• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    LFA檢測血清CrAg在肺隱球菌病的診斷價值及其相關(guān)因素

    2019-10-05 11:39方素芳張宏英黃明翔
    中外醫(yī)學(xué)研究 2019年21期
    關(guān)鍵詞:診斷價值因素

    方素芳 張宏英 黃明翔

    【摘要】 目的:探討膠體金免疫層析法(LFA)檢測血清隱球菌多糖莢膜抗原(CrAg)在肺隱球菌病診斷中的應(yīng)用價值及其相關(guān)因素。方法:收集2017年3月-2018年3月在福建省福州肺科醫(yī)院就診的患者,診斷肺隱球菌?。≒C)33例(A組),非PC30例(B組),均行LFA檢測血清CrAg,并對結(jié)果陽性患者行抗原半定量測定。結(jié)果:A組LFA陽性27例,B組LFA均為陰性,LFA檢測的敏感性為81.82%(27/33),特異性為100%(30/30),陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為100%和83.33%。LFA陽性率分別在臨床診斷分型為無癥狀、慢性、急性,三組患者陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.004),三組半定量滴度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.085,P=0.030);胸部影像分布為單側(cè)單發(fā)、單側(cè)多發(fā)、雙側(cè)多發(fā),三組陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001),單側(cè)、雙側(cè)多發(fā)組半定量滴度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.007,P=0.056);胸部影像病灶為孤立結(jié)節(jié)或腫塊<2 cm,多發(fā)結(jié)節(jié)或腫塊≥2 cm,斑片實變浸潤影,混合病變,四組陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001),后三組陽性檢出者抗原滴度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.050,P=0.152)。結(jié)論:LFA-CrAg對肺隱球菌病的診斷具有重要的臨床意義,其陽性率與臨床及影像學(xué)表現(xiàn)有關(guān),其半定量滴度受到臨床表現(xiàn)的影響。

    【關(guān)鍵詞】 隱球菌抗原; 膠體金免疫層析法; 肺隱球菌病; 診斷價值; 因素

    doi:10.14033/j.cnki.cfmr.2019.21.001 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1674-6805(2019)21-000-04

    Diagnostic Value and Related Factors of Serum CrAg Detected by LFA in Patients with Pulmonary Cryptococcal Disease/FANG Sufang,ZHANG Hongying,HUANG Mingxiang.//Chinese and Foreign Medical Research,2019,17(21):-4

    【Abstract】 Objective:To discuss the application and the relevant factors of using LFA to test Serum-CrAg in diagonizing pulmonary cryptococcosis.Method:Samples of patients who were treated from March 2017 to March 2018 in Fuzhou Lung Hospital in Fujian Province were collected.33 patients were diagonised Pulmonary Cryptococcosis (Group A),30 patients non-Pulmonary Cryptococcosis (Group B).LFA was used to test their Serum CrAg.Semi-quantitative determination of antigen was given to those patients with Positive Result.Result:In group A,LFA was positive in 27 cases,and LFA in group B was negative.The suspectivity of LFA test was 81.82%(27/33) and its specificity was 100%(30/30).The positive and negative predictive values were 100% and 83.33% respectively.The positive rate of LFA in clinical diagnosis was asymptomatic,chronic,acute,there was significant difference in the positive rate among the three groups(P=0.004),and there was significant difference in the semi-quantitative titer among the three groups(F=4.085,P=0.030).The distribution of chest images was unilateral,multiple and bilateral,there was significant difference in the positive rate among the three groups(P<0.001).There was no significant difference in the semi-quantitative titers between unilateral and bilateral multiple groups(t=2.007,P=0.056).The chest imaging lesions were solitary nodules or masses<2 cm,multiple nodules or masses≥2 cm,spot consolidation infiltration,mixed lesions,there was significant difference in the positive rate among the four groups(P<0.001),but there was no significant difference in the antigen titer among the latter three groups (F=2.050,P=0.152).Conclusion:LFA-CrAg is of clinical significance to the diagnosis of pulmonary cryptococcosis.Its positive rate is related to the clinical and imaging manifestations.Its semi-quantitative titer is affected by clinical manifestations.

    【Key words】 Cryptococcal antigen; Lateral flow immunoehromatographieas say; Pulmonary cryptococcosis; Diagnostic value; Factor

    First-authors address:Fujian Medical University Teaching Hospital,F(xiàn)uzhou 350008,China

    近年,隨著隱球菌抗原檢測技術(shù)發(fā)展,隱球菌抗原一膠體金免疫層析法(cryptococcal antigen lateral flow immunoehromatographieas say,CrAg.LFA)已成為診斷隱球菌病的重要手段;但其在HIV抗體陰性PC患者及對其結(jié)果的影響因素相關(guān)研究報道較少。本研究應(yīng)用LFA檢測HIV抗體陰性PC患者的血清CrAg,探討其對PC的早期診斷價值及影響其結(jié)果的相關(guān)因素,具體如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    收集2017年3月-2018年3月就診于福建省福州肺科醫(yī)院經(jīng)病理活檢、隱球菌莢膜多糖抗原等診斷明確PC患者33例為觀察組(A組);并同期選擇臨床明確診斷的肺結(jié)核、肺癌及普通細菌性肺炎30例為對照組(B組)。排除標(biāo)準(zhǔn):HIV感染或確診AIDS患者。PC組患者,男19例,女14例,年齡18~70歲,平均47.2歲。非PC患者,男17例,女13例,年齡20~75歲,平均51.4歲,其中肺結(jié)核、肺炎及普通細菌性肺炎分別為13、8、9例。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

    1.2 方法

    1.2.1 試劑 隱球菌抗原檢測膠體金試劑由美國Immuno-Mycologies有限公司生產(chǎn)。

    1.2.2 標(biāo)本采集 常規(guī)無菌操作抽取靜脈血約4 ml于無菌干燥采血管中,并于水平離心儀3 000 r/min離心 ,10? min后取血清。

    1.2.3 標(biāo)本測定 將1滴樣本稀釋液加入到無菌試管中,加入40 μl血清樣本進行混合,將隱球菌抗原檢測試紙條檢測端插入混合樣本液中,10 min后讀取結(jié)果。結(jié)果判讀:檢測條帶和對照條帶均出現(xiàn)為陽性;僅出現(xiàn)對照條帶為陰性;若對照條帶未出現(xiàn),說明檢測無效,應(yīng)重新檢測。結(jié)果陽性則進行半定量滴度檢測,向1號試管中加入4滴樣本稀釋液,分別向標(biāo)號2~10號的試管中加入2滴滴定液;將40 μl樣本加入1號試管并混勻。從1號試管中吸取80 μl樣本混合轉(zhuǎn)移到2號試管并混勻。依次進行稀釋檢測,直到測量結(jié)果為陰性。

    1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

    觀察兩組LFA檢測血清CrAg定性情況,并對定性陽性患者行抗原半定量測定;通過兩組抗原定性情況統(tǒng)計分析其靈敏度、特異度及陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。并觀察PC組LFA檢測CrAg的定性及半定量結(jié)果與其基礎(chǔ)疾病、臨床診斷分型及胸部CT影像表現(xiàn)進行相關(guān)性統(tǒng)計分析[1],判斷LFA檢測血清CrAg定性及半定量值對PC診斷價值及其影響因素。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用SPSS 19.0軟件及Excel進行統(tǒng)計分析,正態(tài)分布計量資料以(x±s)表示,非正態(tài)分布計量資料以中位數(shù)表示,計數(shù)資料以率(%)表示。組間比較采用Fish精確概率及Bonferroni法校正多重比較,對LFA半定量測定值通過幾何均數(shù)后再將其滴度倒數(shù)進行常用對數(shù)轉(zhuǎn)換,并對轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進行成組配對t檢驗及單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 PC組與非PC組血清LFA檢測情況比較

    63例患者均行LFA檢測,33例PC患者其中經(jīng)支氣管鏡肺活檢術(shù)(TBLB)11例、行胸腔鏡手術(shù)6例、行CT引導(dǎo)下肺穿刺術(shù)16例,LFA檢測陽性27例;非PC組30例患者均為陰性。對27例陽性患者進行半定量測定,其滴度為1∶5~1∶5 120;

    LFA診斷PC的敏感度為81.82%(27/33),特異度為100%(30/30),陽性預(yù)測值100%,陰性預(yù)測值83.33%(30/36)。

    2.2 PC組血清LFA檢查結(jié)果及其相關(guān)的因素

    2.2.1 基礎(chǔ)疾病對PC組血清的LFA檢測結(jié)果的影響 33例PC患者有基礎(chǔ)疾病15例,其中腎移植術(shù)后1例,糖尿病4例,惡性腫瘤4例,腎病綜合征及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎各2例,支氣管擴張伴陳舊性肺結(jié)核1例,慢性阻塞性肺部疾病1例,慢性乙型肝炎1例,高血壓病2例;無基礎(chǔ)疾病者18例。兩組患者LFA陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.185);有無基礎(chǔ)疾病組患者半定量幾何均數(shù)分別為1∶76.1、1∶116.2,兩者陽性檢出者抗原滴度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.597,P=0.556),見表1及圖1。

    2.2.2 臨床診斷類型對PC組血的LFA檢測結(jié)果影響 33例均為單純PC患者,其中體檢時發(fā)現(xiàn)肺部陰影9例(27.3%);臨床癥狀24例(72.7%),其中咳嗽23例,咳痰21例,氣喘7例,胸痛2例,發(fā)熱2例,乏力1例。急性確診、慢性確診與無癥狀確診三組患者陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.004),其中慢性組檢出率顯著高于無癥狀組,Bonferroni法校正P=0.029。三組半定量滴度的幾何均數(shù)分別為1∶353.3、1∶45.6、1∶160.0,其平均水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.085,P=0.030);使用Bonferroni法進行多重比較,急性組滴度與慢性組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.032),見表2及圖2。

    2.2.3 胸部CT影像學(xué)表現(xiàn)對PC組血清的LFA檢測結(jié)果的影響 根據(jù)胸部CT病灶分布分為單側(cè)單發(fā)、單側(cè)多發(fā)、雙側(cè)多發(fā),三組陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001);各組間兩兩比較使用Bonferroni法校正,顯示雙側(cè)多發(fā)組陽性率高于單側(cè)單發(fā)組(P<0.001),單側(cè)多發(fā)組陽性率高于單側(cè)單發(fā)組(P=0.008)。LFA半定量滴度單側(cè)單發(fā)者僅1例為1∶5,而單側(cè)、雙側(cè)多發(fā)組半定量滴定的幾何均數(shù)分別為1∶31.7、1∶149.3,兩組滴度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.007,P=0.056),見表3、圖3。按胸部影像特點分為肺部孤立結(jié)節(jié)或腫塊<2 cm(即單側(cè)單發(fā)者),多發(fā)或結(jié)節(jié)、腫塊≥2 cm,斑片實變浸潤影,混合病變,四組陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001);各組間兩兩比較使用Bonferroni法校正,結(jié)果顯示多發(fā)組、斑片組與混合組陽性檢出率均高于孤立組(P<0.001、P=0.015、P=0.001)。其后三者LFA半定量滴度幾何均數(shù)分別為1∶58.4、1∶367.6、1∶105.6,三組陽性檢出者抗原滴度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.050,P=0.152),見表3、圖4。

    其伴隨影像表現(xiàn):伴隨空洞征8例、支氣管充氣征5例、磨玻璃影5例、胸腔積液1例、縱隔淋巴結(jié)腫大1例的患者,其血清LFA檢測均為陽性。由于病例數(shù)較少及分散未進行統(tǒng)計分析。

    3 討論

    肺隱球菌病是由隱球菌感染引起的一種急性、亞急性或慢性的呼吸系統(tǒng)真菌病。隱球菌侵襲機體感染后,其菌體的莢膜多糖抗原釋放入血,通過乳膠凝集試驗(CrAg-latex)、膠體金免疫層析法(LFA)檢測莢膜多糖抗原是隱球菌病診斷的首選方法[2]。但因LFA檢測不需要對樣品進行修飾、對各種隱球菌亞種血清型的高敏感度特異度、設(shè)備要求低、快速、低成本等因素[3],近年LFA在臨床上得到廣泛的應(yīng)用,據(jù)國內(nèi)外報道針對HIV感染或免疫受損為主的隱球性腦膜炎或隱球菌敗血癥患者,其LFA檢測的特異度達95.0%~99.1%、靈敏度達95%~99.3%[4-6]。

    但對非HIV的PC患者報告,靈敏度則較前降低,Kohno等[7]研究顯示157例患者其LFA檢測靈敏度為78.8%;國內(nèi)學(xué)者李小華等[8]及胡群等[9]通過兔肺隱球菌感染模型及非HIV的PC研究顯示其血清LFA敏感度為80.0%~89.4%,特異度均為100%;黃佳斯等[10]從547例患者血清LFA檢測其靈敏度為80.0%;特異性為99.4%,陽性預(yù)測值為72.7%和陰性預(yù)測值為99.6%。本研究顯示在非HIV感染的患者其血清CrAg的LFA測定的敏感性為81.82%,特異性為100%,陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為100%和83.33%,與前面報道是相一致的;比LFA在感染HIV的隱球菌病患者的檢測在特異度相當(dāng),而其靈敏度偏低;分析考慮與患有HIV感染或機體免疫受損患者免疫狀態(tài)較差,隱球菌感染后患者病情較重及病灶較廣泛所致抗原入血較快較多,以致檢測陽性率更高的可能。

    LFA檢測結(jié)果是否與機體基礎(chǔ)疾病、臨床表現(xiàn)、影像學(xué)變化等相關(guān),目前研究較少。McKenney及Souleymane等[11-12]報道在HIV感染的人群中其CD4計數(shù)與LFA陽性率有關(guān)。國內(nèi)王麗芳等[13]曾報告LA檢測隱球菌抗原在重癥及累及2個以上臟器者的陽性率高,其半定量的滴度與肺部病灶范圍和疾病嚴(yán)重程度有相關(guān)性。并結(jié)合Anupop等[14]報道LFA與LA檢測比較,顯示其一致性及其滴度值有相關(guān)性;所以,綜合分析LFA檢測血清-CrAg其結(jié)果可能受到類似因素的影響。

    從本研究發(fā)現(xiàn)患有糖尿病、惡性腫瘤、器官移植、長期使用免疫抑制劑等患者與無基礎(chǔ)疾病患者在LFA陽性率及半定量抗原測定值方面比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),支持Kohno等[7]報告的PC患者LFA抗原檢測結(jié)果與有無基礎(chǔ)疾病無關(guān);對于急性確診、慢性確診、無癥狀PC患者LFA陽性率及半定量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),提示臨床表現(xiàn)對于LFA陽性及其半定量值是有影響的;其中急性確診比慢性確診在兩者檢測結(jié)果方面影響更顯著。也支持了病情較重的患者其抗原檢測陽性率及半定量滴度更高的可能。

    從影像學(xué)病變累及范圍及影像特點是否與LFA結(jié)果陽性及半定量分析來看,發(fā)現(xiàn)病灶分布為單側(cè)多發(fā)、雙側(cè)多發(fā)及特點為多發(fā)或結(jié)節(jié)、腫塊≥2 cm,斑片實變浸潤影,混合病變陽性檢出率及半定量滴定值均顯著高于單側(cè)孤立的病灶為14.28%的陽性率及1∶5半定量值;而其他組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。并其伴隨空洞、支氣管充氣征、磨玻璃影、胸腔積液、縱隔淋巴結(jié)腫大特點的患者,其血清LFA檢測均為陽性,考慮此類患者的臨床表現(xiàn)一般較重或病情較急需。從影像結(jié)果分析支持Baddley等[15]及Pappas等[16]曾報道PC病灶局限的患者血清中通常難以檢測到隱球菌抗原,存在敏感性不足的,可能是隱球菌在肺部局限性浸潤生長,隱球菌抗原較難釋放人血有關(guān),而病灶多或累及較廣的患者,其隱球菌抗原釋放入血較快較多;所以,肺部病灶表現(xiàn)與其釋放入血的隱球菌莢膜抗原量有關(guān)。

    本研究從臨床癥狀、影像學(xué)表現(xiàn)與傅順金等[17]報道PC患者中其血隱球菌莢膜多糖抗原檢測陽性占63.46%,而其中咳嗽咳痰占75.00%,影像表現(xiàn)為浸潤實變者占79.17%,結(jié)節(jié)或腫塊型者僅占41.00%相符。分析患者的咳嗽、咳痰、氣急、發(fā)熱等癥狀及影像的多發(fā)、斑片實變影、空洞等,其存在其機體細菌負(fù)荷量更大、細菌菌壁多糖莢膜抗原更易釋放入血及入血量更多可能,以致LFA檢測陽性率及半定量測定值更高[18]。

    綜上所述,具有快速、方便、對設(shè)備要求低的LFA檢測方法因其高特異性、對臨床表現(xiàn)或肺部多發(fā)病灶的PC患者的高靈敏度等特點,以及有報道實現(xiàn)未梢血的床旁快速檢測的開展,其無疑成為PC患者的臨床上最重要最早的檢測方法;并且其陽性結(jié)果以及半定量滴定與病情輕重存在相關(guān)性,對臨床有一定指導(dǎo)意義。本文對探索LFA檢測其結(jié)果涉及的相關(guān)因素上存在病例數(shù)較少,今后將擴大樣本量繼續(xù)其相關(guān)性的研究。

    參考文獻

    [1]曾能永,徐云歡,孔晉亮.肺隱球菌病診治進展[J].國際呼吸雜志,2016,36(3):218-223.

    [2] World Health Organization.Rapid advice on the diagnosis,prevention and management of cryptococcal disease in Hiv-infected adults,adolesents and children[EB].2011,Geneva:WHO.

    [3] Vidal J E,Boulware D R.Lateral flow assay for cryptococcal antigen:An important advance to improve the cintinuum of hiv care and reduce cryptococcalmeningitts-related mortality[J].Rev Inst Med Trop Sao Paulo,2015,57(Suppl 19):38-45.

    [4] Huang H R,F(xiàn)ang L C,Rajbanshi B,et al.Evaluation of a new cryptococcal antigen lateral flow immunoassay in serum,cerebrospinal fluid and urine for the diagnosis of cryptococcsis:A meta-analysis and systematic review[J].PLOS One,2015,10(5):e0127117.

    [5]季淑娟,倪玲紅,張俊麗,等.不同莢膜抗原檢測方法對隱球菌腦膜腦炎診斷和療效評估的價值[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2015,95(46):3733-3736.

    [6]浙江省醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會.肺隱球菌病診治浙江省專家共識[J].中華臨床感染病志,2017,10(5):321-326.

    [7] Kohno S,Kakeya H,Izumikawak K,et al.Clinical features of pulmonany cryptococcosis in no-HIV patients in Japan[J].Infect Chemother,2015,21(1):23-30.

    [8]李小華,賴國祥,許昌聲,等.兔肺隱球菌感染模型制作及莢膜多糖膠體金免疫層析法的診斷價值[J].國際呼吸雜志,2018,38(10):725-730.

    [9]胡群,徐禮裕,張雷,等.血膠體金免疫層析法對非人免疫缺陷病毒感染的肺隱球菌病患者的診斷價值[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2018,41(8):651-653.

    [10]黃佳斯,石磊,唐愛國,等.膠體金免疫層析法檢測血清隱球菌抗原在肺隱球菌病診斷中的應(yīng)用價值[J].臨床檢驗雜志,2017,35(7):518-519.

    [11] McKenney J,Bauman S,Neary B,et al.Prevalence,Correlates,and Outcomes of Cryptococcal Antigen Positivity Among Patients With AIDS,United States,1986-2012[J].Clin Infect Dis,2015,60(6):959-965.

    [12] Souleymane S,Boniface M,Anne P,et al.Estimated Prevalence of Cryptococcus Antigenemia(CrAg) among HIV-Infected Adults with Advanced Immunosuppression in Namibia Justifies Routine Screening and Preemptive Treatment[J].PLoS One,2016,11(10):e0161830.

    [13]王麗芳,施毅,丁媛,等.65例肺隱球菌病回顧分析[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2014,37(10):764-768.

    [14] Anupop J,Anil A.Panackal Peter R.Williamson etal.Performance of the Cryptococcal Antigen Lateral Flow Assay in Non-HIV-Related Cryptococcosis[J].Clin Microbiol,2016,54(2):460-463.

    [15] Baddley J W,Perfect J R,Oster R A,et al.PulmonarycrptococcosisinpatientswithoutHIV infection:factor eyrycryptococcosisin patientswithoutHIVinfection:factorsassociatedwithdisseminated disease[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2008,27(10):937-943.

    [16] Pappas P G,Perfect J R,Cloud G A,et al.Cryptococcosis in human imnlunodeficiency virus-negative patients in the era of effective azole therapy[J].Clin Infect Dis,2001,33(5):690-699.

    [17]傅順金,許攀峰,周華,等.52例肺隱球菌病的臨床及影像特點與隱球菌莢膜抗原檢測結(jié)果的關(guān)系[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2018,28(22):3397-3400,3409.

    [18] Admasu T M,Ethan B,Obsie T.Point-of-Care Testing for Cryptococcal Disease among Hospitalized Human Immunodeficiency virus-Infected Adults in Ethiopia[J].Am J Trop Med Hyg,2016,95(4):786-792.

    (收稿日期:2019-06-12) (本文編輯:馬竹君)

    猜你喜歡
    診斷價值因素
    英語教學(xué)中的文化因素
    關(guān)于我國國內(nèi)生產(chǎn)總值影響因素的計量分析
    關(guān)于我國國內(nèi)生產(chǎn)總值影響因素的計量分析
    磁共振擴散張量成像在輕型顱腦損傷患者中的診斷價值
    腹部超聲對肝膽疾病的臨床診斷價值
    腦CT對腦器質(zhì)性精神病的診斷價值分析
    亚洲 国产 在线| 97人妻天天添夜夜摸| 久久精品国产a三级三级三级| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产日韩欧美在线精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 69精品国产乱码久久久| 国产高清国产精品国产三级| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 国产精品99久久99久久久不卡| 午夜精品国产一区二区电影| 在线天堂中文资源库| 一区二区三区精品91| 桃花免费在线播放| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 日韩av免费高清视频| 大陆偷拍与自拍| 午夜福利视频精品| 午夜激情av网站| 国产成人91sexporn| 1024视频免费在线观看| 免费观看av网站的网址| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧美精品一区二区免费开放| 十八禁人妻一区二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 91麻豆av在线| 久久热在线av| 好男人视频免费观看在线| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 精品国产一区二区久久| 69精品国产乱码久久久| 麻豆国产av国片精品| 国产精品亚洲av一区麻豆| 两个人看的免费小视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 欧美中文综合在线视频| 9色porny在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| a级毛片黄视频| 国产精品久久久久成人av| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲成人手机| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 日日夜夜操网爽| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜激情av网站| 亚洲精品国产区一区二| 丝袜喷水一区| 熟女av电影| 女性生殖器流出的白浆| 久久人妻熟女aⅴ| 1024视频免费在线观看| 国产成人91sexporn| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 69精品国产乱码久久久| 少妇 在线观看| 日日夜夜操网爽| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 午夜激情久久久久久久| 国产精品一区二区免费欧美 | 欧美日韩av久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产野战对白在线观看| 黄片小视频在线播放| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 青草久久国产| 中文字幕av电影在线播放| 国产亚洲一区二区精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 午夜福利视频精品| 国产日韩欧美在线精品| 超色免费av| 国产人伦9x9x在线观看| 丝袜在线中文字幕| 看十八女毛片水多多多| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品高清国产在线一区| 天天影视国产精品| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美大码av| 妹子高潮喷水视频| 五月开心婷婷网| 美女主播在线视频| 国产在视频线精品| 日韩电影二区| 日本av免费视频播放| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产精品免费视频内射| 深夜精品福利| 亚洲国产av影院在线观看| 91精品国产国语对白视频| 最近手机中文字幕大全| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 啦啦啦在线观看免费高清www| 黄色片一级片一级黄色片| 最新在线观看一区二区三区 | 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 97在线人人人人妻| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 天堂8中文在线网| 国产精品久久久久成人av| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | av网站在线播放免费| 99国产精品一区二区三区| 亚洲少妇的诱惑av| 老汉色av国产亚洲站长工具| 丝袜人妻中文字幕| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| av电影中文网址| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美av亚洲av综合av国产av| 黑丝袜美女国产一区| 91国产中文字幕| av网站在线播放免费| 热99国产精品久久久久久7| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久久国产精品麻豆| 欧美精品一区二区免费开放| 国产视频首页在线观看| 精品少妇内射三级| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲成人免费av在线播放| 国产99久久九九免费精品| 国产深夜福利视频在线观看| 波野结衣二区三区在线| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 成年av动漫网址| 亚洲久久久国产精品| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久久视频综合| 日日摸夜夜添夜夜爱| 丝袜在线中文字幕| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 国产一区二区三区av在线| 国产高清videossex| a级毛片黄视频| 18禁观看日本| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲中文av在线| 久久女婷五月综合色啪小说| a级毛片在线看网站| 午夜老司机福利片| 看免费av毛片| 狂野欧美激情性bbbbbb| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲男人天堂网一区| 18在线观看网站| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产免费视频播放在线视频| 麻豆乱淫一区二区| 久久久精品免费免费高清| cao死你这个sao货| 久久久久国产一级毛片高清牌| 人妻人人澡人人爽人人| 悠悠久久av| 成在线人永久免费视频| 国产精品一区二区免费欧美 | 又紧又爽又黄一区二区| 丁香六月天网| 亚洲第一av免费看| 免费在线观看完整版高清| 久久久亚洲精品成人影院| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 中文字幕高清在线视频| 另类精品久久| avwww免费| 一区二区三区精品91| 久久精品久久精品一区二区三区| av欧美777| 99香蕉大伊视频| 最近手机中文字幕大全| 黄色视频不卡| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲三区欧美一区| 精品免费久久久久久久清纯 | av有码第一页| 美女扒开内裤让男人捅视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 亚洲专区国产一区二区| 国产av精品麻豆| 亚洲精品乱久久久久久| 纯流量卡能插随身wifi吗| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久ye,这里只有精品| 亚洲av综合色区一区| 久久女婷五月综合色啪小说| 成人影院久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久久亚洲精品成人影院| 91精品国产国语对白视频| 国产精品久久久av美女十八| 大香蕉久久成人网| 黄色毛片三级朝国网站| 丝袜喷水一区| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 国产成人精品久久二区二区91| 久久久久久久久免费视频了| 精品视频人人做人人爽| 亚洲人成电影免费在线| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日本a在线网址| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品亚洲成国产av| 嫁个100分男人电影在线观看 | a级毛片在线看网站| 国产99久久九九免费精品| 国产真人三级小视频在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影小说| 高清视频免费观看一区二区| av片东京热男人的天堂| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 永久免费av网站大全| 久久精品久久精品一区二区三区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 我要看黄色一级片免费的| 久久毛片免费看一区二区三区| 免费在线观看黄色视频的| 97人妻天天添夜夜摸| 午夜福利免费观看在线| 一级毛片女人18水好多 | 91老司机精品| 国产高清视频在线播放一区 | 国产男女内射视频| 69精品国产乱码久久久| 国产免费视频播放在线视频| 久久久久久人人人人人| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 在线观看国产h片| 亚洲成人免费电影在线观看 | 国产精品欧美亚洲77777| 老司机深夜福利视频在线观看 | av视频免费观看在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 大码成人一级视频| 国产精品久久久久成人av| 久久久国产欧美日韩av| 免费观看人在逋| 久久久国产一区二区| 一级a爱视频在线免费观看| 国产av一区二区精品久久| av网站免费在线观看视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产精品人妻久久久影院| 另类精品久久| 成年美女黄网站色视频大全免费| 亚洲av片天天在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产精品一区二区免费欧美 | 永久免费av网站大全| 免费在线观看日本一区| 久久亚洲国产成人精品v| 各种免费的搞黄视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 欧美久久黑人一区二区| 蜜桃在线观看..| 亚洲免费av在线视频| 婷婷色av中文字幕| 国产精品偷伦视频观看了| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 黄片小视频在线播放| 啦啦啦在线观看免费高清www| 晚上一个人看的免费电影| 免费看十八禁软件| 老司机影院成人| 久久久国产精品麻豆| 各种免费的搞黄视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美在线黄色| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 桃花免费在线播放| 一区二区三区四区激情视频| 在线观看人妻少妇| 人成视频在线观看免费观看| www.熟女人妻精品国产| 悠悠久久av| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 秋霞在线观看毛片| 国产精品九九99| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲专区国产一区二区| 欧美黑人欧美精品刺激| 99热国产这里只有精品6| 好男人视频免费观看在线| 国产日韩欧美在线精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 一区在线观看完整版| 各种免费的搞黄视频| av线在线观看网站| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美国产精品一级二级三级| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 大香蕉久久网| 国产精品免费大片| 国产精品久久久久久精品古装| 岛国毛片在线播放| av片东京热男人的天堂| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日本av手机在线免费观看| 日韩视频在线欧美| 国产熟女午夜一区二区三区| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 中文字幕亚洲精品专区| 欧美xxⅹ黑人| 热re99久久国产66热| 欧美97在线视频| 最新的欧美精品一区二区| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 韩国精品一区二区三区| 免费观看av网站的网址| 男女高潮啪啪啪动态图| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 日本av手机在线免费观看| 日本欧美视频一区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 午夜免费鲁丝| 多毛熟女@视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久久欧美国产精品| 久9热在线精品视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 宅男免费午夜| 亚洲人成电影观看| 老司机在亚洲福利影院| 国产高清不卡午夜福利| 欧美精品av麻豆av| 韩国精品一区二区三区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 高清欧美精品videossex| 国产午夜精品一二区理论片| 免费观看a级毛片全部| 超碰成人久久| 亚洲成色77777| 日韩av免费高清视频| 99久久人妻综合| 最新的欧美精品一区二区| 人妻人人澡人人爽人人| 久久久国产欧美日韩av| 日本色播在线视频| 热99国产精品久久久久久7| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日本av免费视频播放| 美国免费a级毛片| 在线观看免费视频网站a站| a级毛片在线看网站| 精品第一国产精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 这个男人来自地球电影免费观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日本wwww免费看| 久久久久网色| 国产高清不卡午夜福利| 欧美中文综合在线视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 91精品三级在线观看| 日韩伦理黄色片| 狂野欧美激情性bbbbbb| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品人妻久久久影院| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲,欧美精品.| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产深夜福利视频在线观看| 欧美在线一区亚洲| 我的亚洲天堂| 日韩电影二区| 一区二区av电影网| 咕卡用的链子| 国产欧美日韩精品亚洲av| 成人三级做爰电影| 在线观看人妻少妇| 免费观看a级毛片全部| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日本欧美视频一区| 日韩av不卡免费在线播放| 热re99久久国产66热| 午夜免费观看性视频| 亚洲免费av在线视频| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲九九香蕉| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 男人添女人高潮全过程视频| 国产免费福利视频在线观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产精品二区激情视频| 男女国产视频网站| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲国产欧美网| kizo精华| 精品欧美一区二区三区在线| 精品国产国语对白av| 欧美av亚洲av综合av国产av| 人人妻人人澡人人看| 一级a爱视频在线免费观看| 香蕉丝袜av| 国产一区二区 视频在线| 国产xxxxx性猛交| 一区二区av电影网| 97人妻天天添夜夜摸| 国产有黄有色有爽视频| 久久久久久久精品精品| 亚洲国产看品久久| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 深夜精品福利| 国产男人的电影天堂91| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 免费观看a级毛片全部| 中文字幕精品免费在线观看视频| 啦啦啦 在线观看视频| 多毛熟女@视频| 老熟女久久久| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 美女扒开内裤让男人捅视频| 韩国精品一区二区三区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 久久青草综合色| 久热这里只有精品99| 男女免费视频国产| 欧美大码av| 免费少妇av软件| 少妇人妻 视频| 久久国产精品影院| 久久免费观看电影| 国产成人精品久久二区二区免费| 日韩欧美一区视频在线观看| av福利片在线| 麻豆乱淫一区二区| 欧美在线一区亚洲| 丰满少妇做爰视频| 国产一区二区激情短视频 | 精品少妇久久久久久888优播| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 七月丁香在线播放| 男女午夜视频在线观看| 在线看a的网站| 中文字幕av电影在线播放| 欧美黑人精品巨大| 午夜激情久久久久久久| 涩涩av久久男人的天堂| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 午夜福利免费观看在线| xxxhd国产人妻xxx| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 视频区图区小说| 三上悠亚av全集在线观看| 两性夫妻黄色片| 国产精品一二三区在线看| 青草久久国产| 午夜两性在线视频| 亚洲精品自拍成人| 亚洲国产精品成人久久小说| 伊人亚洲综合成人网| 美女国产高潮福利片在线看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲精品久久午夜乱码| 在线观看免费视频网站a站| 桃花免费在线播放| av天堂在线播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 天堂俺去俺来也www色官网| 大话2 男鬼变身卡| 超碰成人久久| 国产成人精品久久久久久| 一级毛片我不卡| 午夜福利免费观看在线| 国产1区2区3区精品| 啦啦啦 在线观看视频| 久久 成人 亚洲| 考比视频在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 国产成人欧美| 欧美精品一区二区大全| 女性被躁到高潮视频| 国产伦理片在线播放av一区| 午夜老司机福利片| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 精品国产一区二区久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 午夜av观看不卡| 最近手机中文字幕大全| 成人亚洲欧美一区二区av| 丝袜美足系列| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 91精品国产国语对白视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 黄片播放在线免费| 精品人妻在线不人妻| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 久久天堂一区二区三区四区| 一边亲一边摸免费视频| 欧美在线黄色| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产真人三级小视频在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 在线观看人妻少妇| 在线av久久热| www.精华液| 午夜免费观看性视频| 男女国产视频网站| 国产伦理片在线播放av一区| 午夜日韩欧美国产| 一级片免费观看大全| 久久人人97超碰香蕉20202| 2018国产大陆天天弄谢| 欧美激情极品国产一区二区三区| 女性被躁到高潮视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 精品一区在线观看国产| 午夜福利在线免费观看网站| 99热全是精品| 日韩大片免费观看网站| 国产不卡av网站在线观看| 搡老乐熟女国产| 深夜精品福利| 男男h啪啪无遮挡| 国产在线视频一区二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产精品二区激情视频| 亚洲成人手机| 国产免费现黄频在线看| 日日爽夜夜爽网站| 国产在线视频一区二区| 看免费av毛片| 国产精品av久久久久免费| 欧美国产精品va在线观看不卡| 母亲3免费完整高清在线观看| 少妇 在线观看| 十八禁人妻一区二区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产精品久久久久久精品古装| 久久九九热精品免费| 亚洲专区中文字幕在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产野战对白在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 久久久精品免费免费高清| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲男人天堂网一区| 中文字幕高清在线视频| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 免费在线观看影片大全网站 | 久久影院123| 精品人妻在线不人妻| 中文字幕最新亚洲高清| 午夜福利,免费看| 色视频在线一区二区三区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲国产精品一区三区| 赤兔流量卡办理| 久久热在线av| 午夜福利在线免费观看网站| 美女国产高潮福利片在线看| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 欧美激情高清一区二区三区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 男女免费视频国产| 老司机影院成人| 十八禁人妻一区二区| 亚洲 国产 在线| e午夜精品久久久久久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 激情五月婷婷亚洲| 国产在线视频一区二区| av在线播放精品| 叶爱在线成人免费视频播放| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲精品自拍成人| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 日韩制服骚丝袜av| 国产真人三级小视频在线观看| 两个人看的免费小视频| 波野结衣二区三区在线| 国产片特级美女逼逼视频| 91国产中文字幕| 飞空精品影院首页| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产野战对白在线观看| 久久久国产一区二区| 亚洲,欧美精品.| av国产久精品久网站免费入址| 欧美精品一区二区大全| 免费看av在线观看网站|