細(xì)胞蠟塊對惡性胸腹水的診斷價值

范紅蕓 韓燁 王貝 曾祥勝 李明

[摘要] 目的 通過對惡性胸腹水實(shí)施不同的診斷方法，觀察其臨床效果，探究不同診斷方法的臨床應(yīng)用特點(diǎn)。 方法? 從來該院診治的2018年7月—2019年2月的晚期腫瘤合并惡性胸腹水患者中隨機(jī)抽取79例，采用隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為對照組39例：實(shí)施常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查，觀察組40例：實(shí)施細(xì)胞蠟塊檢查，觀察兩組患者檢出率和惡性胸腹水上皮腫瘤標(biāo)志物表達(dá)情況。 結(jié)果 觀察組經(jīng)過細(xì)胞蠟塊檢查檢出例數(shù)為30例，檢出率為75.00%，對照組經(jīng)過常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查檢出例數(shù)為20例，檢出率為51.28%，觀察組檢出率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=14.442，P<0.05）;觀察組患者經(jīng)過細(xì)胞蠟塊HE染色后背景較為干凈，同時，腫瘤細(xì)胞異型性明顯，呈腺管狀和乳頭狀排列;轉(zhuǎn)移性惡性胸腹水中的moc-31表現(xiàn)敏感，定位明確;在大部分腺癌中CEA具有較高的表達(dá)水平，染色背景較重。 結(jié)論 細(xì)胞蠟塊與常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查相比，惡性胸腹水患者檢出率明顯提高，腫瘤病灶來源可以被確定，臨床確診率升高，幫助臨床醫(yī)師做到對癥治療，減少患者痛苦，值得臨床推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 細(xì)胞蠟塊;惡性胸腹水;細(xì)胞學(xué)檢查

[中圖分類號] R730? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2019）07（c）-0034-03

Diagnostic Value of Cell Wax Block for Malignant Hydrothorax and Ascites

FAN Hong-yun， HAN Ye， WANG Bei， ZENG Xiang-sheng， LI Ming

Department of Pathology， Xuyi People's Hospital， Xuyi， Jiangsu Province， 211700 China

[Abstract] Objective To observe the clinical effects of different diagnostic methods for malignant hydrothorax and ascites， and to explore the clinical application characteristics of different diagnostic methods. Methods 79 patients with advanced tumors with malignant hydrothorax and ascites from July 2018 to February 2019 were randomly selected from our hospital. They were randomly divided into control group by 39 patients： routine cytology， observation group 40 cases： the cell wax block examination was performed to observe the detection rate of the two groups of patients and the expression of tumor markers in malignant chest and abdomen. Results The number of cases detected by the cell wax block in the observation group was 30， the detection rate was 75.00%， and the number of cases detected by routine cytology in the control group was 20， the detection rate was 51.28%. The detection rate of the observation group higher than the control group，the difference was statistically significant（χ2=14.442， P<0.05）. The background of the observation group was clean after HE staining with cell wax block. At the same time， the tumor cells were abnormally shaped， and they were glandular and papillary; metastatic malignant ascites moc-31 is sensitive and well-defined; in most adenocarcinomas， CEA has a higher expression level and a heavier staining background. Conclusion Compared with conventional cytology， the detection rate of malignant hydrothorax and ascites patients is significantly improved. The source of tumor lesions can be determined and the clinical diagnosis rate is increased. It helps clinicians to achieve symptomatic treatment and reduces patient suffering. It is worthy of clinical promotion and application.

[Key words] Cell wax block; Malignant chest and ascites; Cytology

惡性胸腹水是由于癌性病變或者惡性腫瘤而引起胸腔壁層和腹腔出現(xiàn)彌漫性病變，患者體腔液體發(fā)生異常是該病的典型病理改變，降低患者生活質(zhì)量，甚至?xí){患者生命[1]。惡性胸腹水是癌癥患者晚期的主要并發(fā)癥，提示病灶具有發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移傾向[2-3]。分子診斷技術(shù)、免疫組織化學(xué)抗體、細(xì)胞蠟塊技術(shù)呈發(fā)展趨勢，為漿膜腔積液脫落細(xì)胞學(xué)樣本提供有效信息。細(xì)胞蠟塊可以明確漿膜腔積液的性質(zhì)、以及為靶向治療提供可靠的診斷依據(jù)。有研究顯示，細(xì)胞蠟塊應(yīng)用于胸腔積液中，但是在惡性胸腹水方面的研究較少[4-5]。因此，從來該院診治的2018年7月—2019年2月的晚期腫瘤合并惡性胸腹水患者中隨機(jī)抽取79例，采用隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為對照組39例：實(shí)施常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查，觀察組40例：實(shí)施細(xì)胞蠟塊檢查，現(xiàn)報道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

從來該院診治的晚期腫瘤合并惡性胸腹水患者實(shí)施隨機(jī)抽取79例，37例女性，42例男性，年齡范圍在42～91歲，平均年齡為（56.34±3.25）歲，其中有20胃癌，10例卵巢癌，36例肺癌，8例卵巢癌，5例直腸癌。通過隨機(jī)數(shù)字法將79例患者隨機(jī)分為兩組，即對照組39例，其中女性18例，男性21例，平均年齡為（55.76±4.16）歲;觀察組40例，其中女性19例，男性21例，平均年齡為（55.35±3.97）歲。該研究通過該院倫理委員會的批準(zhǔn)，并經(jīng)過研究對象知情同意，自愿簽署知情同意書，兩組患者的基本資料統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），可以進(jìn)行比較。

納入標(biāo)準(zhǔn)：被診斷為惡性腫瘤;伴隨胸腹水癥狀[6];通過病理學(xué)檢查，被確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴隨嚴(yán)重的認(rèn)知障礙或者嚴(yán)重結(jié)果精神類疾病患者;依從性較差患者;合并兩種或者以上腫瘤疾病患者。

1.2? 方法

對照組患者通過常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查，首先針對胸腹水采用離心涂片方法進(jìn)行處理（TD24-WS 低速臺式離心機(jī) ，湖南湘儀實(shí)驗室儀器開發(fā)有限公司），隨后實(shí)施細(xì)胞學(xué)檢查。

觀察組實(shí)施細(xì)胞蠟塊檢查：試劑盒采用S-P試劑盒、CK、P53、CEA、Cal、DAB顯示劑（福州邁新生物試劑有限公司）。首先將每位患者的胸腹水制作為標(biāo)本，將放置冰箱的溫度設(shè)置為4℃，保持20 min;標(biāo)本內(nèi)物質(zhì)發(fā)生自然沉淀，收集標(biāo)本沉淀物，并進(jìn)行10 min離心，取上清，將沉淀物收集起來，將劑量定為50～100 mL，放如離心管中進(jìn)行5 min離心，取上清;在上清液中加入固定液AF液（800 mL水+3 700 mL95%乙醇混合液+500 mL甲醛原液+2包PBS緩沖鹽），搖勻并靜置10分鐘;離心5～10 min（3 000 r/min），去除AF液;把標(biāo)本沉渣做成細(xì)胞塊，放在10%中性甲醛固定液，放置時間為4～6 h，完成后進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片。胸腹水蠟塊制作完成后，對切片脫蠟，經(jīng)過兩次PBS緩沖液沖洗，每次持續(xù)3 min，緊接著利用3%氯化氫封存八分鐘后再用PBS緩沖液沖洗;隨后采用檸檬酸沖液進(jìn)行高壓修復(fù)，時間為90 s;通過自然冷卻，經(jīng)過兩次沖洗，每次沖洗保證3 min;添加一抗，在37℃孵育箱內(nèi)孵育1 h;完成后，經(jīng)過兩次緩沖液連續(xù)沖洗，沖洗時間為5 min/次，隨后添加二抗，在37℃孵育箱內(nèi)孵育30 min，經(jīng)過緩沖液沖洗后，添加DAB顯色液;隨后經(jīng)過自來水充分沖洗，使用蘇木精進(jìn)行復(fù)染，然后脫水、封片。

1.3? 統(tǒng)計方法

該研究數(shù)據(jù)的整理和分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 兩組患者的檢出率比較情況

觀察組患者檢出例數(shù)為30例，占75.00%，對照組患者檢出例數(shù)為20例，占51.28%，觀察組檢出率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=14.442，P<0.05），見表1。

2.2? 兩組患者惡性胸腹水上皮腫瘤標(biāo)志物表達(dá)情況

觀察組患者標(biāo)本經(jīng)過HE染色后背景較為明顯，干凈，腫瘤細(xì)胞異型性較為明顯，呈腺管狀和乳頭狀排列;轉(zhuǎn)移性惡性胸腹水中的moc-31表現(xiàn)敏感，定位明確;在大部分腺癌中CEA具有較高的表達(dá)水平，染色背景較重。

3? 討論

惡性胸腹水在臨床較為常見，是發(fā)生在全身性癌變或者胸腹腔惡性腫瘤所引起腹腔臟壁層和胸腔內(nèi)的彌散性病變[7]。這樣的病變導(dǎo)致體腔液體異常增長，被稱為惡性胸腹水[8]。其發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，與血管內(nèi)外液體交換、體內(nèi)外液體交換失衡有關(guān)系?；颊吆粑δ芤驗樾馗顾惓×以鲩L而受到影響，循環(huán)系統(tǒng)正常運(yùn)行受到損傷，嚴(yán)重的患者可能發(fā)生死亡。臨床上通過腔引流術(shù)或者胸腔引流術(shù)針抽取晚期腫瘤合并惡性胸腹水患者的胸腹水，進(jìn)行常規(guī)病理涂片檢查，做出診斷。但是，常規(guī)細(xì)胞學(xué)涂片內(nèi)的細(xì)胞核容易發(fā)生重疊，有的涂片太厚，診斷結(jié)果受到影響。同時，受到取材限制，經(jīng)過多次涂片才可以檢出異常的細(xì)胞，同時根據(jù)異常細(xì)胞不能診斷惡性腫瘤細(xì)胞，增加涂片難度，引起細(xì)胞發(fā)生變形，免疫組化鑒別受到阻撓。惡性胸腹水的明確診斷較為復(fù)雜。惡性胸腹水臨床診斷常選用細(xì)胞學(xué)檢查，與正常細(xì)胞相比容易脫落，可以通過多種方法獲得組織顆?；蛘吡鼋M織，進(jìn)行性質(zhì)鑒定。利用穿刺法采集深在的瘤細(xì)胞，利用印片法收集淺表瘤體表面的細(xì)胞，利用拉網(wǎng)法收集胃、食管所脫落的細(xì)胞，而腹腔沖洗液、胸水、痰以及腹水內(nèi)的細(xì)胞的收集可用濃集法，該種方法可因為各種因素破壞惡性腫瘤細(xì)胞并將分化良好的腺癌細(xì)胞與增生細(xì)胞形態(tài)相混淆，或者脫落到漿膜腔中腫瘤細(xì)胞較少等現(xiàn)象，細(xì)胞學(xué)檢查具有較低的靈敏度，影響診斷惡性胸腹水的臨床效果。有研究顯示，多種生化指標(biāo)聯(lián)合鑒別胸腹水性質(zhì)，提高惡性胸腹水的準(zhǔn)確度、特異度以及靈敏度，但是，該種方法只在腫瘤細(xì)胞脫落于漿膜腔積液或者胸腹腔積液內(nèi)的的效果最佳[9]。

該研究顯示經(jīng)過細(xì)胞蠟塊檢查觀察組檢出率為75.00%高于對照組，這與黃榕芳等[10]的研究中，細(xì)胞蠟塊組檢出率78%高于常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查組的結(jié)果一致;觀察組患者經(jīng)過細(xì)胞蠟塊HE染色后背景較為干凈，同時，腫瘤細(xì)胞異型性明顯，呈腺管狀和乳頭狀排列;轉(zhuǎn)移性惡性胸腹水中的moc-31表現(xiàn)敏感，定位明確;在大部分腺癌中CEA具有較高的表達(dá)水平，染色背景較重。細(xì)胞病理學(xué)與組織病理學(xué)比較，傳統(tǒng)細(xì)針吸取涂片存在缺點(diǎn)如下：難以還原組織學(xué)結(jié)構(gòu)、難以進(jìn)行特殊染色、樣本量少以及無法重復(fù)切片等。主要用于惡性胸腹水篩查或者提供傾向性診斷依據(jù)。傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)所存在的缺陷可通過細(xì)胞蠟塊檢查技術(shù)進(jìn)行彌補(bǔ)，細(xì)胞蠟塊檢查具有多種優(yōu)點(diǎn)如微創(chuàng)性、可重復(fù)切片、簡便。細(xì)胞蠟塊的臨床意義如下：①細(xì)胞蠟塊在檢查腫瘤細(xì)胞可以觀察到細(xì)胞分型，有助于患者后續(xù)治療，細(xì)胞蠟塊技術(shù)的準(zhǔn)確性比脫落細(xì)胞學(xué)高，儲存方便，診斷明確度高[11]。②細(xì)胞蠟塊切片可以避免經(jīng)過常規(guī)檢查的惡性胸腹水患者因過氧化氫酶增多而產(chǎn)生泡沫引起脫片的現(xiàn)象。③細(xì)胞蠟塊腫瘤標(biāo)志物可以節(jié)省試劑，避免檢查邊緣現(xiàn)象的發(fā)生，檢查準(zhǔn)確性提高。

綜上所述，細(xì)胞蠟塊與常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查相比，惡性胸腹水患者檢出率明顯提高，腫瘤病灶來源可以被確定，臨床確診率升高，幫助臨床醫(yī)師做到對癥治療，減少患者痛苦，值得臨床推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2019-04-26）