細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制蛋白-1對(duì)高糖環(huán)境下腎小球系膜細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

高美珠　吳家斌　張麗

[摘要] 目的 探討細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制蛋白-1（SOCS-1）及高糖培養(yǎng)條件對(duì)腎小球系膜細(xì)胞（HMC）生長(zhǎng)的影響。方法 體外培養(yǎng)人腎小球細(xì)胞，應(yīng)用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染SOCS-1 siRNA表達(dá)質(zhì)粒及SOCS-1 無(wú)意義siRNA表達(dá)質(zhì)粒。分為：對(duì)照組為甘露醇組;高糖模型組;高糖模型組+SOCS-1 siRNA干擾;高糖模型組+無(wú)意義siRNA，高糖模型組用 DMEM 培養(yǎng)液中加入葡萄糖，終濃度為30 mmol/L;流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡。Western印跡和熒光定量PCR檢測(cè)系膜細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3（STAT3）和核轉(zhuǎn)錄因子KappaB（NF-κB）的表達(dá)。 結(jié)果 高糖+SOCS-1干擾組細(xì)胞凋亡率1.01%，對(duì)照組1.52%，高糖模型組1.95%，SOCS-1 siRNA干擾組細(xì)胞凋亡率下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高糖模型組相對(duì)于對(duì)照組，Western Blot檢測(cè)顯示NF-kB水平表達(dá)上調(diào)[（1.21±0.08） vs （0.47±0.04），t=9.49，P<0.01];STAT3表達(dá)上調(diào)[（1.37±0.12） vs （0.54±0.06），t=10.64，P<0.01];SOCS-1 siRNA干擾組相對(duì)于無(wú)意義siRNA組，NF-kB水平表達(dá)上調(diào)[（0.80±0.08） vs （0.32±0.02），t=10，P<0.01]、STAT3表達(dá)上調(diào)[（0.87±0.10） vs （0.32±0.02），t=9.17，P<0.01]。（RT-PCR檢測(cè)提示高糖模型組相對(duì)于對(duì)照組，NF-kB[（1.15±0.15）vs （0.80±0.16），t=2.9，P<0.05]、STAT3[（0.75±0.02）vs （0.46±0.09），t=5.686，P<0.01]表達(dá)上調(diào);SOCS-1 siRNA干擾組相對(duì)于無(wú)意義siRNA組，NF-kB[（1.15±0.17）vs （0.80±0.09），t=3.18，P<0.05]、STAT3[（0.88±0.06）vs （0.40±0.01），t=13.7，P<0.01]表達(dá)上調(diào)。 結(jié)論 高糖環(huán)境會(huì)上調(diào)HMC的JAK/STAT信號(hào)通路，促進(jìn)HMC的生長(zhǎng);干擾SOCS-1會(huì)上調(diào)JAK/STAT信號(hào)通路，并促進(jìn)NF-κB的表達(dá)，降低細(xì)胞凋亡率，促進(jìn)高糖環(huán)境下HMC的生長(zhǎng)。

[關(guān)鍵詞] SOCS-1;HMC;高糖;STAT3

[中圖分類(lèi)號(hào)] R4? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-0742（2019）07（b）-0037-05

Effect of Cytokine Signal Transduction Inhibitor-1 on the Growth of Mesangial Cells in High Glucose Environment

GAO Mei-zhu， WU Jia-bin， ZHANG Li

Department of Nephrology， Fujian Provincial Hospital， Fuzhou， Fujian Province， 350001 China

[Abstract] Objective To investigate the effects of cytokine signal transduction inhibitor-1 （SOCS-1） and high glucose culture conditions on the growth of mesangial cells （HMC）. Methods Human glomerular cells were cultured in vitro， and SOCS-1 siRNA expression plasmid and SOCS-1 nonsense siRNA expression plasmid were transfected with liposome 2000， and were divided into： control group as the mannitol group; high glucose model group; high glucose model group + SOCS-1 siRNA interference; high glucose model group + meaningless siRNA， high glucose model group with DMEM culture medium added glucose， the final concentration was 30 mmol/L; flow detection of apoptosis; Western blot and real-time PCR were used to detect the expression of mesangial cell signal transduction and transcriptional activator 3 （STAT3） and nuclear transcription factor KappaB （NF-κB）. Results The apoptotic rate was 1.01% in the high glucose+SOCS-1 interference group， 1.52% in the control group， and 1.95% in the high glucose model group. The apoptosis rate of the SOCS-1 siRNA interference group was down-regulated， the difference was statistically significant （P<0.05）. Compared with the control group， Western Blot showed that the expression of NF-kB was up-regulated [（1.21±0.08） vs （0.47±0.04）， t=9.49， P<0.01]; STAT3 expression was up-regulated[（1.37±0.12） vs （0.54±0.06）， t=10.64， P<0.01]; SOC-kB level was up-regulated in SOCS-1 siRNA interference group compared with non-meaningful siRNA group [（0.80±0.08） vs （0.32±0.02）， t=10， P<0.01]， STAT3 expression was up-regulated [（0.87±0.10） vs （0.32±0.02）， t=9.17， P<0.01]. RT-PCR detection indicated that the high glucose model group was compared with the control group， NF-kB [（1.15±0.15） vs （0.80±0.16）， t=2.9， P<0.05]， STAT3[（0.75±0.02） vs （0.46±0.09）， t=5.686， P<0.01] expression up-regulation; SOCS-1 siRNA interference group vs. nonsense siRNA group， NF-kB[（1.15±0.17） vs （0.80±0.09） ， t=3.18， P<0.05]， STAT3 [（0.88±0.06） vs （0.40±0.01）， t=13.7， P<0.01] expression was up-regulated. Conclusion The high glucose environment up-regulates the JAK/STAT signaling pathway of HMC and promotes the growth of HMC. Interfering with SOCS-1 up-regulates JAK/STAT signaling pathway， promotes the expression of NF-κB， decreases the apoptosis rate， and promotes the growth of HMC in high glucose environment.

[Key words] SOCS-1; HMC; High glucose; STAT3

腎小球系膜細(xì)胞（HMC）的過(guò)度增殖是導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化及腎小球硬化的重要原因，甚至?xí)?dǎo)致腎臟病變，典型的例子就是糖尿病并發(fā)癥糖尿病腎病。JAK/STAT（Janus激酶-信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子）信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)一連串蛋白質(zhì)的相互作用造成的轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，受多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子激發(fā)，與細(xì)胞的增殖、分化與腫瘤發(fā)生等多種行為密切相關(guān)[1]。研究顯示在糖尿病腎病的發(fā)病過(guò)程中JAK/STAT信號(hào)通路較為活躍，并發(fā)揮了重要作用[2]，這個(gè)信號(hào)通路中，相應(yīng)的細(xì)胞因子會(huì)促使STAT磷酸化，磷酸化的STAT則會(huì)促進(jìn)下游諸多基因的表達(dá)，SOCS-1在此通路中起著負(fù)調(diào)控因子的作用[3]。糖尿病帶來(lái)高血糖，而糖濃度同樣影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。高糖環(huán)境下腎小球系膜細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，以及SOCS-1在這個(gè)過(guò)程中的作用，是該實(shí)驗(yàn)試圖探索的內(nèi)容。該研究時(shí)間為2017年11月—2018年3月。

1? 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)材料

細(xì)胞系：293T，購(gòu)自北納細(xì)胞資源庫(kù);SOCS-1 siRNA：NCBI查找SOCS1基因序列，種屬為人，設(shè)計(jì)siRNA，將siRNA序列在NCBI中的人源非冗余基因數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast比對(duì)，排除對(duì)SOCS-1之外的基因有干擾的序列，再交由上海生工生物工程股份有限公司合成。

1.2? 試劑與儀器

鼠單克隆抗體GAPDH（中杉金橋， TA-08）;兔多克隆抗體NF-KB（Bioss， bs-0465R）;兔多克隆抗體（STAT3， Boster-A5511）;羊抗鼠IgG （中杉金橋， ZB-2305）;羊抗兔IgG（中杉金橋， ZB-2301）;Annexin V-FITC/PI Apoptosis Kit（MULTI SCIENCES， AP101-100-kit）;流式細(xì)胞儀（艾森生物， NovoCyte 2060R）;Trizon Reagent（康為世紀(jì)， CW0580S）;超純RNA提取試劑盒（康為世紀(jì)，CW0581M）;HiFiScript cDNA Kit（康為世紀(jì)， CW2569M）;UltraSYBR Mixture（康為世紀(jì)， CW0957M）;熒光PCR儀（伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司， CFX ConnectTM） ;細(xì)胞裂解液（普利萊， C1053）;PMSF（索萊寶， A1514061）;超敏發(fā)光液（賽默飛， RJ239676）;BSA（索萊寶， A8020）;冷凍高速離心機(jī)（常州中捷實(shí)驗(yàn)儀器制造有限公司， TGL-16D）;蛋白垂直電泳儀（北京市六一儀器廠(chǎng)， DYY-6C）;超高靈敏度化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司， Chemi DocTM XRS+）;紫外分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司， UV-1600PC型）;BCA蛋白定量試劑盒（康為世紀(jì)， CW0014S）;Acrylamide（Ultra Pure Grade， A8080）;雙丙烯酰胺（DAMAO）;Tris（Solarbio， T8060）;Marker（Thermo， #26617）;PVDF膜（Millipore， IPVH 00010）。

1.3? 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染siRNA

細(xì)胞培養(yǎng)使用DMEM完全培養(yǎng)基，對(duì)照組的DMEM培養(yǎng)液中加入甘露醇，終濃度為30 mmol/L;高糖組的DMEM培養(yǎng)液中加入葡萄糖，終濃度為30 mmol/L，置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中，當(dāng)六孔板中細(xì)胞密度達(dá)90%時(shí)，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染，將DMEM完全培養(yǎng)基取出復(fù)溫;取滅菌的EP管，每管加125 μL Opti-MEM，加入5 μL Lipofectamine;另取EP管，加入質(zhì)?；旌弦?.5 μg，加入5 uL的P3 000輕輕混勻后室溫靜置5 min;將上述兩個(gè)EP管混勻，室溫靜置60 min，將混合液滴到六孔板中對(duì)應(yīng)的孔內(nèi)，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h后用于檢測(cè)。siRNA序列（5'-3'）：SOCS1-siRNA-1的正義鏈：UCGCCCUUAGCGUGAAGAUTT，反義鏈：AUCUUCACG CUAAGGGCGATT;SOCS1-siRNA-2的正義鏈：GGUUG UUGUAGCAGCUUAATT，反義鏈：UUAAGCUACAACAA CAACCTT;SOCS1-siRNA-3的正義鏈：CCCAGUA UCUUUGCACAAATT，反義鏈UUUGUGCAAAGAUACU GGGTT。

1.4? 流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡

使用Apoptosis Positive Control Solution調(diào)整儀器參數(shù)。收集各組細(xì)胞用EP管分裝好后向每管中加入1 mLPBS溶液2 000 rpm/2min，棄上清，重復(fù)3次。離心收集（1～5）×105個(gè)細(xì)胞。每個(gè)樣對(duì)應(yīng)用100 μL的5×Binding Buffer 稀釋到1×作為工作液，取500 uL工作液重懸細(xì)胞。每管加入5 μL Annexin V-FITC 熒光染料和10 μL PI熒光染料。渦旋混勻后，室溫避光孵育5 min。在流式細(xì)胞儀上，通過(guò) FITC 檢測(cè)通道檢測(cè)Annexin V-FITC ，通過(guò)PE檢測(cè)通道檢測(cè) PI。

1.5? Western Blot

取各組細(xì)胞，每組取約106個(gè)細(xì)胞，加入200～300 μL含PMSF的RIPA裂解液，放冰上裂解30 min后，收集到2 mLEP管中，超聲波震蕩5 min。之后于4 ℃，10 000 rpm/min離心10 min，吸取上清，即可獲得總蛋白。根據(jù)BCA試劑盒測(cè)定蛋白樣品濃度，取等量總蛋白上樣進(jìn)行SDS-PAGE電泳2 h，后濕法轉(zhuǎn)PVDF膜50 min。使用脫脂牛奶封閉PVDF膜2 h，之后清洗PVDF膜;置PVDF膜于一抗溶液孵育，4 ℃過(guò)夜;清洗PVDF膜，置于二抗溶液中室溫孵育2 h。在膜上滴加曝光液，在Chemi DocTM XRS+系統(tǒng)中成像拍照，分析各條帶灰度值，目的條帶和內(nèi)參條帶灰度值的比值為目的基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.6? 熒光定量PCR

取各組細(xì)胞進(jìn)行RNA提取，提取RNA后根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，以cDNA為模板，以GAPDH為內(nèi)參，進(jìn)行熒光定量PCR，算出各組細(xì)胞中NF-kB、STAT3的相對(duì)表達(dá)量。引物信息：NF-KB F引物序列為ACCCACCCCACCATCAA，NF-KB R引物序列為CAGAGCCGCACAGCATT，這兩者引物長(zhǎng)度17bp，產(chǎn)物長(zhǎng)度311bp，退火溫度57.7 ℃。STAT3 F引物序列為ACCAAGCGAGGACTGAGCA，引物長(zhǎng)度19bp，STAT3 R引物序列為CCAGACCCAGAAGGAGAAGC，引物長(zhǎng)度20bp，這兩個(gè)引物的產(chǎn)物長(zhǎng)度都為147bp，退火溫度60.5 ℃。GAPDH F引物序列為GAAGGTCGGAGTCAACGGAT，引物長(zhǎng)度20bp，GAPDH R引物序列為CCTGGAAGATGGTGATGGG，引物長(zhǎng)度19bp，這兩個(gè)引物的產(chǎn)物長(zhǎng)度為221bp，退火溫度58.6 ℃。引物合成公司：通用生物系統(tǒng)（安徽）有限公司。

1.7? 統(tǒng)計(jì)方法

所有數(shù)據(jù)均用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，計(jì)量單位用（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 各組細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果

高糖+SOCS-1干擾組細(xì)胞凋亡率（1.01%）低于對(duì)照組（1.52%），而對(duì)照組細(xì)胞凋亡率低于高糖組（1.95%）。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1、圖1。

2.2? Western Blot檢測(cè)NF-kB、STAT3在各組細(xì)胞中的表達(dá)情況

結(jié)果以NF-kB、STAT3與內(nèi)參蛋白表達(dá)條帶的灰度值比表示。結(jié)果見(jiàn)圖2，Western Blot檢測(cè)顯示NF-kB水平表達(dá)上調(diào)[（1.21±0.08）比（0.47±0.04），t=9.49，P<0.001];STAT3表達(dá)上調(diào)[（1.37±0.12）比（0.54±0.06），t=10.64，P<0.001];SOCS-1 siRNA干擾組相對(duì)于無(wú)意義siRNA組，NF-kB水平表達(dá)上調(diào)[（0.80±0.08）比（0.32±0.02），t=10，P<0.01]、STAT3表達(dá)上調(diào)[（0.87±0.10）vs（0.32±0.02），t=9.17，P<0.01]。各組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

2.3? RT-PCR檢測(cè)NF-kB、STAT3在各組細(xì)胞中的表達(dá)情況

高糖模型組相對(duì)于對(duì)照組，NF-kB[（1.15±0.15） vs（0.80±0.16），t=2.9，P<0.05]、STAT3[（0.75±0.02） vs （0.46±0.09），t=5.686，P<0.01]表達(dá)上調(diào);SOCS-1 siRNA干擾組相對(duì)于無(wú)意義siRNA組，NF-kB[（1.15±0.17） vs（0.80±0.09），t=3.18，P<0.05]、STAT3[（0.88±0.06） vs （0.40±0.01），t=13.7，P<0.01]表達(dá)上調(diào)。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖3。

3? 討論

糖尿病腎病已成為導(dǎo)致終末期腎病的首位病因，發(fā)病率高且危害嚴(yán)重[4]。腎小球系膜細(xì)胞的過(guò)度增殖是導(dǎo)致糖尿病腎病腎間質(zhì)纖維化及腎小球硬化的重要原因。其與多種因素有關(guān)，如葡萄糖代謝紊亂，細(xì)胞因子異常表達(dá)，炎癥因子和氧化應(yīng)激[5]。而其中炎癥信號(hào)通路的激活扮演重要角色。現(xiàn)有許多研究顯示，在糖尿病腎病的發(fā)病過(guò)程中JAK/STAT信號(hào)通路較為活躍，并發(fā)揮了重要作用。SOCS-1和SOCS-3在JAK/STAT通路中起著負(fù)調(diào)控因子的作用。SOCS-1能夠調(diào)節(jié)多種生理過(guò)程。在多發(fā)性骨髓瘤中，SOCS-1的表達(dá)異常偏低，相應(yīng)的JAK/STAT3通路持續(xù)活躍，助長(zhǎng)了病癥的惡化[6]。SOCS-1的過(guò)表達(dá)可以調(diào)節(jié)JAK/STAT信號(hào)通路的活性，降低了腎小管上皮細(xì)胞中TNF-α介導(dǎo)的氧化應(yīng)激和凋亡[7]。此外還有研究報(bào)道，SOCS-1協(xié)同TRL家族參與對(duì)病毒的免疫反應(yīng)，這又進(jìn)一步加深了人們對(duì)SOCS-1的調(diào)控的重要性的認(rèn)識(shí)[8]。

該實(shí)驗(yàn)建立了腎小球系膜細(xì)胞高糖模型，并檢測(cè)了高糖培養(yǎng)條件下JAK/STAT信號(hào)通路中STAT3表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)高糖模型組相對(duì)對(duì)照組STAT3表達(dá)上調(diào)，凋亡率也略上調(diào)，而對(duì)JAK/STAT信號(hào)通路中負(fù)調(diào)控因子SOCS-1進(jìn)行siRNA干擾后，其與無(wú)意義siRNA組比較，STAT3表達(dá)上調(diào)[（0.87±0.10） vs （0.32±O.02），P<0.01]。而凋亡率也有明顯下降。這些結(jié)果說(shuō)明高糖會(huì)促使腎小球系膜細(xì)胞JAK/STAT信號(hào)通路上調(diào)，而抑制這個(gè)通路的負(fù)調(diào)控因子SOCS-1后，此通路能進(jìn)一步上調(diào)，并降低細(xì)胞凋亡率，最終促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖。而史永紅等[9]應(yīng)用脂質(zhì)體2000分別轉(zhuǎn)染pCR3.1-SOCS-1表達(dá)質(zhì)粒和pCR3.1空質(zhì)粒載體，與空載體對(duì)照組相比，SOCS-1過(guò)表達(dá)組系膜細(xì)胞STATI和STAT3的磷酸化水平顯著下降（P<0.05）;MCP-1 mRNA表達(dá)下調(diào)[（0.34+0.04）vs（0.42±0.05），P<0.05]。其與該實(shí)驗(yàn)正反兩方面證實(shí)了SOCS-1對(duì)高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞JAK/STAT信號(hào)起負(fù)反饋的作用。近年來(lái)陸續(xù)有研究報(bào)道關(guān)于高糖環(huán)境中SOCS蛋白及信號(hào)通路對(duì)系膜細(xì)胞的影響。PI3K/STAT1/3信號(hào)通路介導(dǎo)高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)積聚和系膜細(xì)胞中SOCS-3的上調(diào)[10]。王晨等[11]以脂質(zhì)體為載體將 PCR3.1 SOCS 3轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的HMC，Western Blot檢測(cè)高糖+SOCS3基因轉(zhuǎn)染組比較高糖+空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組及對(duì)照組，STAT1蛋白酪氨酸磷酸化水平顯著下降[（0.978±0.098）vs（0.645±0.067），P<0.05]。

核轉(zhuǎn)錄因子KappaB（NF-κB）通路是炎癥反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)，參與了糖尿病腎病的發(fā)病。體外試驗(yàn)也證實(shí)了高糖環(huán)境中NF-κB損傷腎小管上皮細(xì)胞[12]。NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)是復(fù)雜的， NF-κB的激活由磷酸化IκBα的多泛素化介導(dǎo)，然后是蛋白酶體降解[13-14]。其穩(wěn)定性受多種蛋白質(zhì)修飾的調(diào)節(jié)，包括磷酸化，泛素化和谷胱甘肽化，以及活性氧和氮的修飾。有學(xué)者研究巨噬細(xì)胞中一氧化氮合成酶1合成的NO導(dǎo)致SOCS1的蛋白水解，減輕其對(duì)NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的抑制[15]。有報(bào)道SOCS2過(guò)表達(dá)可使高糖誘導(dǎo)下的足細(xì)胞中的TLR4/NF-κB途徑失活[16]。但目前為止SOCS-1對(duì)高糖誘導(dǎo)下NF-κB作用的試驗(yàn)研究甚少，而該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SOCS-1 siRNA干擾組相對(duì)于無(wú)意義siRNA組，NF-kB表達(dá)上調(diào)，提示SOCS-1可抑制高糖誘導(dǎo)下系膜細(xì)胞NF-κB的表達(dá)。其具體通過(guò)何種機(jī)制發(fā)揮作用有待進(jìn)一步深入研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? Shuai K ， Liu B . Regulation of JAK–STAT signalling in the immune system[J]. Nature Reviews Immunology， 2003， 3（11）：900-911.

[2]? 糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）誘導(dǎo)下SOCS基因在腎小管上皮細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志， 2008， 17（1）：56-60.

[3]? Kubo M ， Hanada T ，Yoshimura A.Suppressors of cytokine signaling and immunity[J]. Nature Immunology， 2003， 4（12）：1169-1176.

[4]? Chokhandre M K， Mahmoud M I， Hakami T， et al.Vitamin D & its analogues in type 2 diabetic nephropathy： a systematic review[J].Journal of Diabetes & Metabolic Disorders， 2015， 14（1）：58.

[5]? An Y ， Xu F ， Le W ， et al. Renal histologic changes and the outcome in patients with diabetic nephropathy[J]. Nephrology Dialysis Transplantation， 2015，30（2）：257-266.

[6]? Beldiferchiou A ， Skouri N ， Ali C B ， et al. Abnormal repression of SHP-1， SHP-2 and SOCS-1 transcription sustains the activation of the JAK/STAT3 pathway and the progression of the disease in multiple myeloma[J].Plos One， 2017， 12（4）：e0174835.

[7]? Du CY，Yao F，Ren YZ， et al.SOCS-1 is involved in TNF-α-induced mitochondrial dysfunction and apoptosis in renal tubular epithelial cells[J].Tissue and Cell.2017，49（5）：537-544

[8]? Paul A M ， Acharya D ， Le L， et al. TLR8 Couples SOCS-1 and Restrains TLR7-Mediated Antiviral Immunity， Exacerbating West Nile Virus Infection in Mice[J].The Journal of Immunology， 2016， 197（11）：4425.

[9]? 史永紅，杜春陽(yáng)，任韞卓，等.細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白1抑制高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞單核細(xì)胞趨化蛋白1的表達(dá)[J].中華腎臟病雜志，2010，26（5）：352-357.

[10]? Sheu M L ， Shen C C ， Jheng J R ， et al. Activation of PI3K in response to high glucose leads to regulation of SOCS-3 and STAT1/3 signals and induction of glomerular mesangial extracellular matrix formation[J].Oncotarget， 2017， 8（10）：16925-16938.

[11]? 王晨，魏榮，張曉琴，等.細(xì)胞因子信號(hào)負(fù)調(diào)控因子3基因轉(zhuǎn)染對(duì)高糖刺激下腎小球系膜細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J].中國(guó)藥物與臨床，2015（5）：568-571.

[12]? Zhou L， Xu D ， Sha W ， et al. High glucose induces renal tubular epithelial injury via Sirt1/NF-kappaB/microR-29/Keap1 signal pathway[J].Journal of Translational Medicine， 2015， 13（1）：352.

[13]? Won M ， Byun H S ， Park K A ，et al. Post-translational control of NF-κB signaling by ubiquitination[J]. Archives of Pharmacal Research，2016，39（8）：1075-1084.

[14]? Ikeda， Fumiyo. Linear ubiquitination signals in adaptive immune responses[J]. Immunological Reviews， 2015，266（1）：222-236.

[15]? Baig M S ，Zaichick S V ，Mao M ， et al.NOS1-derived nitric oxide promotes NF-κB transcriptional activity through inhibition of suppressor of cytokinesignaling-1[J]. Journal of Experimental Medicine，2015，212（10）：1725-38.

[16]? Yang S X，Zhang J，Wang S Y， et al.SOCS2 overexpression alleviates diabetic nephropathy in rats by inhibiting the TLR4/NF-κB pathway[J].Oncotarget，2017，8（53）： 91185–91198.