• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    川西高原野生斜莖黃芪根瘤菌的遺傳多樣性

    2019-10-08 09:10:36江華明李仁全彭萬仁劉新春劉松青
    西南農業(yè)學報 2019年8期
    關鍵詞:生長分析

    江華明, 李仁全,彭萬仁, 張 波,劉新春,劉松青

    (1.四川職業(yè)技術學院,四川 遂寧 629000;2.成都師范學院化學與生命科學學院, 四川 成都 611130;3.四川省農業(yè)科學院土壤肥料研究所,四川 成都 610066;4.四川農業(yè)大學農學院,四川 成都 611130)

    【研究意義】豆科植物能通過生物固氮為土壤提供氮素,這比化學肥料更具有可持續(xù)性[1]。 根瘤菌與豆科植物建立共生關系,并把游離的氮氣轉化為氨供植物需要。正是由于這個原因,豆科植物能夠生長在不同類型的土壤中,即使是在缺氮環(huán)境中也能正常生長。斜莖黃芪(沙打旺)野生種在我國東北、華北、西北和西南地區(qū)均有分布。斜莖黃芪根系發(fā)達,適應性強,分布廣泛,是高原草原的優(yōu)良牧草和治沙保土植物。其種子可入藥,為強壯劑,主治神經衰弱[2]。斜莖黃芪抗逆性強,其栽培種產草量大,飼用價值高,對家畜還有一定的保健作用,是我國西部生態(tài)環(huán)境治理和發(fā)展畜牧業(yè)的優(yōu)良草種?!厩叭搜芯窟M展】目前國內學者主要對北方地區(qū)野生斜莖黃芪根瘤菌遺傳多樣性進行了研究。高俊蓮等對來自北方六省市95株斜莖黃芪根瘤菌菌株進行了表型性狀數值分析研究,結果表明,全部供試菌株在83 %相似性水平上分為19個表觀群,顯示出極大的遺傳多樣性,同時,部分菌株表現出很強的抗逆性[3]。采用AFLP指紋圖譜分析技術分析結果表明,在50 %相似性水平上,全部95個菌株被分成31個AFLP群,亦顯示出極大的遺傳多樣性[4]。四川甘孜州位于青藏高原東部。該區(qū)域年均氣溫在5~10 ℃之間,年降水量在400~1000 mm之間,氣候冷涼,降雨較少,晝夜溫差大?!颈狙芯壳腥朦c】本研究從四川甘孜州5縣(雅江、道孚、康定、爐霍、理塘)8個采樣點采集到斜莖黃芪植物根瘤 ,將分離純化出的菌株擬通過BOX-PCR、16S rDNA-RFLP及PCA(Principal Component Analysis)來分析斜莖黃芪根瘤菌的遺傳多樣性;通過16SrDNA序列同源性確定菌株的系統(tǒng)發(fā)育地位;通過測定菌株的耐鹽性、初始pH生長范圍及生長溫度范圍來分析斜莖黃芪根瘤菌的抗逆性?!緮M解決的關鍵問題】以期對我國西南地區(qū),特別是青藏高原橫斷山區(qū)斜莖黃芪根瘤菌的系統(tǒng)進化和分類學地位提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 斜莖黃芪植物根瘤的采集及其根瘤菌的分離和純化

    斜莖黃芪植物根瘤及土壤樣品采集自四川甘孜州雅江、道孚、康定、爐霍、理塘等5縣8個采樣點,同時觀察記錄了所采集根瘤的形狀及結瘤部位。

    參照Vincent的方法[5]從斜莖黃芪植物根瘤中分離和純化根瘤菌[6]。分離的供試菌株和參比菌株列表1。

    表1 斜莖黃芪根瘤菌供試菌株特性及參比菌

    續(xù)表1 Continued table 1

    菌株Strain宿主Host來源 (海拔)Origin (Elevation)16S rDNA序列號Accession No.Max[NaCl] (%) pH范圍pH range溫度(℃) Temperature range SCAU440A.adsurgensBamei, Daofu (3520 m)MK3870866 D4月11日4~37 SCAU446A.adsurgensLuoguoliang, Luhuo(3700 m)24月11日4~50 SCAU447 A.adsurgensLuoguoliang, LuhuoMK387087 24月11日4~50 SCAU448 A.adsurgensLuoguoliang, LuhuoMK387088 24月11日4~50 SCAU449A.adsurgensLuoguoliang, LuhuoMK38708924月10日4~50 SCAU450 A.adsurgensLuoguoliang, LuhuoMK387090 24月10日4~50 SCAU451 A.adsurgensLuoguoliang, LuhuoMK38709124月10日4~50 SCAU452A.adsurgensLuoguoliang, LuhuoMK38709224月10日4~50 SCAU453A.adsurgensLuoguoliang, LuhuoMK38709324月10日4~50 SCAU456A.dsurgens Xiongba, Litang(3640 m)MK38709444月11日4~50 SCAU457A.adsurgensXiongba, LitangMK38709524月10日4~50 SCAU458A.adsurgensXiongba, LitangMK38709644月11日4~50 SCAU461A.adsurgensGaoershi, Yajiang(4100 m)44月11日4~50 M.austylicum WSM2073TBiserrula pelecinusAustraliaM. huakuii CCBAU 2609TAstragalus sinicusNanjing, ChinaR.sullae IS123THedysarum coronariumXinjiang, ChinaS.meliloti ATCC9930TMedicagosativaUSAM.septentrionale SDW014TAstragalus dsurgensLiaoning, ChinaM. temperatum SDW018TAstragalus dsurgensLiaoning, ChinaM.tianshanense CCBAU 3306TGlycyrrhiza llidifloraXinjiang, ChinaM. ciceri ATCC5158TM. amorphae ACCC 19665TCicer arietinumSpainR.leguminosarum USDA2370TAmorpha fruticosaBeijing, ChinaR.etli CFN42TR.leguminosarum 127K17Pisum sativumUSAAg. tumefaciens ATCC 23308TAg. rubi ATCC13335TPhaseolus vulgarisCNPBSPhaseolus sp.USA

    注:R:Rhizobium;M:Mesorhizobium;Ag:Agrobacterium; D:Delayed growth and small colonies;4 ℃:Cultured for 30 days.

    1.2 菌株生理特性分析

    對30株根瘤菌分別進行耐鹽性、初始pH生長范圍及生長溫度范圍的測定[6]。

    1.3 遺傳多樣性分析

    1.3.1 BOX-PCR指紋分析 參照Little[7]的方法分別提取各菌株的總DNA,并在-20 ℃條件下保存?zhèn)溆谩OX-PCR的引物序列為:BOXAIR 5’-CTACGGCAAGGCGACGCTGACG- 3’[8]。具體操作方法請參見文獻6。

    1.3.2 16S rDNA PCR-RFLP指紋圖譜分析 選用正向引物P1(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAGA ACGAACGCT-3’)和反向引物P6(5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCC-3’)[9]。以各菌株的總DNA為模板來擴增16S rDNA,并選用4種限制性內切酶,分別為HaeIII、MspI、HinfI和TaqI。具體操作方法請參見文獻6。

    1.4 斜莖黃芪根瘤菌16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析

    采用1.3.2 的反應體系和程序,分別擴增斜莖黃芪根瘤菌的16S rDNA片段,檢測擴增產物(1500 bp)后送北京華大基因有限公司測定序列,用Neighbor-Joining方法構建系統(tǒng)發(fā)育進化樹。

    1.5 回接結瘤試驗

    取適量斜莖黃芪種子,用無菌水浸泡36 h,用75 %酒精處理5 min,再用0.1 % HgCl2處理 3 min,無菌水漂洗6次,然后浸泡6~8 h。將已表面消毒并浸泡后的種子置于已滅菌的濾紙作墊層的平板中,在2~830 ℃溫箱中萌發(fā)。待種子萌發(fā)至雙葉期(7~10 d),將幼苗放在菌數為108個mL-1的菌液中處理5 min。用已滅菌的鑷子取2株幼苗放置在已滅菌的濾紙與試管壁之間(試管20 mm × 200 mm,內盛無氮營養(yǎng)液5 mL),每個菌株重復3個裝置。將所有裝置放在光照室,每天控制光照時間14 h,定期補充無氮營養(yǎng)液,培養(yǎng)30 d。觀察各植株結瘤情況,統(tǒng)計結瘤數、瘤重。

    1.6 數據分析和處理

    材料間遺傳相似系數(GS)的計算采用Nei[10]的方法。在GenBank 數據庫中獲取斜莖黃芪根瘤菌的序列號(表1)。具體方法請參見文獻[6]。

    2 結果與分析

    2.1 斜莖黃芪根瘤菌的分離、回接和抗逆性分析

    從四川甘孜州5縣8個采樣點(海拔高度從3190~4100 m)獲得的斜莖黃芪植物根瘤中分離純化出30個根瘤菌菌株(康定17 株,道孚1株,爐霍8株,理塘3株,雅江1株),并進行回接結瘤,均能結瘤。同時選取了分屬于Rhizobium、Sinorhizobium、Mesorhizobium、Agrobacterium的14個參比菌株(表1)。

    對30個菌株分別進行耐鹽性、初始pH生長范圍及生長溫度的測定。結果表明,在 2 % NaCl的YMA培養(yǎng)基上,30個供試菌株均能正常生長。進一步測定實驗結果顯示,除9/30的菌株只能耐受 2 % NaCl外,其他菌株中,能在 4 % NaCl及以下的YMA培養(yǎng)基上生長的占7/30, 能在 6 % NaCl及以下的YMA培養(yǎng)基上生長的占9/30,有少數菌株(SCAU409, SCAU415, SCAU423, SCAU433, SCAU 434)還能在 7 % NaCl及以下的培養(yǎng)基上生長; 在全部供試菌株中, 6/30的菌株只能在pH 4~10的培養(yǎng)基上生長, 而其余 24/30的菌株都能在pH 4~11的培養(yǎng)基上生長;20/30的菌株能在4~50 ℃的恒溫條件下生長,所有菌株能在4~37 ℃和 在60 ℃條件下處理10 min后再置28 ℃條件下生長(表1)。

    2.2 遺傳多樣性分析

    2.2.1 BOX-PCR指紋及其主成分分析 (PCA) 以各菌株總DNA為模板, BOXAIR(5’-CTACGGCAAGGCGACGCTGACG-3’)為引物,對30株斜莖黃芪供試菌株及14株參比菌株進行BOX-PCR,在2 %瓊脂糖凝膠電泳板上得到BOX-PCR指紋圖譜(圖1)。

    BOX-PCR聚類分析結果顯示,斜莖黃芪30個供試菌株在相似系數82.4 %水平上分成6個遺傳群。cluster I:SCAU406,SCAU423;cluster II:SCAU411, SCAU418, SCAU427, SCAU434;cluster III:SCAU456; SCAU458,SCAU 461;cluster IV:SCAU408,SCAU409,SCAU416,SCAU433;cluster V: SCAU447,SCAU448,SCAU449,SCAU450,SCAU451,SCAU452,SCAU453;cluster VI:SCAU412,SCAU415,SCAU417,SCAU419,SCAU440,SCAU428 and SCAU457。除SCAU436與M.septentrionaleSDW 014T;SCAU410與M.temperatumSDW 018T聚群外,其余供試菌株均未與參比菌株聚群 (圖2)。

    應用NTSYS-pc(V2.10e)軟件對44個菌株(斜莖黃芪30個供試菌株和14個參比菌株)BOX-PCR的相似系數進行主成分分析,前3個主成分所能解釋的相關性分別為19.93 %、13.72 %和11.82 %,并用EIGEN 程序作主成分之間的三維關系圖(圖3)。從主成分分析結果來看,30個斜莖黃芪根瘤菌的分群和BOX-PCR聚類結果基本一致。但在主成分分析結果中,SCAU 461與R.sullaeIS123聚類成群II;SCAU410與SCAU452聚類成群III;SCAU453進入群I;SCAU428與S.meliloti102F28聚成群V;SCAU440,SCAU436進入群VI并與M.tianshanenseCCBAU 3306T聚類;另外,SCAU456,SCAU458,SCAU440單獨分開。

    1、SCAU406;2、SCAU408;3、SCAU409;4、SCAU410;5、 SCAU411; 6、SCAU412; 7、SCAU415;8、SCAU416;9、SCAU417; 10、SCAU418;11、SCAU419;12、SCAU423;13、SCAU427;14、SCAU428;15、SCAU433;16、SCAU434;17、SCAU436;18、SCAU440;19、SCAU446;20、SCAU447;21、SCAU448;22、SCAU449;23、SCAU450;24、SCAU451;25、SCAU452;26、SCAU453;27、SCAU456;28、SCAU457;29、SCAU458;30、SCAU 461圖1 斜莖黃芪根瘤菌供試菌株BOX-PCR指紋圖譜Fig.1 BOX-PCR fingerprints for Rhizobia in Astragalus adsurgens(M: 250 bp marker)

    圖2 斜莖黃芪根瘤菌供試菌株及參比菌株 BOX-PCR聚類分析圖Fig.2 Dendrogram based on BOX-PCR fingerprints for Rhizobia in Astragalus adsurgens Pall and reference strains

    1: SCAU406;2: SCAU408;3:SCAU409;4:SCAU410;5: SCAU411; 6:SCAU412; 7:SCAU415;8:SCAU416;9:SCAU417; 10:SCAU418;11:SCAU419;12:SCAU423;13:SCAU427;14:SCAU428;15:SCAU433;16:SCAU434;17:SCAU436;18:SCAU440;19:SCAU446;20:SCAU447;21:SCAU448;22:SCAU449;23:SCAU450;24:SCAU451;25:SCAU452;26:SCAU453;27:SCAU456;28:SCAU457;29:SCAU458;30:SCAU 461;32:M. huakuii CCBAU 2609T;33: R.sullae IS123;34: S.meliloti 102F28(S.meliloti ATCC9930T); 35: M. septentrionale SDW 014T;36: M. temperatum SDW 018T;37:M.tianshanense CCBAU 3306T;38、C9:M. ciceri USDA 3378T(M. ciceri ATCC5158T);39:R.leguminosarum USDA2370T; 40:R.etli CFN42; 41:R.leguminosarum 127K17;42:M. amorphae ACCC 19665T; 43:Ag.tumefauensIAM13129T(Ag. tumefaciens ATCC 23308T); 44:Ag. rubi IAM13569T(Ag. rubi ATCC13335T)圖3 斜莖黃芪根瘤菌供試菌株及參比菌株BOX-PCR主成分分析三維圖Fig.3 3-d principal component analysis for BOX-PCR of strains isolated from Astragalus adsurgens and reference strains

    2.2.2 16S rDNA PCR-RFLP聚類分析 聚類結果表明,在83 %的相似性水平上 ,30個斜莖黃芪根瘤菌菌株聚成3個遺傳群,而SCAU457,SCAU415,SCAU418,SCAU453則單獨分開(圖4)。將采用UPGMA 法進行聚類分析的結果轉換為協(xié)表征矩陣,對協(xié)表征矩陣和相似系數矩陣的相關性進行Mantel 檢驗。結果表明,2 種矩陣顯著相關,相關系數r=0.884 (P=0.005),說明聚類結果能較準確地反映了菌株之間的遺傳關系。

    2.3 斜莖黃芪根瘤菌16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析

    對30個斜莖黃芪供試菌株進行BOXAIR、16S rDNA-RFLP及PCA的綜合分析后,選擇其中22個代表菌株的 16S rDNA 擴增產物送北京華大基因科技股份有限公司進行測序后建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖5)。結果表明, 22個代表菌株在系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖中分成4個遺傳群:SCAU406、SCAU461、SCAU427、SCAU423、SCAU458、SCAU456、SCAU428、SCAU410、SCAU436等9個菌株與Rhizobium-Agrobacterium聚群,其中,SCAU428與Rhizobiumsp. CCBAU 65810的相似度為99 %,SCAU436與RhizobiumLMG 23643的相似度為96 %;SCAU447、SCAU448、 SCAU449、SCAU450、SCAU451、SCAU452與Rhizobium聚群,其中,SCAU451與Rhizobiumsp. CCBAU 41184的相似度為88 %(最高),而與Rhizobiumsp. USDA 1920的相似度為85 %;SCA457與MesorhizobiumlotiATCC 700743T(X67229)聚群但相似度低,與MesorhizobiumlotiNZP2037的相似度(最高)為98 %;其余菌株SCAU408、SCAU409、SCAU412、SCAU416、SCAU419、SCAU433、SCAU440均與OchrobactrumrhizosphaeraeDSM 19824T聚群,顯示出這7株供試菌株與14個參比菌株(無Ochrobactrum參比菌株)均存在一定的差異。這與供試菌株16S rDNA PCR-RFLP聚類結果基本一致。其中,SCAU412與OchrobactrumanthropiATCC 49188 的相似度為97 %,SCAU416與OchrobactrumanthropiATCC 49188 的相似度為96 %。 供試菌株16S rDNA序列與已知菌株較低的相似度預示可能存在潛在的新種。

    圖4 斜莖黃芪根瘤菌供試菌株及參比菌株16S rDNA PCR-RFLP聚類Fig.4 Dendrogram based on 16S rDNA PCR-RFLP of the strains isolated from Astragalus adsurgens Pall and reference strains

    3 討 論

    本研究通過BOX-PCR、16S rDNA-RFLP及PCA(Principal Component Analysis)、16S rDNA序列同源性分析對川西高原地區(qū)野生斜莖黃芪根瘤菌的遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育關系進行了系列研究。結果表明,川西高原地區(qū)(四川甘孜藏族自治州)野生斜莖黃芪根瘤菌具有豐富的遺傳多樣性。30個菌株分別屬于Rhizobium(11/30 strains),Ochrobactrum(9/30 strains),Mesorhizobium(1/30 strains) 和Rhizobium-Agrobacterium(9/30 strains)。斜莖黃芪根瘤菌16S rDNA Simpson遺傳多樣性指數D=0.954。

    本研究采集的斜莖黃芪根瘤來自海拔3190~4100 m的高寒環(huán)境,土壤含水率多為26.14 %~34.38 %之間,環(huán)境條件特殊。通過對30個斜莖黃芪供試菌株分別進行耐鹽性、初始pH生長范圍及生長溫度的測定的結果(表1)顯示,在 2 % NaCl的YMA培養(yǎng)基上,30個供試菌株均能正常生長。其中,能在 4 % NaCl的YMA培養(yǎng)基上生長的占8/30, 能在 6 % NaCl的YMA培養(yǎng)基上生長的占9/30,另外,尚有少數菌株(SCAU409,SCAU415,SCAU423,SCAU433,SCAU434)能在 7 % NaCl的培養(yǎng)基上生長。鹽分是影響微生物生長的最重要的環(huán)境脅迫因素之一。高寒地區(qū)斜莖黃芪根瘤菌大多數都具有較強的耐鹽性,這很可能是特殊的生態(tài)環(huán)境條件促使根瘤菌產生了積極的適應機制,如積累胞內相溶溶質谷氨酸和海藻糖來抵抗高鹽危害[11]這些菌株是寶貴的耐鹽根瘤菌資源,對改良鹽堿土壤有著積極的意義。 在全部供試菌株中,6/30的菌株能在pH 4~10的培養(yǎng)基上生長,而 24/30的菌株能在pH 4~11的培養(yǎng)基上生長;20/30的菌株能在4~50 ℃的恒溫條件下生長,所有菌株能在4~7 ℃和 在60 ℃條件下處理10 min后再置28 ℃條件下生長。進一步表明川西高原地區(qū)野生斜莖黃芪根瘤菌具有較強的適應高寒環(huán)境(溫差大,酸堿變化幅度大)的能力。

    The tree was constructed by neighbor-joining(NJ) using the Kimura2-parameter model available in the MEGA4.0s of tware, based on the sequences of actinomycetes partial 16S rDNA gene and the reference strains. The scale bar corresponds to 0.01 substitutions per nucleotide position. Number in parentheses represent the sequence accession numbers in GenBank圖5 斜莖黃芪根瘤菌供試菌株16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育圖Fig.5 Phylogenetic tree analysis of 16S rDNA of the strains isolated from Astragalus adsurgens Pall

    16S rDNA-RFLP和BOX-PCR是遺傳學分析中常用的2種方法,均能有效揭示供試生物的遺傳多樣性,但兩種方法相比較而言,16S rDNA-RFLP分析是利用限制性酶切圖譜類型,簡便快速,常用來進行根瘤菌種內遺傳多樣性和種間系統(tǒng)發(fā)育關系研究[12]; 而BOX-PCR是利用根瘤菌基因組中存在的重復序列來反映菌株間的遺傳差異,遺傳類型往往具有菌株的特異性[13]。 本研究中,在83 %的相似性水平上,30個斜莖黃芪根瘤菌菌株在16S rDNA PCR-RFLP聚類分析中聚成3個遺傳群,而BOX-PCR聚類分析結果顯示,斜莖黃芪30個供試菌株在相似系數82.4 %水平上分成6個遺傳群,且除SCAU436與M.septentrionaleSDW 014T;SCAU410與M.temperatumSDW 018T聚群外,其余供試菌株均未與參比菌株聚群。應用NTSYS-pc(V2.10e)軟件對44個菌株(斜莖黃芪30個供試菌株和14個參比菌株)BOX-PCR的相似系數進行主成分分析,前3 個主成分所能解釋的相關性分別為19.93 %、13.72 %和11.82 %,并用EIGEN 程序作主成分之間的三維關系圖。結果表明,30個供試菌株的主成分分析和BOX-PCR聚類分析結果基本上一致。但在主成分分析結果中,SCAU 461與R.sullaeIS123聚類成群II,SCAU410與SCAU452聚類成群III,SCAU453進入群I;SCAU428與S.meliloti102F28聚成群V;SCAU440,SCAU436進入群VI并與M.tianshanenseCCBAU 3306T聚類,另外,SCAU456,SCAU458,SCAU440單獨分開。這表明,無論是通過16S rDNA-RFLP分析還是BOX-PCR,大部分斜莖黃芪供試菌株與已知菌株均有較大的遺傳差異性,均揭示出川西高原地區(qū)野生斜莖黃芪根瘤菌具有豐富的遺傳多樣性。

    22個代表菌株在16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖中分成4個遺傳群:SCAU406、SCAU461、SCAU427、SCAU423、SCAU458、SCAU456、SCAU428、SCAU410、SCAU436等9個菌株與Rhizobium-Agrobacterium聚群,其中,SCAU428與Rhizobiumsp. CCBAU 65810的相似度為99 %,SCAU436與RhizobiumLMG 23643的相似度為96 %;SCAU447、SCAU448、 SCAU449、SCAU450、SCAU451、SCAU452與Rhizobium聚群,其中,SCAU451與Rhizobiumsp. CCBAU 41184的相似度為(最高)88 %,而與Rhizobiumsp. strain USDA 1920的相似度為85 %;SCA457與MesorhizobiumlotiATCC 700743T(X67229)聚群但相似度低,與Mesorhizobiumloti NZP2037的相似度(最高)為98 %;其余菌株SCAU408、SCAU409、SCAU412、SCAU416、SCAU419、SCAU433、SCAU440均與OchrobactrumrhizosphaeraeDSM 19824T聚群,顯示出這7株供試菌株的遺傳性與14個參比菌株(無Ochrobactrum屬參比菌株)均存在較大的差異。這與供試菌株16S rDNA PCR-RFLP聚類結果基本一致。屬于Rhizobium和Mesorhizobium的多個斜莖黃芪根瘤菌供試菌株的16S rDNA序列與已知菌株較低的相似度預示著可能存在潛在的新種[14]。這尚需做進一步的功能基因分析。

    在已知的研究文獻[3-4]中,斜莖黃芪根瘤菌均屬于Rhizobium和Mesorhizobium。本研究中,30個菌株分屬4個屬。其中,首次分離得到9個屬于Ochrobactrum的菌株?;亟釉囼灡砻?,所選菌株SCAU409、SCAU412、SCAU416、SCAU419、SCAU433能夠結瘤(但瘤較小)。16S rDNA序列分析中,菌株SCAU408、SCAU409、SCAU412、SCAU416、SCAU419、SCAU433、SCAU440均與OchrobactrumrhizosphaeraeDSM 19824T聚群。其中,SCAU412與OchrobactrumanthropiATCC 49188 的相似度最高,為97 %,SCAU416與OchrobactrumanthropiATCC 49188 的相似度為96 %。因此,SCAU412或SCAU416有可能為Ochrobactrum的一個潛在的新種[14]。

    本研究分離純化獲得的斜莖黃芪根瘤菌能為高寒地區(qū)特殊生境優(yōu)良菌株的篩選提供種質資源,所作分析能對我國西南地區(qū),特別是青藏高原橫斷山區(qū)斜莖黃芪根瘤菌的系統(tǒng)進化和分類學地位提供一些參考。

    4 結 論

    川西高原地區(qū)(四川甘孜藏族自治州)野生斜莖黃芪根瘤菌具有豐富的遺傳多樣性,大多數菌株對高鹽、高溫、低溫及過酸過堿環(huán)境均具有很強的耐受能力。

    通過遺傳學分析發(fā)現,在斜莖黃芪根瘤菌供試菌株中可能存在一些新種,因此,需要進一步進行功能基因分析加以確認,以期能豐富根瘤菌物種資源庫, 為該區(qū)域的生態(tài)恢復與重建提供優(yōu)良根瘤菌資源。

    猜你喜歡
    生長分析
    碗蓮生長記
    小讀者(2021年2期)2021-03-29 05:03:48
    隱蔽失效適航要求符合性驗證分析
    共享出行不再“野蠻生長”
    生長在哪里的啟示
    華人時刊(2019年13期)2019-11-17 14:59:54
    野蠻生長
    NBA特刊(2018年21期)2018-11-24 02:48:04
    生長
    文苑(2018年22期)2018-11-19 02:54:14
    電力系統(tǒng)不平衡分析
    電子制作(2018年18期)2018-11-14 01:48:24
    電力系統(tǒng)及其自動化發(fā)展趨勢分析
    《生長在春天》
    中西醫(yī)結合治療抑郁癥100例分析
    91在线观看av| 在线观看一区二区三区| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | а√天堂www在线а√下载| 男人舔女人下体高潮全视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 又黄又粗又硬又大视频| 正在播放国产对白刺激| 国产色视频综合| 老鸭窝网址在线观看| 哪里可以看免费的av片| 国产在线观看jvid| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产伦在线观看视频一区| а√天堂www在线а√下载| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 日本在线视频免费播放| 这个男人来自地球电影免费观看| 日韩三级视频一区二区三区| 18禁观看日本| 成人永久免费在线观看视频| 午夜成年电影在线免费观看| 久久精品成人免费网站| 国产午夜精品久久久久久| 国产欧美日韩一区二区三| 欧美在线黄色| 国产av在哪里看| 国产成人欧美| 在线观看免费视频日本深夜| 99国产精品一区二区三区| 香蕉久久夜色| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产熟女午夜一区二区三区| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产午夜精品久久久久久| 在线天堂中文资源库| 亚洲精品美女久久av网站| 在线天堂中文资源库| 90打野战视频偷拍视频| 88av欧美| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久中文字幕人妻熟女| 一夜夜www| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲七黄色美女视频| 精品第一国产精品| 中文字幕久久专区| 窝窝影院91人妻| 久久 成人 亚洲| 亚洲专区字幕在线| 亚洲国产欧美网| 窝窝影院91人妻| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日日爽夜夜爽网站| 久久久久久久久中文| 99国产精品一区二区三区| 人人妻人人看人人澡| 在线观看舔阴道视频| 成人永久免费在线观看视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 欧美精品啪啪一区二区三区| 真人做人爱边吃奶动态| 热re99久久国产66热| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 99热这里只有精品一区 | 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产伦在线观看视频一区| 热re99久久国产66热| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产激情欧美一区二区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产在线精品亚洲第一网站| √禁漫天堂资源中文www| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 麻豆国产av国片精品| 黄片大片在线免费观看| 很黄的视频免费| 精品日产1卡2卡| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 精品日产1卡2卡| 亚洲在线自拍视频| 国产精品野战在线观看| 亚洲午夜理论影院| 欧美成狂野欧美在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产一区在线观看成人免费| 精品一区二区三区视频在线观看免费| ponron亚洲| 美女午夜性视频免费| 亚洲精品美女久久av网站| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久久久久久久久黄片| 妹子高潮喷水视频| 一二三四在线观看免费中文在| 看黄色毛片网站| 一级毛片女人18水好多| 国产激情久久老熟女| 久久草成人影院| 99久久综合精品五月天人人| 国产真实乱freesex| 在线观看午夜福利视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 成人免费观看视频高清| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产成人欧美| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲av熟女| 久久久精品欧美日韩精品| 国产一区二区在线av高清观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 在线永久观看黄色视频| 老司机靠b影院| 国语自产精品视频在线第100页| 波多野结衣巨乳人妻| 国产av一区在线观看免费| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产精华一区二区三区| 免费看十八禁软件| 满18在线观看网站| 国产午夜精品久久久久久| 91麻豆精品激情在线观看国产| av欧美777| 人人妻人人澡欧美一区二区| 美女免费视频网站| 亚洲国产精品999在线| 精华霜和精华液先用哪个| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 免费看a级黄色片| 亚洲中文字幕日韩| www.熟女人妻精品国产| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 免费看十八禁软件| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 自线自在国产av| 亚洲av五月六月丁香网| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲成人久久爱视频| 嫩草影院精品99| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 色综合婷婷激情| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 免费av毛片视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲七黄色美女视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 欧美在线一区亚洲| 国产单亲对白刺激| 脱女人内裤的视频| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 精品国产美女av久久久久小说| 91av网站免费观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产高清激情床上av| 亚洲无线在线观看| 美女午夜性视频免费| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| www日本黄色视频网| 亚洲九九香蕉| 欧美色欧美亚洲另类二区| 男男h啪啪无遮挡| 97碰自拍视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| a级毛片在线看网站| 国产亚洲欧美精品永久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 精品不卡国产一区二区三区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 日本a在线网址| x7x7x7水蜜桃| 免费一级毛片在线播放高清视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 日韩大码丰满熟妇| 色av中文字幕| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| av有码第一页| tocl精华| 亚洲精品国产一区二区精华液| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 韩国精品一区二区三区| 成人免费观看视频高清| 一级作爱视频免费观看| 高清在线国产一区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 欧美av亚洲av综合av国产av| 91成年电影在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 丁香六月欧美| 日本黄色视频三级网站网址| 在线永久观看黄色视频| 欧美黑人巨大hd| 国产精品 欧美亚洲| 无限看片的www在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 国产免费av片在线观看野外av| 黄频高清免费视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久久久久久久中文| 身体一侧抽搐| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 最近最新免费中文字幕在线| 久久草成人影院| 欧美不卡视频在线免费观看 | 久久精品人妻少妇| 午夜福利免费观看在线| 热99re8久久精品国产| 色播在线永久视频| 91成人精品电影| 久久久精品欧美日韩精品| 韩国av一区二区三区四区| 麻豆成人av在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 日韩欧美免费精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产野战对白在线观看| 美女免费视频网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美性猛交黑人性爽| 国产精品久久视频播放| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 男女那种视频在线观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲精品色激情综合| 国产精品av久久久久免费| www.www免费av| 狂野欧美激情性xxxx| 看黄色毛片网站| 99国产极品粉嫩在线观看| 在线免费观看的www视频| 香蕉丝袜av| 久久这里只有精品19| 美女扒开内裤让男人捅视频| 一区二区三区国产精品乱码| 婷婷精品国产亚洲av| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产精品,欧美在线| 色综合站精品国产| 国产精品久久视频播放| av片东京热男人的天堂| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲色图av天堂| 午夜福利在线在线| 日本 av在线| 黑丝袜美女国产一区| 男人操女人黄网站| 久久草成人影院| 热re99久久国产66热| 黄色 视频免费看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲九九香蕉| 最近在线观看免费完整版| www.熟女人妻精品国产| 一本大道久久a久久精品| 免费无遮挡裸体视频| 两个人免费观看高清视频| 1024视频免费在线观看| 在线播放国产精品三级| 久久精品国产综合久久久| 女同久久另类99精品国产91| 久久久久亚洲av毛片大全| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产高清视频在线播放一区| 一二三四社区在线视频社区8| 麻豆av在线久日| 午夜成年电影在线免费观看| 在线观看免费视频日本深夜| 草草在线视频免费看| 国产黄色小视频在线观看| 很黄的视频免费| 看黄色毛片网站| 男人舔女人的私密视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 男人的好看免费观看在线视频 | 99在线视频只有这里精品首页| 欧美中文综合在线视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 妹子高潮喷水视频| 国产av一区二区精品久久| 欧美zozozo另类| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲人成网站高清观看| 久热爱精品视频在线9| 国产成人系列免费观看| 嫩草影院精品99| 真人一进一出gif抽搐免费| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产av不卡久久| 一本一本综合久久| 成人18禁在线播放| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 12—13女人毛片做爰片一| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产真实乱freesex| 黄色a级毛片大全视频| 身体一侧抽搐| 久久久国产精品麻豆| 国产真实乱freesex| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产乱人伦免费视频| 亚洲美女黄片视频| 淫秽高清视频在线观看| 一本一本综合久久| 伦理电影免费视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 精品电影一区二区在线| 亚洲av美国av| 91国产中文字幕| 日韩欧美 国产精品| 久久99热这里只有精品18| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 久久香蕉激情| 国产精品永久免费网站| 成人永久免费在线观看视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 99热只有精品国产| 啪啪无遮挡十八禁网站| 在线看三级毛片| 黄色a级毛片大全视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品二区激情视频| 90打野战视频偷拍视频| 后天国语完整版免费观看| 久久伊人香网站| 一本综合久久免费| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 男人舔女人下体高潮全视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 欧美zozozo另类| aaaaa片日本免费| 日日爽夜夜爽网站| 黄色成人免费大全| 国产在线观看jvid| 色综合站精品国产| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产人伦9x9x在线观看| 女性被躁到高潮视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| a级毛片a级免费在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 午夜成年电影在线免费观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 成人亚洲精品av一区二区| 老司机深夜福利视频在线观看| 午夜福利欧美成人| 18美女黄网站色大片免费观看| 日本三级黄在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲,欧美精品.| 99在线视频只有这里精品首页| 日韩大尺度精品在线看网址| 久久精品人妻少妇| 欧美日韩乱码在线| www国产在线视频色| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 婷婷六月久久综合丁香| 在线观看午夜福利视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产精品99久久99久久久不卡| 两个人免费观看高清视频| 国产成人影院久久av| 精品一区二区三区av网在线观看| 午夜视频精品福利| 嫩草影院精品99| 无人区码免费观看不卡| 丁香六月欧美| 午夜影院日韩av| 男女之事视频高清在线观看| www.熟女人妻精品国产| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲精品粉嫩美女一区| av片东京热男人的天堂| 亚洲国产精品合色在线| 18禁国产床啪视频网站| 国产高清有码在线观看视频 | 一区福利在线观看| 亚洲av熟女| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美精品亚洲一区二区| 在线永久观看黄色视频| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲国产欧美网| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 久久香蕉激情| 国产熟女xx| 亚洲第一av免费看| 大型av网站在线播放| 级片在线观看| av天堂在线播放| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产精品久久电影中文字幕| 12—13女人毛片做爰片一| 听说在线观看完整版免费高清| 日本黄色视频三级网站网址| 啦啦啦免费观看视频1| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 久久99热这里只有精品18| 久久久国产成人免费| 亚洲专区字幕在线| 两个人免费观看高清视频| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 一区二区日韩欧美中文字幕| 麻豆av在线久日| 久久 成人 亚洲| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久久久九九精品影院| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 99久久综合精品五月天人人| 成人特级黄色片久久久久久久| 精品久久久久久久毛片微露脸| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久精品国产综合久久久| 国产麻豆成人av免费视频| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲,欧美精品.| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲,欧美精品.| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲男人天堂网一区| 桃色一区二区三区在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲九九香蕉| 天堂影院成人在线观看| 亚洲美女黄片视频| 亚洲五月婷婷丁香| 久久久久久久久中文| 两个人免费观看高清视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 中文字幕精品免费在线观看视频| 88av欧美| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 在线观看免费视频日本深夜| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲七黄色美女视频| 看黄色毛片网站| 91麻豆精品激情在线观看国产| 午夜免费激情av| 看免费av毛片| 日韩精品免费视频一区二区三区| 午夜免费激情av| 国产伦在线观看视频一区| 在线永久观看黄色视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 日本免费a在线| 日韩欧美国产在线观看| 嫩草影视91久久| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产成人啪精品午夜网站| 精品福利观看| 国产黄a三级三级三级人| 黄片大片在线免费观看| 国产成人av激情在线播放| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 女性生殖器流出的白浆| 99热这里只有精品一区 | 国产精品,欧美在线| 国产97色在线日韩免费| 亚洲熟女毛片儿| 天天添夜夜摸| 午夜久久久久精精品| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品久久久av美女十八| 制服诱惑二区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 日韩免费av在线播放| 中亚洲国语对白在线视频| 色老头精品视频在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 一区二区三区国产精品乱码| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 最新在线观看一区二区三区| 精品国产亚洲在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 窝窝影院91人妻| 国产主播在线观看一区二区| 国产麻豆成人av免费视频| 国产视频一区二区在线看| 久久久精品欧美日韩精品| 黄片播放在线免费| 美女午夜性视频免费| 精品熟女少妇八av免费久了| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久久精品欧美日韩精品| 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产精品综合久久久久久久免费| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲国产欧美网| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲免费av在线视频| 身体一侧抽搐| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲专区字幕在线| 国产三级黄色录像| 日本一本二区三区精品| 在线永久观看黄色视频| 老司机福利观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美激情高清一区二区三区| 日韩大尺度精品在线看网址| 十八禁网站免费在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 两个人免费观看高清视频| 99久久综合精品五月天人人| 国产男靠女视频免费网站| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产精品1区2区在线观看.| 成人午夜高清在线视频 | www.999成人在线观看| 男女那种视频在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 色av中文字幕| 日韩成人在线观看一区二区三区| 午夜激情福利司机影院| 国产成人欧美| 制服诱惑二区| 国产99白浆流出| 禁无遮挡网站| 999久久久精品免费观看国产| 十八禁人妻一区二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美zozozo另类| 婷婷亚洲欧美| 狠狠狠狠99中文字幕| 一本大道久久a久久精品| 国产精品精品国产色婷婷| 男男h啪啪无遮挡| 国产欧美日韩精品亚洲av| 黄片播放在线免费| 丰满的人妻完整版| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产又色又爽无遮挡免费看| 夜夜夜夜夜久久久久| 午夜免费成人在线视频| xxxwww97欧美| 久久欧美精品欧美久久欧美| 日韩有码中文字幕| 波多野结衣高清无吗| 亚洲人成电影免费在线| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美色视频一区免费| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲成人免费电影在线观看| 后天国语完整版免费观看| 麻豆成人av在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 香蕉国产在线看| 在线观看www视频免费| 一进一出抽搐动态| 97碰自拍视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 亚洲精品在线美女| 禁无遮挡网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲成人久久爱视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 99久久国产精品久久久| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲欧美激情综合另类| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产av又大| 一进一出抽搐gif免费好疼| 操出白浆在线播放| 男人舔奶头视频| 女人被狂操c到高潮| 亚洲国产精品999在线|