Survivin和PCAF在食管癌組織中的表達以及臨床意義

梁宗英　侯繼申　張樂　張志民　趙寶山　孫光蕊　辛國華

【摘要】 目的：探討Survivin和PCAF在食管癌中的表達及與臨床病理特征之間的關(guān)系。方法：采用免疫組織化學(xué)染色法檢測90例食管癌組織和40例正常組織中Survivin和PCAF的蛋白表達水平，分析其與患者臨床病理特征的關(guān)系及Survivin和PCAF在食管癌中表達的相關(guān)性。結(jié)果：Survivin陽性表達在癌組織中為73.33%，明顯高于正常組織的5.00%（P<0.05）。PCAF陰性表達在癌組織中為65.56%，高于在正常組織中的7.50%（P<0.05）。Survivin蛋白高表達與患者性別、年齡和腫瘤大小均無關(guān)（P>0.05），與TNM分期、腫瘤浸潤深度、腫瘤分化程度和淋巴是否轉(zhuǎn)移均有關(guān)（P<0.05）。PCAF的陰性表達或低表達與患者性別、年齡、TNM分期、腫瘤浸潤深度、腫瘤大小以及淋巴是否轉(zhuǎn)移均無關(guān)（P>0.05），與腫瘤的分化程度有關(guān)（P<0.05）。Survivin和PCAF在食管癌中的表達呈負相關(guān)（r=0.113，P<0.05）。

結(jié)論：Survivin表達水平與腫瘤的分期、分化程度、浸潤深度及淋巴轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)，PCAF表達水平與腫瘤分化程度呈負相關(guān)。Survivin和PCAF在食管癌中的表達具有明顯相關(guān)性，聯(lián)合兩者可能在食管癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后等方面發(fā)揮協(xié)同作用。

【關(guān)鍵詞】 Survivin; PCAF; 食管癌; 臨床意義

The Expression of Survivin and PCAF in Esophageal Carcinomaand Its Clinical Significance/LIANG Zongying，HOU Jishen，ZHANG Le，et al.//Medical Innovation of China，2019，16（20）：122-126

【Abstract】 Objective：To explore the relationship between Survivin and PCAF expression and clinicopathologic features in esophageal carcinoma.Method：Immunohistochemical staining was used to detect the expression of Survivin and PCAF in 90 cases of esophageal squamous cell carcinoma and 40 cases of normal esophageal carcinoma.The relationship between Survivin and PCAF expression in esophageal carcinoma and its clinicopathological features was analyzed.Result：The positive expression of Survivin was 73.33% in cancer tissues，which was significantly higher than 5.00% in normal tissues（P<0.05）.The negative expression of PCAF was 65.56% in cancer tissues，which was higher than 7.50% in normal tissues（P<0.05）.The expression of Survivin protein was not correlated with clinicopathological features，such as sex，age and tumor size（P>0.05），but it was related with clinicopathological features，such as TNM stage，depth of tumor infiltration，tumor differentiation and lymphatic metastasis（P<0.05）.There were no significant differences in the negative expression or low expression of PCAF between the sex，age，TNM stage，depth of tumor invasion，tumor size and lymphatic metastasis（P>0.05），but there was significant difference between PCAF protein and tumor differentiation（P<0.05）.The expression of survivin and PCAF in esophageal carcinoma was negatively correlated（r=0.113，P<0.05）.Conclusion：Survivin expression level is positively correlated with tumor stage，differentiation degree，invasion depth and lymph node metastasis，PCAF expression level is negatively correlated with tumor differentiation degree，Survivin and PCAF expression level are significantly correlated in esophageal cancer，combined with them，they may play a synergistic role in the occurrence，development，metastasis and prognosis of esophageal cancer.

【Key words】 Survivin; PCAF; Esophageal cancer; Clinical significance

First-authors address：The Affiliated Hospital of Chengde Medical College，Chengde 067000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.20.032

食管癌是我國常見的消化系統(tǒng)腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率均居世界第一位[1-3]。食管癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療是改善預(yù)后最有效的方法，因此尋找早期診斷、病情監(jiān)測和判斷預(yù)后敏感有效的監(jiān)測指標成為近年來研究重點。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多途徑、多種癌基因激活和抑癌基因失活的漸進過程，異常的基因以及蛋白的表達在其中起著關(guān)鍵作用。近年隨著分子生物學(xué)發(fā)展，對食管癌的癌基因和抑癌基因研究的不斷深入，使醫(yī)生能夠從蛋白水平、分子水平重新認識食管癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后。越來越多的研究表明，在多種腫瘤組織中高表達的凋亡抑制蛋白存活素（Survivin）、低表達甚至不表達的PCAF參與了腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移和血管生成[4-8]。但迄今為止，Survivin和PCAF在食管癌發(fā)生發(fā)展過程中是否存在協(xié)同作用尚無文獻闡明。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測了Survivin和PCAF蛋白在90例食管鱗狀細胞癌組織中的表達，分析其與食管癌人口學(xué)特征、分化程度、TNM分期、腫瘤侵襲性、淋巴轉(zhuǎn)移和預(yù)后的關(guān)系以及兩者在其中的協(xié)同作用，為食管癌的早期診斷和臨床上制定治療方案提供依據(jù)?，F(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016年2月-2018年2月承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胸外科食管癌手術(shù)切除90例作為食管癌組，其病理類型全部為鱗狀細胞癌。入選標準：所有患者的臨床資料完整;均為首發(fā)病例;所有患者術(shù)前均無化療、放療以及免疫治療史。其中男54例，女36例;年齡38～72歲，平均（59.23±3.69）歲;≥60歲59例，<60歲31例;TNM分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期41例，Ⅲ期28例;細胞分化程度高、中、低分別為34、31、25例;有淋巴轉(zhuǎn)移54例，無淋巴轉(zhuǎn)移36例;腫瘤浸潤程度：淺層29例，深層61例;腫瘤大?。?5 cm 48例，≥5 cm 42例。另選取90例患者中的40例作為對照組，對照組組織兩殘端距癌組織6 cm以上病理證實為正常鱗狀上皮組織。

1.2 方法 石蠟塊5 μm切片經(jīng)二甲苯脫蠟水化、枸櫞酸鹽抗與修復(fù)、H2O2浸潤、PBS沖洗、山羊血清封閉后，Ⅰ抗溫育，Ⅱ抗溫育，中間PBS洗滌，DAB顯色、蘇木素染色，酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。兔抗人BIRC5/Survivin單克隆抗體購自上海威奧生物科技有限公司，鼠抗人PCAF單克隆抗體購自上海煊翎生物科技有限公司，SP試劑盒購自北京諾博來德科技有限公司。

1.3 結(jié)果判定 400倍光鏡隨機選10個高倍視野，每視野數(shù)100個細胞，Survivin陽性結(jié)果：胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃色染色為陽性細胞，陽性細胞占腫瘤細胞的百分比>10%;PCAF陽性結(jié)果：胞質(zhì)和胞核出現(xiàn)棕黃色或棕褐色為顆粒陽性細胞，陽性細胞占腫瘤細胞的百分比≥10%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行分析，Survivin和PCAF陽性表達、年齡、性別、腫瘤大小、TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移等計數(shù)資料，以率（%）表示，比較采用字2檢驗;相關(guān)性分析采用Kappa一致性檢驗和Pearson，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Survivin和PCAF蛋白在食管癌和正常組織中的表達 Survivin在食管癌組織中表達的陽性率為73.33%，高于在正常組織中的5.00%（P<0.05）。PCAF在食管癌組織中的陰性表達率為65.56%，明顯高于在正常食管組織中的7.50%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 Survivin和PACF的表達與臨床病理特征的相關(guān)性 Survivin蛋白高表達與患者性別、年齡和腫瘤大小均無關(guān)（P>0.05），與TNM分期、腫瘤浸潤深度、腫瘤分化程度和淋巴是否轉(zhuǎn)移均有關(guān)（P<0.05）;PCAF的陰性表達或低表達與患者性別、年齡、TNM分期、腫瘤浸潤深度、腫瘤大小以及淋巴是否轉(zhuǎn)移均無關(guān)（P>0.05），與腫瘤的分化程度有關(guān)（P<0.05）。見表2。

2.3 Survivin和PCAF在食管癌中表達的相關(guān)性 Survivin和PCAF在食管癌中的表達呈負相關(guān)（r=0.113，P<0.05），見表3。

3 討論

食管癌是危害人類健康的重要慢性非傳染性疾病之一，隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，居民生活習慣及飲食結(jié)構(gòu)的改變和診療水平的提高，我國食管癌的發(fā)病率和死亡率在城市地區(qū)呈現(xiàn)下降趨勢，但發(fā)病率和死亡率仍處于相當高的水平[9]，嚴重威脅居民的生命和健康，給家庭和社會經(jīng)濟造成沉重的經(jīng)濟負擔。研究表明食管癌的發(fā)生發(fā)展是一個多基因參與、多階段的復(fù)雜過程，失活的抑癌基因通過參與細胞的凋亡為異常細胞提供生存之機，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，因此食管癌的基因和細胞凋亡成為研究

熱點[10]。

Survivin基因是功能最強的細胞凋亡抑制因子，它的表達與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、臨床病理特征及轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)[11-13]。Survivin在腫瘤細胞中的作用表現(xiàn)為抑制細胞周期、干擾細胞凋亡、促進細胞有絲分裂和血管形成，從而提高腫瘤細胞的存活和生長能力，對腫瘤的診治及預(yù)后具有深遠的意義[14-16]。本研究發(fā)現(xiàn)在食管癌組織中Survivin陽性表達率為73.33%，正常組織中為5.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明Survivin蛋白在正常組織中基本不表達，在食管癌組織過度表達，提示其可能通過直接或間接作用抑制食管癌細胞的凋亡，通過有絲分裂促進腫瘤細胞的異常增殖和惡性化而參與食管癌的發(fā)生、發(fā)展與形成[17]。文獻[18]通過RNA干擾技術(shù)開展食管癌與Survivin關(guān)系的研究，發(fā)現(xiàn)干擾后Survivin蛋白的表達水平較對照組下調(diào)，細胞活力明顯下降，生長緩慢，其克隆形成較小，數(shù)量較少，證實沉默Survivin基因能抑制Eca-109細胞的增殖，增強Caspases的活性，阻滯細胞周期的進展，誘導(dǎo)細胞凋亡。Survivin在食管癌的發(fā)生、進展、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)過程中產(chǎn)生了重要的作用，是一個潛在預(yù)測食管癌患者預(yù)后的分子標志物。同時本研究顯示，Survivin高表達與患者的年齡、性別、腫瘤的大小均無關(guān)（P>0.05），而與腫瘤分化程度、侵襲性、TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)（P<0.05），Survivin陽性表達率隨著食管癌的惡性程度和TNM分期的增加而逐漸增加（P<0.05），與柴小軍等[19]的研究結(jié)果相一致。腫瘤浸潤至深層或有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Survivin蛋白表達升高，說明Survivin可以抑制食管癌細胞自身的凋亡過程，使得食管癌惡性程度增強，導(dǎo)致食管癌容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。牛朝霞等[20]通過Transwell體外侵襲實驗和細胞劃痕實驗證實，靶向抑制Survivin基因的表達能顯著降低干擾組Eca-109細胞的體外侵襲與遷移能力。因而Survivin表達與食管癌侵襲、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后的關(guān)系意義重大。Survivin蛋白表達聯(lián)合食管癌TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移及分化程度等臨床病理特征評估后發(fā)現(xiàn)，Survivin蛋白陰性，TNMⅠ期、腫瘤分化程度高、無淋巴轉(zhuǎn)移者，患者預(yù)后較好，可能與Survivin蛋白表達缺失，抑制腫瘤細胞凋亡的功能喪失，細胞增殖與凋亡保持平衡，提高了早期患者的生存期。當Survivin蛋白陽性時，細胞惡性程度高、腫瘤浸潤至深層者、TNMⅡ和Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，預(yù)后較差?？赡芘cSurvivin表達后正常的凋亡減緩，促進腫瘤細胞無限制生長、促進細胞的有絲分裂和血管的生成以及腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致了腫瘤的局部浸潤和遠處遷移，最終患者的生存期下降。通過對Survivin的表達與臨床病理特征之間關(guān)系的研究來延緩食管鱗癌的發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移。

PCAF是組蛋白乙酞化轉(zhuǎn)移酶，在基因表達調(diào)控過程中起著十分關(guān)鍵的作用，通過調(diào)節(jié)組蛋白和非組蛋白水平而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。在多種人類腫瘤細胞和組織中表達下調(diào)，其表達降低或不表達與腫瘤患者不良預(yù)后密切相關(guān)，國內(nèi)外針對PCAF與腫瘤的發(fā)生進行了許多研究，但PCAF與食管癌發(fā)生報道鮮見。邱衛(wèi)芳等[21]研究發(fā)現(xiàn)，在人宮頸癌組織中PCAF的陽性率為42.0%，低于正常組織的88.9%（P<0.05），與腫瘤的分期和病理分級顯著相關(guān)（P<0.05），與年齡、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度不具有相關(guān)性（P>0.05）。文獻[22]研究發(fā)現(xiàn)PCAF可能對腸型胃癌的發(fā)生和進展有重要的影響，PCAF預(yù)示著患者的預(yù)后，PCAF的陽性率越低，患者的整體生存情況越差。拓航等[7]對35例肝癌患者隨訪發(fā)現(xiàn)，與PCAF陰性表達組3年生存率22.2%相比，PCAF陽性表達組術(shù)后生存期明顯延長，3年生存率為52.9%（P<0.05）。本研究選擇90例食管鱗癌的患者為研究對象，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCAF在食管癌組織中表達的陽性率為34.44%，在正常組織中的陽性表達率為92.50%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。PCAF的表達與腫瘤的分化程度相關(guān)（P<0.05），與年齡、性別、淋巴是否轉(zhuǎn)移、浸潤程度、大小以及TNM分期不具有相關(guān)性（P>0.05）。

本研究結(jié)果顯示，Survivin和PCAF在食管癌中表達呈負相關(guān)（r=0.113，P<0.05），提示Survivin和PCAF可能共同參與了食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程，并在局部的浸潤和局部或遠處的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用。盡管在胃癌和子宮頸癌中均可見Survivin和PCAF的表達報道[23-25]，但兩者聯(lián)合在食管癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用未見文獻報道。PCAF是腫瘤抑制基因P53的共激活子，調(diào)節(jié)P53的活性及其蛋白的穩(wěn)定性來使細胞周期停滯和細胞凋亡達到一個平衡狀態(tài)。文獻[26]研究顯示，在食管癌中P53與Survivin的表達呈顯著正相關(guān)，兩者均在癌組織高表達，與腫瘤分化程度、TNM分期等臨床病理特征無關(guān)，只與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Survivin和PCAF是通過P53還是其他的基因在食管癌中發(fā)揮協(xié)同機制仍有待進一步探討。雖然Survivin和PCAF在食管癌組織中的表達與臨床病理特征之間關(guān)系以及兩者在食管癌腫瘤生長、浸潤、轉(zhuǎn)移中的作用機制尚不明確，但應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)測定兩者基因蛋白在食管癌組織中的表達，分析其與臨床特征之間的相互關(guān)系及兩者在腫瘤發(fā)生中的相互性。隨著分子生物學(xué)研究的深入，探討Survivin和PCAF蛋白的表達與食管癌發(fā)生發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系，對食管癌的早期診斷及預(yù)后判斷提供分子生物學(xué)指標，給基于基因治療的臨床治療方案提供一個分子生物學(xué)治療的新靶點具有非常重要的意義。

參考文獻

[1]卡吾力·居買，居來提·艾尼瓦爾，張海平，等.食管癌精準治療靶點篩查研究現(xiàn)狀與展望[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2018，35（9）：827-834，839.

[2]左婷婷，鄭榮壽，曾紅梅，等.中國食管癌發(fā)病狀況與趨勢分析[J].中華腫瘤雜志，2016，38（9）：703-708.

[3]喬友林.食管癌流行病學(xué)研究的重要里程碑[J].中國腫瘤臨床，2016，43（12）：500-501.

[4]王云，李運紅.胃癌中survivin的研究進展[J].中國臨床研究，2017，30（4）：546-548.

[5] Liang Z，Xin R，Yu Y，et al.Diagnostic value of urinary survivin as a biomarker for bladder cancer：a systematic review and meta-analysis of published studies[J].World Journal of Urology，2018，36（9）：1373-1381.

[6]殷海森，趙新穎，蘇長青.以Survivin為靶標的腫瘤治療策略[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2016，37（3）：342-348.

[7]拓航，鄭鑫，涂康生，等.PCAF在肝細胞癌中的表達及臨床意義[J].細胞與分子免疫學(xué)雜志，2013，29（3）：297-300.

[8]王嶸，易敏，董烽，等.結(jié)腸癌組織P300/CBP相關(guān)因子表達及其臨床意義[J].中華腫瘤防治雜志，2015，22（2）：120-124.

[9]陳萬青，鄭榮壽，張思維，等.2013年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J].中國腫瘤，2017，26（1）：1-7.

[10]喬煒，張永歡，許俊卿，等.RASSF6在食管癌中的表達及臨床意義[J].國際消化病雜志，2019，39（1）：58-60.

[11] Poomsawat S，Punyasingh J，Vejchapipat P，et al.Overexpression of survivin and caspase 3 in oral carcinogenesis[J].Appl Immunohistochem Molphol，2014，22（1）：65-71.

[12]陸毅，姚暉，王曙.Survivin基因及蛋白表達與人786-0腎透明細胞癌細胞增殖、凋亡的相關(guān)性研究[J].標記免疫分析與臨床，2018，25（8）：1223-1226，1248.

[13]毛葦，趙心愷，孔燦燦，等.Survivin基因沉默促進胃癌細胞凋亡及其機制研究[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2018，34（19）：3176-3180.

[14] Garg H，Gupta J C，Talwar G P，et al.Immunotherapy approach with recombinant Survivin adjuvanted with alum and MIP suppresses tumor growth in murine model of breast cancer[J].Preparative Biochemistry & Biotechnology，2018，48（3）：264-269.

[15] Chawla D，Kar R，Gupta B，et al.Role of Survivin and p53 Expression in Response of Primary Culture of Ovarian Cancer Cells to Treatment with Chemotherapeutic Agents[J].International Journal of Gynecological Cancer，2018，28（6）：1239-1246.

[16] He X J，Zhang Q，Ma L P，et al.Aberrant Alternative Polyadenylation is Responsible for Survivin Up-regulation in Ovarian Cancer[J].中華醫(yī)學(xué)雜志（英文版），2016，129（10）：1140-1146.

[17]馬建梅，陳承，潘謹，等.Survivin蛋白在食管鱗癌和肺鱗癌的表達異同探討[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2015，40（1）：26-29.

[18]牛朝霞，李寧寧，陳潔，等.RNA干擾沉默survivin基因?qū)ca-109細胞增殖與凋亡的影響[J].鄭州大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2015，50（6）：737-740.

[19]柴小軍，王劍云，鄭健，等.食管癌組織中HIF-1α、Survivin、CyclinD 1蛋白的表達及其意義[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2013，13（2）：221-224.

[20]牛朝霞，張秀芝，陳潔，等.Survivin基因沉默抑制食管癌Eca-109細胞的侵襲與遷移[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016，5（21）：185-187.

[21]邱衛(wèi)芳，邱衛(wèi)華.PCAF蛋白在人宮頸癌組織中的表達及其臨床意義[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，36（10）：1128-1129.

[22] Ying M Z，Wang J J，Li D W，et al.The p300/CBP associated factor：is frequently downregulated in intestinal-type gastric carcinoma and constitutes a biomarker for clinical outcome[J].Cancer Biol Ther，2010，9（4）：312-320.

[23]阮佼.胃癌組織中Mina53和Survivin基因的表達及臨床意義[J].中國老年學(xué)雜志，2017，37（13）：3179-3181.

[24]王志紅，鮑德明，石振旺，等.潰瘍型胃癌和癌前病變中PTEN、Survivin的表達及臨床意義[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2015，31（10）：1153-1156.

[25]柴姣.P15和Survivin在早期宮頸癌組織中的表達[J].腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2018，31（2）：104-105.

[26]趙文鵬，路平，苗戰(zhàn)會.P53、survivin在食管癌中的作[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2010，10（6）：1140-1142.