洹穂12]顯示在流動(dòng)相中添加酸鹽可以提高柱效，改善峰形。在流動(dòng)相水相中加入0.1%磷酸[甲醇-0.1%磷酸(25∶75)]按照上述色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果依然出現(xiàn)峰前沿現(xiàn)象。最終選擇流動(dòng)相甲醇-0.1%檸檬酸(25∶75)作為稀釋溶劑符合要求。

4 結(jié)論

解肌寧嗽口服液是由解肌寧嗽丸改劑型而得，文獻(xiàn)未查詢到解肌寧嗽口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。曲靜等[18]研究解肌寧嗽丸中葛根素含量的測定，建立了解肌寧嗽口丸的質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)。因劑型不同，解肌寧嗽丸檢測標(biāo)準(zhǔn)不適合解肌寧嗽口服液。

本試驗(yàn)采用HPLC法對測定解肌寧嗽口服液中葛根素含量方法進(jìn)行研究，選擇甲醇∶0.1%檸檬酸(25∶75)作為流動(dòng)相，選擇甲醇-0.1%檸檬酸(25∶75)作為稀釋溶劑，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為250 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL，重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均≤2.0%；平均加樣回收率為100.0%，RSD為0.8%(n=6)。此方法在測定解肌寧嗽口服液中方法簡便、重復(fù)性高，高效準(zhǔn)確，這對于解肌寧嗽口服液質(zhì)量控制具有重要意義。