慢性自發(fā)性蕁麻疹血清IL-17的表達(dá)及其與病情的相關(guān)性研究

周培媚，付麗新，陳濤，路永紅，曾世華，韓莉，杜建蓉，劉萍

（成都市第二人民醫(yī)院，四川成都610017）

慢性蕁麻疹（Chronic urticaria，CU）是一種常見的變態(tài)反應(yīng)性炎癥性皮膚病，以反復(fù)發(fā)作的風(fēng)團(tuán)伴瘙癢為主要臨床表現(xiàn)。臨床上根據(jù)有無明確誘因，可分為慢性自發(fā)性蕁麻疹（Chronic spontaneous urticaria，CSU）和慢性可誘導(dǎo)性蕁麻疹。其發(fā)病機(jī)制至今并不明確，研究表明多種細(xì)胞因子在CU的發(fā)病中發(fā)揮了作用。TH17細(xì)胞是近年來發(fā)現(xiàn)的一種以分泌白細(xì)胞介素（IL）-17為主要特征的CD4+T新亞群。筆者采用酶聯(lián)免疫方法對52例CSU患者及30例健康志愿者血清IL-17、IL-4、IL-10、干擾素（INF）-γ水平進(jìn)行檢測，探討其在CSU發(fā)病中的作用及其相互關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象 52例CSU患者均來自我院皮膚科門診。男20例，女32例；平均年齡（36.42±8.34）歲，平均病程（19.92±8.38）個(gè)月。所有患者均符合CSU診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，排除紅斑狼瘡、天皰瘡、皮肌炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病等自身免疫相關(guān)性疾病以及其他嚴(yán)重系統(tǒng)疾患者，并在試驗(yàn)前4周內(nèi)未使用過皮質(zhì)類固醇激素及其他免疫抑制劑，3 d內(nèi)未使用過抗組胺藥。對照組30例均來自本院健康體檢者，男12例，女18例，本人及家屬均無自身免疫性疾病史或過敏史。2組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。所有患者及健康志愿者均對本次試驗(yàn)知情并同意。

1.2 方法

1.2.1 病史 詳細(xì)記錄患者的年齡、性別、病程等一般情況。

1.2.2 癥狀評分 詳細(xì)記錄患者的癥狀及體征，參照文獻(xiàn)[2]進(jìn)行蕁麻疹活動性評分（UAS）癥狀評分。瘙癢程度：0分為無癢感；1分為稍癢，不影響正常生活；2分為有中度瘙癢癥狀，但不影響日常生活和睡眠；3分為有嚴(yán)重瘙癢，影響到日常生活和/或睡眠。24 h內(nèi)瘙癢持續(xù)時(shí)間：0分為無瘙癢；1分為瘙癢持續(xù)時(shí)間＜1 h；2分為瘙癢持續(xù)時(shí)間1～6 h；3分為瘙癢持續(xù)時(shí)間＞6 h。風(fēng)團(tuán)大小，以最大風(fēng)團(tuán)的直徑為度：0分為無風(fēng)團(tuán)；1分為風(fēng)團(tuán)直徑＜1.5 cm；2分為風(fēng)團(tuán)直徑在1.5～3.0 cm之間；3分為風(fēng)團(tuán)直徑＞3.0 cm。風(fēng)團(tuán)數(shù)量：0分為無風(fēng)團(tuán)；1分為風(fēng)團(tuán)≤20個(gè)/24 h；2分為風(fēng)團(tuán) 21～50個(gè)/24 h；3分為風(fēng)團(tuán)＞50個(gè)/24 h。

1.2.3 采集各受試者外周血3 mL，收集于干燥的試管中，常溫凝固后，2 000 min離心20 min，吸取血清，-20℃保存?zhèn)溆?。所有血清?biāo)本避免溶血和反復(fù)凍融。

1.2.4 自體血清皮膚試驗(yàn)（ASST） 在1.2.3的同時(shí)采集受試者靜脈血5mL于無抗凝劑采血管中，在常溫下孵育30min，以4 000轉(zhuǎn)/min離心10 min，取上清備用。選擇前臂屈側(cè)皮膚，分別注射自體血清、組胺（浙江我武生物科技有限公司生產(chǎn)）及生理鹽水各0.05 mL，皮丘間距為3～5 cm。30 min后由專人進(jìn)行結(jié)果判斷：ASST風(fēng)團(tuán)或紅暈平均直徑與起始平均直徑差≥1.5 mm為陽性（若陰性對照在60 min后仍有風(fēng)團(tuán)或紅暈時(shí)，則以ASST與陰性對照風(fēng)團(tuán)或紅暈平均直徑差≥1.5 mm為陽性）；在ASST已判定為陽性的基礎(chǔ)上再根據(jù)ASST與陽性對照組平均直徑比值 α 分為（+）到（++++）不同等：0＜α＜0.5，（+）；0.5≤α＜1，（++）；α=1，（+++）；α＞1，（++++）。

1.2.5 血清 IL-17、IL-4、IL-10、INF-γ的測定 分別使用 IL-17、IL-4、IL-10、INF-γ ELISA 測定試劑盒（博士德生物公司產(chǎn)品）測定血清中濃度。具體操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用t檢驗(yàn)；癥狀體征評分的比較采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)算u值；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

CSU組UAS評分，輕度：1～5分者11例；中度：6～10分者31例；重度：11～15分者10例。CSU組與健康對照組各項(xiàng)指標(biāo)比較見表1，經(jīng)t檢驗(yàn)，CSU組血清IL-17水平明顯高于對照組，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.27，P＜0.05）；血清 IL-4、IL-10 水平，CSU組明顯高于對照組，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t分別為 2.95、2.71，P＜0.05）；血清 IFN-γ 水平，CSU組明顯低于對照組，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.23，P＜0.05），見表 1。

表1 治療前2組血清指標(biāo)的比較pg/mL

經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，CSU組血清IL-17水平與癥狀評分正相關(guān)（r=0.41，P＜0.05），與病程不存在相關(guān)性（r=0.10，P＞0.05）；CSU 組 IL-17水平與IL-4、IL-10、INF-γ 不存在相關(guān)性（r分別為 0.13，0.08，0.11，P＞0.05），見表 2。

表2 IL-17與 UAS評分、IL-4、IL-10、INF-γ 的相關(guān)性

52例CSU患者中ASST陰性者39例，ASST陽性者13例，經(jīng)t檢驗(yàn)，2組年齡、病程方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t分別為 0.57、1.03，P＞0.05）；ASST陽性組UAS評分明顯高于ASST陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（u=1.98，P＜0.05）；ASST 陽性組血清 IL-17水平明顯高于ASST陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.93，P＜0.05），見表 3。

表3 治療前ASST陽性組與ASST陰性組比較

3 討論

CU因其反復(fù)發(fā)作的頑固性瘙癢，嚴(yán)重影響了患者的生活和工作，給患者身心健康造成極大影響。其發(fā)病機(jī)制至今并不完全明確，其中心環(huán)節(jié)是肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺、炎癥介質(zhì)及合成細(xì)胞因子等引起血管通透性增加。大量研究顯示在CU的發(fā)病機(jī)制中，存在Th1/Th2失衡，Th2優(yōu)勢反應(yīng)[3-5]。筆者的研究也發(fā)現(xiàn)CSU患者血清TH2型細(xì)胞因子IL-10、IL-4 水平明顯高于健康對照組（P＜0.05），TH1型細(xì)胞因子IFN-γ水平明顯低于健康對照組（P＜0.05），印證了CSU患者存在Th1/Th2細(xì)胞亞群失衡，Th2優(yōu)勢反應(yīng)。

近年來，也有研究指出Th17細(xì)胞在CU的發(fā)生中也發(fā)揮了作用。IL-17是由CD4+T細(xì)胞的一個(gè)獨(dú)立亞群Th17細(xì)胞產(chǎn)生的，可通過刺激人表皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)IL-8和IL-6等細(xì)胞因子的分泌，參與變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生[6]。筆者的研究發(fā)現(xiàn)，CSU患者血清IL-17水平明顯高于健康對照組（P＜0.05），與 UAS 評分正相關(guān)（P＜0.05），說明CSU血清中IL-17表達(dá)增加，且與病情正相關(guān)，與國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道一致[6-8]，IL-17可能成為反映慢性蕁麻疹疾病嚴(yán)重程度的一種新的潛在生物標(biāo)志。與既往研究不同，筆者的研究還發(fā)現(xiàn)ASST陽性患者組IL-17水平明顯高于ASST陰性患者組（P＜0.05），該試驗(yàn)結(jié)果是基于UAS評分ASST陽性患者組明顯高于ASST陰性組的基礎(chǔ)上，這也說明了CSU血清IL-17水平與病情嚴(yán)重程度存在正相關(guān)關(guān)系。此外，筆者的研究發(fā)現(xiàn)CSU血清IL-17水平與IL-4、IL-10、INF-γ不存在相關(guān)性，說明IL-17參與CSU發(fā)病可能并不依賴于Th1、Th2途徑。IL-17參與CSU發(fā)生發(fā)展的具體作用機(jī)制并不清楚，也有學(xué)者推測是通過MAPK途徑和NF-κB途徑誘導(dǎo)細(xì)胞因子的分泌，趨化白細(xì)胞，產(chǎn)生炎癥介質(zhì)，引起血管通透性增加，這有待進(jìn)一步試驗(yàn)證實(shí)。

筆者的研究發(fā)現(xiàn)CSU患者外周血血清IL-17高表達(dá)，且與病情嚴(yán)重程度正相關(guān)，再次印證了Th17細(xì)胞可能參與了慢性蕁麻疹的發(fā)生發(fā)展，為慢性蕁麻疹的病因病機(jī)提供新的思路，同時(shí)推測生物制劑的靶向IL-17A信號傳導(dǎo)途徑可能代表潛在的治療CSU的替代方法。