夏米娜,劉彥群,翟曉翔
(1.徐州市中醫(yī)院,江蘇徐州221000;2.徐州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院,江蘇徐州221000)
銀屑病是一種有遺傳背景的自身免疫性皮膚病,30%的銀屑病患者其發(fā)病機制主要和免疫、遺傳、感染以及環(huán)境因素有關。近年來,有學者提出,銀屑病的發(fā)病與病情發(fā)展與細胞間信息傳遞的異常有關,縫隙連接是細胞間信息傳遞的基礎結(jié)構(gòu),縫隙連接(Cx)蛋白是縫隙連接的最小功能單位,Cx蛋白的水平高低直接影響細胞的新陳代謝、增殖、分化及內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[1]。本文旨在研究分析部分Cx蛋白及其mRNA在尋常型銀屑病皮損中的表達水平及其與病情嚴重程度的聯(lián)系,報道如下。
1.1 一般資料
1.1.1 臨床資料 選取2015年1月—2017年12月我院接診治療的尋常型銀屑病患者80例作為研究組,其中男46例,女34例,年齡20~65歲,平均(36.1±4.4)歲,病程 3個月~15年,所選取的患者病理組織檢測結(jié)果及臨床癥狀均符合中華醫(yī)學會尋常型銀屑病的診斷標準。
排除標準:①有心、肝、腎、腦、血液等嚴重系統(tǒng)疾病者;②半年內(nèi)接受過系統(tǒng)或局部銀屑病治療者;③免疫功能紊亂者;④合并患有其他皮膚科疾病者;⑤長期或近期接受免疫抑制機或生物制劑治療者;⑥孕期及妊娠期女性患者。
選取同期在我院進行體檢的健康人80例作為對照組,其中男43例,女37例,年齡18~65歲,平均(35.5±3.9)歲。
研究組和對照組年齡、性別一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),可進行研究對比,本研究所選取的患者均事先知情,簽署知情通知書并獲得了本院倫理委員會的批準。
1.1.2 主要試劑 免疫組化試劑盒,美國Sigma公司;基因組擴增試劑盒,美國Sigma公司;DAB顯色試劑盒,美國Sigma公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。
1.1.3 儀器與設備 B203LED型光學顯微鏡,重慶奧特光學儀器有限公司;DMI6000B型倒置熒光顯微鏡,美國Sigma公司。
1.2 方法
1.2.1 病情評定 采用銀屑病皮損面積與嚴重程度指數(shù)(PASI)評分對患者病情進行評定[2]。根據(jù)PASI總分進行病情分級:PASI≤15為輕度,15<PASI<30 為中度,PASI≥30 為重度。
1.2.2 指標檢測 采集對照組和研究組皮損及正常皮膚組織,制作2份切片,分別用作蛋白及其mRNA檢測。嚴格按照試劑盒說明書進行染色操作,分別采用光學顯微鏡和倒置熒光顯微鏡對染色結(jié)果進行觀察,以胞核或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性染色,以無明顯染色或組織色與背景色一致為陰性對照。400倍視野下取4個有代表性且非連續(xù)的視野,觀察切片染色深度和分布情況,采用Image pro-Plus6.0軟件計算分析皮損組織與健康皮膚Cx蛋白及其對應mRNA的光密度平均值IOD/AOI。
1.3 統(tǒng)計學處理 選用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理,計量資料采用X+S(mean±SD)描述,多組間比較采用F值檢驗,2組間比較采用配對t檢驗,采用Pearson相關系數(shù)進行相關行分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
2.1 Cx蛋白表達比較 4組患者Cx26蛋白平均光密度值比較差異有統(tǒng)計學意義(F=10.620,P=0.000),輕度患者Cx26蛋白平均光密度值高于對照組(t=20.461,P=0.000),中度患者Cx26蛋白平均光密度值高于輕度患者(t=7.082,P=0.004),重度患者Cx26蛋白平均光密度值高于輕度患者(t=10.083,P=0.002)。4組患者Cx43蛋白平均光密度值比較差異有統(tǒng)計學意義(F=16.911,P=0.000),輕度患者 Cx43蛋白平均光密度值高于對照組(t=11.274,P=0.002),中度患者Cx43蛋白平均光密度值高于輕度患者(t=4.382,P=0.004),重度患者 Cx43 蛋白平均光密度值高于輕度患者(t=5.773,P=0.004)。4組Cx30、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37 及 Cx45 蛋白平均光密度值比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表1。
2.2 mRNA表達比較 4組患者Cx26蛋白對應mRNA平均光密度值比較差異有統(tǒng)計學意義(F=8.988,P=0.001),輕度患者Cx26蛋白對應mRNA平均光密度值高于對照組(t=9.151,P=0.001),中度患者Cx26蛋白對應mRNA平均光密度值高于輕度患者(t=5.044,P=0.004),重度患者Cx26蛋白對應 mRNA平均光密度值高于輕度患者(t=7.312,P=0.002)。4組患者Cx43蛋白對應mRNA平均光密度值比較差異有統(tǒng)計學意義(F=11.149,P=0.000),輕度患者 Cx43蛋白對應mRNA平均光密度值高于對照組(t=7.422,P=0.002),中度患者Cx43蛋白對應mRNA平均光密度值高于輕度患者(t=7.310,P=0.002),重度患者Cx43蛋白對應mRNA平均光密度值高于輕度患者(t=8.579,P=0.001)。4 組 Cx30、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37及Cx45蛋白對應mRNA平均光密度值相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表 2。
2.3 相關性分析 比較分析表1、表2中不同病情患者CX蛋白及其mRNA表達水平,Cx30、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37、及 Cx45及其 mRNA 在不同病情嚴重程度患者間的表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),輕度、中度和重度患者Cx26和Cx43蛋白及其mRNA表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),Cx26(r=0.624,P<0.01)和 Cx43(r=0.595,P<0.01)及其 mRNA 與 PASI評分存在顯著的正相關性。
銀屑病是臨床皮膚科的常見疾病,有影響因素多、病程長、病情頑固易復發(fā)的特點,其發(fā)病機制受多基因遺傳、免疫、環(huán)境等因素影響。遺傳因素:銀屑病屬于一種常見的多基因且復發(fā)的遺產(chǎn)疾病,以及成為當今各國皮膚病和遺傳學家研究的重點對象。研究數(shù)據(jù)顯示,F(xiàn)ANs在漢族人群中進行精密定位后發(fā)現(xiàn),HLA-C成為易感基因[3]。在各國銀屑病患者中,13q21-32和17q22-25證實LCE基因?qū)儆谝赘谢?,和銀屑病的病理學改變以及角質(zhì)細胞的增生過度有相關性。免疫因素:銀屑病不僅表現(xiàn)在皮膚損傷,并且還存在單核細胞和淋巴細胞浸潤,主要的病理特征是T淋巴細胞真皮浸潤,主要是通過T淋巴細胞介導免疫在銀屑病的發(fā)病中發(fā)揮著重要作用,T淋巴細胞會活化并釋放白細胞介素(IL),IL-6和IL-8受到刺激后會促進膠原細胞增生,出現(xiàn)白細胞凝聚和黏附。巨噬細胞會促進IL-α和干擾素(IFN)-γ的分泌,誘導內(nèi)皮細胞表達,會造成白細胞的外滲。多種細胞共同作用發(fā)生免疫反應,角質(zhì)細胞作為靶細胞,促進細胞因子間的表達,誘導表皮發(fā)生免疫反應。研究顯示銀屑病患者的病變位置棘層細胞增厚,且末梢神經(jīng)增生,長時間在較高的炎性水平中,經(jīng)過治療患病處,肥大細胞密度降低,但是與正常相比,仍然很高[4]。因此,其是造成銀屑病經(jīng)常反復發(fā)病的原因。環(huán)境因素:銀屑病發(fā)病和季節(jié)有相關性,銀屑病的初次發(fā)病在春季的時間較多,在冬季會加重,日照時間也是一種不利因素。吸煙會促進中性粒細胞的活化,可以改變吞噬細胞的氧化代謝,加重炎癥反應,對酶的釋放有促進作用,從而加重患者的皮損狀況。
表1 對照組和研究組CX蛋白平均光密度值比較 (mean±SD)
表2 對照組和研究組CX蛋白對應mRNA平均光密度值比較 (mean±SD)
Cx蛋白是細胞縫隙連接的基本功能單位,細胞縫隙連接是廣泛存在于除血細胞和骨骼細胞外的其他細胞間的一種連接形式,細胞通過縫隙連接進行信息、物質(zhì)和能量的傳遞交換,從而調(diào)節(jié)細胞新陳代謝、增殖和分化,維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,目前臨床已發(fā)現(xiàn)的Cx蛋白約有20多種,根據(jù)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量進行命名,如 Cx26、Cx30、Cx32、Cx37、Cx40、Cx43等,不同的連接蛋白參與調(diào)節(jié)不同的生理活動[5-8]。Cx26參與調(diào)節(jié)控制細胞的信息傳遞及分化,在內(nèi)耳和毛囊外毛根鞘有顯著的高表達,Cx26的異常突變對皮膚損傷和耳聾與有著直接的影響,臨床差異較大,導致皮膚過度角化的情況相對較多[9-10]。Cx30主要表達于表皮、大腦和內(nèi)耳中,其突變可引起汗性外胚層發(fā)育不良,又稱為Clouston綜合癥,臨床表現(xiàn)為甲發(fā)育不良、掌跖角化過度、毛發(fā)稀疏,部分患者并發(fā)有聽力減退、智力障礙、斜視等,臨床差異較大。Cx31主要表達于表皮顆粒層,作用于角質(zhì)形成細胞分化晚期,其突變可引起可變性紅斑角化癥,多發(fā)病于出生時或早年,臨床特征主要表現(xiàn)為正常皮膚或紅斑上出現(xiàn)角化過度性斑片,斑片存在時間及部位無規(guī)律性,少部分持久存在。Cx43分布較為廣泛,幾乎存在于所有組織和細胞中,其突變對皮膚、毛發(fā)、神經(jīng)退化等均有一定的影響。多項研究指出,在皮膚病中,Cx蛋白最明顯的表達是上調(diào)增加角質(zhì)形成細胞的增殖和分化,例如Cx26和Cx43在銀屑病斑塊及腫瘤乳頭瘤中的顯著升高[11,13]。
本文研究中,2 組 Cx30、Cx31、Cx31.1、Cx32、Cx37及Cx45蛋白及其對應mRNA表達比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),研究組 Cx26、Cx43 蛋白及其對應mRNA表達顯著高于對照組(P<0.05),不同病情嚴重程度的患者Cx26和Cx43蛋白及其mRNA表達差異有統(tǒng)計學意義(P>0.05),Cx26(r=0.624,P<0.01)和 Cx43(r=0.595,P<0.01)及其 mRNA 表達水平與PASI評分存在顯著的正相關性,說明Cx26和Cx43與銀屑病的發(fā)病及病情發(fā)展存在顯著的緊密聯(lián)系,其表達水平高低可以在一定程度上反應病情程度。本文研究結(jié)果與Shaker等[14]和Boehncke[15]的結(jié)果保持一致。
綜上所述,本文通過對比尋常型銀屑病患者皮損組織與健康人正常皮膚中部分Cx蛋白及其mRNA表達水平的差異,分析不同病情患者指標表達水平與病情嚴重程度的聯(lián)系,得出Cx26和Cx43及其mRNA表達水平與患者PASI評分正相關,其表達水平的高低可以在一定程度上直接反應病情程度,為銀屑病臨床治療中病情診斷及監(jiān)控提供樂一些理論參考,但研究內(nèi)容相對較為局限,對于Cx蛋白與上述疾病的作用機制還需要更進一步的研究支持。